微小RNA-93靶向大型肿瘤抑制因子2对肾癌细胞GRC-1增殖及凋亡的影响

目的观察微小RNA（miRNA，miR）-93靶向大型肿瘤抑制因子2（LATS2）对肾癌细胞GRC-1增殖及凋亡的影响。方法选取人肾癌细胞GRC-1，双荧光素酶报告基因实验验证miR-93与LATS2的靶向关系。分别转染Neg-miR、pre-miR-93、anti-miR-93至肾癌细胞GRC-1，采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测miR-93表达，Western blot检测LATS2蛋白表达，噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖活性，流式细胞仪检测细胞凋亡。结果miR-93与LATS2存在结合位点。与转染Neg-miR比较，共转染pre-miR-93与LATS2-wt可使GRC-1荧光素酶活性降低（P＝0.000）。与Neg-miR组比较，pre-miR-93组miR-93表达上调，LATS2蛋白表达降低（P＝0.000）；anti-miR-93组miR-93表达降低，LATS2蛋白表达增高（P＝0.000）。与Neg-miR组比较，pre-miR-93组细胞增殖活性增高，同时凋亡率降低（P＝0.000）；anti-miR-93组细胞增殖活性降低，同时凋亡率增高（P＝0.000）。结论miR-93可通过靶向LATS2调控肾癌细胞增殖及凋亡。

微小RNA-25靶向大型肿瘤抑制因子2对结肠癌细胞增殖及凋亡的影响

目的观察微小RNA（miRNA，miR）-25靶向大型肿瘤抑制因子2（LATS2）对结肠癌细胞增殖及凋亡的影响。方法选取人结肠癌细胞HT29，转染Neg-miR、pre-miR-25、anti-miR-25，采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测miR-25表达，Western blot检测LATS2蛋白表达，噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖活性，流式细胞仪检测细胞凋亡。双荧光素酶报告基因实验验证miR-25与LATS2的靶向关系。结果与Neg-miR组比较，pre-miR-25组miR-25表达上调（0.37±0.08比0.78±0.14）（t=3.871，P=0.028），LATS2蛋白表达降低（157.32±32.11比56.47±11.35） （t=4.012，P=0.026）；anti-miR-25组miR-25表达降低（0.37±0.08比0.11±0.04）（t=4.275，P=0.025），LATS2蛋白表达增高（157.32±32.11比382.74±55.28）（t=4.663，P=0.021）。与Neg-miR组比较，pre-miR-25组细胞增殖活性增高（0.37±0.04比0.48±0.02，0.62±0.05比0.90±0.02，0.89±0.03比1.10±0.04）（t=2.998、3.372、3.012，P=0.045、0.035、0.041），同时凋亡率降低[（8.52±1.11）%比（2.94±0.81）%，t=4.425，P=0.018]；anti-miR-25组细胞增殖活性降低（0.37±0.04比0.30±0.03，0.62±0.05比0.42±0.04，0.89±0.03比0.50±0.05）（t=2.895、3.237、4.002，P=0.048、0.038、0.021），同时凋亡率降低[（8.52±1.11）%比（15.01±2.53）%，t=4.518，P=0.016]。miRNA靶基因预测软件检测结果显示，miR-25能作用于LATS2 3’端非编码区域（3’UTR）。与转染Neg-miR比较，共转染pre-miR-25与LATS2-wt可使HT29荧光素酶活性降低（t=3.285，P=0.033）。结论miR-25可通过靶向LATS2调控结肠癌细胞增殖及凋亡。

Lnc RNA PVT1通过LATS2对宫颈癌生物学行为及预后的影响

目的探讨长链非编码RNA PVT1(lncRNA PVT1)通过大型肿瘤抑制因子2(LATS2)对宫颈癌生物学行为及预后的影响。方法利用荧光定量实时PCR(qRT-PCR)测定成对的癌及癌旁组织lncRNA PVT1、LATS2的表达。在Hela细胞中转染PVT1 siRNA,观察PVT1下调对LATS2表达量的影响。结果lncRNA PVT1在宫颈癌组织中表达水平明显高于癌旁正常组织(P<0.05),LATS2的表达水平明显低于癌旁正常组织(P<0.05),两者表达为负相关。lncRNA PVT1沉默能够显著降低Hela细胞的增殖、迁移、侵袭能力(均P<0.05),并增加Hela细胞的凋亡率(P<0.05)。lncRNAPVT1高表达患者的生存时间明显短于低表达者(P<0.05)。FIGO临床分期、淋巴结转移、肿瘤浸润深度及ncRNA PVT1表达水平都可作为宫颈癌患者独立的预后因子(P<0.05)。结论lncRNA PVTl能够抑制LATS2表达而增强癌细胞的增殖、迁移、侵袭能力,降低癌细胞的凋亡率,且lncRNA PVTl表达可作为宫颈癌患者独立的预后因子。

