基于转录组测序筛选母马大小卵泡中颗粒细胞相关上调基因

在这项研究中,通过采用转录组测序来筛选马的大卵泡和小卵泡的颗粒细胞中的差异表达基因。样本取自三匹蒙古马的大卵泡颗粒细胞和小卵泡颗粒细胞,对上调的基因进行了GO和KEGG信号通路的分析,并使用荧光定量PCR验证了差异表达的基因。结果表明:GO分析分为3大类50组,其中50%的基因参与生物学过程(BP),30%的基因参与细胞组成成分(CC),20%的基因参与分子功能(MF);KEGG信号通路分析发现了9条通路,其中参与细胞外基质受体相互作用通路的基因富集程度最为明显。在小卵泡中筛选出7个上调基因(col1a2、col6a1、col6a2、grem、mgp、bgn、ens)。根据荧光定量PCR的结果,这些基因在小卵泡颗粒细胞中的表达远远高于大卵泡。根据研究结果,在小卵泡中可能需要更丰富的转录物表达,以便为将来转化为优势卵泡的发展可能性提供物质准备。

不同大小卵泡的卵母细胞质量差异分析

目的探讨不同大小卵泡内的卵母细胞成熟、受精及胚胎质量的差异。方法对219例接受IVF-ET治疗的患者224个IVF-ET治疗周期的卵子及胚胎质量进行回顾性分析。结果大卵泡组和小卵泡组在成熟率(94.1%vs85.6%,P<0.001)、受精率(85.3%vs74.3%,P<0.05)、优质胚胎率(64.7%vs46.7%,P<0.05)方面差异均有显著性。中卵泡组的成熟率和受精率与大卵泡组相似,但优质胚胎率下降趋势明显(56.7%)。结论不同直径大小卵泡的卵母细胞及其胚胎质量存在差异。在努力提高卵子质量的同时,亦不可放弃中小卵泡。

卵泡大小及卵泡液对牛卵母细胞体外受精后发育的影响

以屠宰场牛卵巢为材料,研究了卵泡大小和卵泡液对牛卵母细胞体外成熟、受精和培养后发育潜力的影响。试验1:按照卵泡大小将卵丘卵母细胞复合体(COCs)分为4个试验组:>8mm组、2～8mm组、腔前卵泡(PF)卵母细胞组和混合(将前3种卵母细胞混合)组。结果表明,卵泡大小直接影响卵母细胞受精后的发育,同时,源自不同大小卵泡的卵母细胞混合培养,可以促进未成熟的腔前卵泡内卵母细胞的发育。试验2:将源自优势卵泡(>8mm)、小卵泡(2～8mm)和混合(所有卵泡液混合)的牛卵泡液(BFF),按照10%添加到成熟培养液中,3个试验组的卵裂率和囊胚率均高于没有添加BFF的对照组(P<0.05),但添加10%的优势卵泡液使卵母细胞和胚胎发生粘连,易于造成丢失。试验3:与未添加BFF的对照组相比,成熟培养液中分别加入10%、20%和40%的混合BFF,均可明显促进卵母细胞受精后的发育(P<0.05),但20%组和40%组出现卵母细胞及胚胎粘连。因此,成熟培养液中添加10%的混合BFF较为适宜。

取卵日卵泡大小对体外受精后胚胎早期发育影响的护理研究

目的 探讨护理人员取卵日监测卵泡大小对体外受精-胚胎移植（IVF-ET）中卵子成熟及胚胎早期发育的影响.方法 以2012年3月～ 2013年12月来山东省枣庄市妇幼保健院生殖中心行IVF-ET的87个患者为研究对象,研究方法以HCG注射日辅助生殖专职护士进行健康支持教育,取卵日经过专职培训的手术室护士监测观察卵泡直径为依据,对取卵日卵泡大小进行监测、评估、测量液体量,按照卵泡大小将其分大卵泡组、中卵泡组和小卵泡组.取卵手术过程中详细告知实验室人员取出卵泡的大小、取出的液体量.结果 取卵日直径大于15 mm的卵泡获得的卵母细胞成熟度较高（P＜0.01）;（2）大卵泡组卵泡优胚率高于中卵泡组,中卵泡组高于小卵泡组,差异极显著（P＜0.01）.结论 在IVF-ET中,手术室护士通过严密观察、监测卵泡的大小,对实验室人员的详细告知,实验室人员将获得的卵子严格按照大、中、小分类培养,对优质胚胎的获得提供了良好的条件,有利于提高卵子的成熟、受精和早期胚胎发育;有利于提高体外受精-胚胎移植成功率.