盐酸吉西他滨对乳腺癌小鼠Tusc2、Lats2基因表达的影响

目的探讨盐酸吉西他滨对乳腺癌小鼠肿瘤抑制因子候选基因2(Tusc2)、大型肿瘤抑制因子2(Lats2)基因mRNA及蛋白水平表达的影响。方法首先建立小鼠乳腺癌模型,盐酸吉西他滨药物处理前(0d)、处理后第5天(5d)、处理后第10天(10d)分别取材,采用RT-PCR和Western blotting方法检测Tusc2、Lats2基因表达量的变化。结果盐酸吉西他滨作用乳腺癌小鼠第10天(10d)后,RT-PCR结果显示,与空白对照组相比,实验组Tusc2与Lats2 mRNA相对表达量分别增加约4.5倍与8倍(P<0.05),其余各组与相应空白对照组相比,相对表达量无统计学差异(P>0.05);同时Western blotting结果显示,实验组与空白对照组相比,TUSC2与LATS2蛋白相对表达量分别上调约10倍与5倍(P<0.05)。其他各组之间相比统计学无显著差异(P>0.05)。结论盐酸吉西他滨能有效上调乳腺癌小鼠体内Tusc2、Lats2基因的表达。

子宫内膜癌组织微小RNA-373表达情况及其对子宫内膜癌细胞增殖、迁移的影响研究

背景微小RNA-373 (miRNA-373)在多种恶性肿瘤(如肝癌、肺癌)的发生发展过程中具有重要作用,但其在子宫内膜癌(EC)发生发展中的作用尚不完全清楚。目的探讨EC组织miRNA-373表达情况及其对EC细胞增殖、迁移的影响。方法选取2012年6月-2013年6月在邯郸市妇幼保健院行手术治疗的64例EC患者的EC组织作为试验组,另选取同期在邯郸市妇幼保健院行子宫切除术的30例良性子宫肌瘤患者的正常组织作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测两组miRNA-373表达情况,绘制Kaplan-Meier生存曲线以分析不同miRNA-373表达情况EC患者术后5年预后;分别比较转染miRNA-373模拟物(miRNA-373 mimic)及其阴性对照物(mimic-NC)、miRNA-373抑制剂(miRNA-373 inhibitor)及其阴性对照物(inhibitor-NC)的HEC-1B细胞大型肿瘤抑制基因2 (LATS2)表达情况、转染96 h后吸光度值、迁移细胞数量;采用双荧光素酶报告基因系统验证miRNA-373与LATS2间的靶标关系。结果 (1)试验组miRNA-373相对表达量高于对照组(P<0.05)。根据miRNA-373相对表达量平均值将试验组患者分为低表达组(n=26)和高表达组(n=38),Kaplan-Meier生存曲线显示,高表达组患者术后5年累积生存率为52.6%,低于低表达组的84.6%(P<0.05)。(2)转染miRNA-373 mimic的HEC-1B细胞LATS2相对表达量低于转染mimic-NC的HEC-1B细胞(P<0.05);转染miRNA-373 inhibitor的HEC-1B细胞LATS2相对表达量高于转染inhibitor-NC的HEC-1B细胞(P<0.05)。转染96 h后,转染miRNA-373 mimic的HEC-1B细胞吸光度值高于转染mimic-NC的HEC-1B细胞(P<0.05);转染miRNA-373 inhibitor的HEC-1B细胞吸光度值低于转染inhibitor-NC的HEC-1B细胞(P<0.05)。转染miRNA-373 mimic的HEC-1B细胞中迁移细胞数量多于转染mimic-NC的HEC-1B细胞(P<0.05);转染miRNA-373 inhibitor的HEC-1B细胞中迁移细胞数量少于转染inhibitor-NC的HEC-1B细胞(P<0.05)。(3)双荧光素酶报告基因系统检测结果显示,LATS2含有miRNA-373的潜在结合位点。野生型LATS2中miRNA-373相对荧光强度低于空载对照(P<0.05);突变型LATS2中miRNA-373相对荧光强度与空载对照比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 EC组织miRNA-373呈高表达,其可通过直接靶向调节LATS2的表达而促进EC细胞增殖、迁移,进而影响EC患者预后。

微RNA-378促进肾癌细胞增殖和迁移及其机制研究

目的 :探讨微RNA-378(micro RNA-378,mi R-378)对肾癌细胞体外增殖和迁移能力的影响,以及其可能的作用机制。方法 :利用TCGA(e Cancer Genome Atlas)数据库分析肾癌和正常肾上皮组织中mi R-378的表达情况。采用实时荧光定量PCR法检测人肾癌细胞系786-O、ACHN、769-P和Caki-1,以及人肾小管上皮细胞系HK2中mi R-378的表达情况。人工合成mi R-378模拟物(mimic)和抑制子(inhibitor),并将它们分别转染肾癌786-O和Caki-1细胞,然后分别采用CCK-8法、Transwell小室法和划痕愈合实验检测mi R-378对肾癌细胞增殖和迁移的影响。通过生物信息学方法分析mi R-378的靶基因,并采用实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法进行验证。结果 :肾癌组织和肾癌细胞系中mi R-378表达均明显上调(P值均<0.001)。mi R-378 mimic转染后,肾癌786-O细胞的体外增殖(P<0.01)和迁移(P<0.001)能力均明显增强;而mi R-378 inhibitor转染后,肾癌Caki-1细胞的体外增殖(P<0.01)和迁移(P<0.001)能力均明显减弱。肾癌中mi R-378的靶基因可能是大型肿瘤抑制因子2(large tumor suppressor 2,LATS 2),肾癌786-O和Caki-1细胞中LATS2 m RNA和蛋白表达水平与mi R-378水平均负相关(P值均<0.01)。结论 :mi R-378过表达可增强人肾癌细胞的增殖和迁移能力,其机制可能与负调控LATS2表达有关。