卵泡大小对人工授精排卵率及临床妊娠率的影响

目的 :探讨扳机日卵泡大小与夫精宫腔内人工授精排卵率及临床妊娠率的关系。方法 :不孕症患者161例307个治疗周期,根据扳机日卵泡最大平均直径分为:A组9个周期(16.0~16.9 mm),B组59个周期(17.0~17.9 mm),C组103个周期(18.0~18.9 mm),D组82个周期(19.0~19.9 mm),E组32个周期(20.0~20.9 mm),F组17个周期(21.0~21.9 mm),G组5个周期(≥22.0 mm),研究扳机日主导卵泡大小与排卵率及临床妊娠率的相关性。结果:A^G组的排卵率分别为55.6%、71.2%、95.1%、82.9%、87.5%、88.2%、80.0%,C组最高,A组最低,差异有统计学意义(P<0.05及P<0.01),B^F组临床妊娠率分别为16.9%、14.6%、18.3%、12.5%、11.8%,A组及G组无1例妊娠,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:在夫精宫腔内人工授精治疗过程中,在卵泡大小为17.0-20.0 mm间行扳机能获得较高的排卵率和临床妊娠率。

卵泡真实大小与受精及胚胎质量的相关性研究

背景胚胎质量是影响生育结局的决定性因素。目前,临床上依靠超声下卵泡测量径线间接评估卵母细胞发育成熟度,但在多卵泡发育情况下超声测量难度大、精准度低。临床上广泛使用的经验值、扳机时机均需要准确的数据支持。目的本文通过直接测定卵泡液体积、计算卵泡径线以获得卵泡真实大小,用更精确的指标探究其与受精及胚胎质量的关系。方法选取2022年9月-2023年1月于解放军总医院第一医学中心生殖中心行辅助生殖助孕的42例女性,在超声下对单个卵泡进行穿刺取卵,测量所获卵泡液体积,根据体积公式V=4/3πR^(3)换算为卵泡直径。每个卵泡按换算后直径分为7组:<13 mm、13~15 mm、15~17 mm、17~19 mm、19~21 mm、21~23 mm、≥23 mm。每个卵泡对应的卵母细胞、受精卵及胚胎均单独处置,并观察胚胎的发育情况。结果42例辅助生殖女性平均年龄为(36.27±4.34)岁。共获卵277枚,形成受精卵122枚,形成胚胎122枚(其中优质胚胎97枚)。<13 mm卵泡中卵母细胞受精率最高(83.3%),但不同体积卵泡组间的受精率差异无统计学意义(P>0.05)。不同体积卵泡的优胚率不同,13~15 mm卵泡优胚率最高(87.5%),13~21 mm卵泡较更大卵泡优胚率更高(P=0.017),其中15~17 mm卵泡的胚胎评级最好(P=0.034)。结论卵泡大小与胚胎潜能和胚胎质量显著相关。较小的卵泡不易于产生优质胚胎,但卵泡过大也会降低胚胎质量,15~17 mm卵泡具有更高的优胚率,胚胎潜能和质量更佳。

青年母牛卵泡大小与妊娠成功的关系

早期研究表明:经产母牛输精期卵泡大小显著影响其受胎率和授精后胚胎/胎儿死亡率,但对自然排卵的母牛受胎率没有影响。本研究目标是分析青年母年受胎率、胚胎/胎儿死亡率同排卵前期卵泡大小、诱导或自发排卵后血液循环中雌二醇浓度之间的关系。青年母牛分为成2组不同的繁殖牛群进行人工授精:①利用同期发情和诱导排卵后授精(TAI,n=98);②在23 d发情周期中,利用电子检测仪检测母牛发情后12 h授精(自然排卵,n=110)。利用直肠超声波检查输精时卵泡大小和输精后27、41、55和68d怀孕状态。测定的青年母牛中仅有6头出现后期胚胎或早期胎儿死亡。繁殖牛群和卵泡大小的相互作用并不影响母牛受胎率。结合繁殖牛群数据分析,卵泡大小对受胎率的对数回归特征表现为曲线(P<0.01),并且预测出卵泡大小为12.8mm时,受胎率最高(为68.0±4.9%)。卵泡直径小于10.7 mm或大于15.7 mm时,受胎率都较直径为12.8 mm卵泡低。直径小于10.7 mm卵泡(有28%的青年母牛妊娠)则比大于15.7 mm的卵泡(仅有4%)更易受孕。授精后24 h内有发情行为的青年母牛所排卵泡直径(12.2±0.2 mm)、雌二醇浓度(9.9±0.6)以及妊娠率(63%)都显著高于无发情行为的母牛(分别为11.1±0.3mm,6.6±0.7,20%)(P<0.01)。然而,对卵泡大小差异进行分析后,发现妊娠率又与发情行为表现和雌二醇浓度无关。因此,血清雌二醇浓度和发情行为对妊娠的影响似乎通过卵泡大小来介导的,并且优化卵泡大小的管理实践可以提高受胎率。

IVF-ET周期单卵泡的大小及雌二醇水平日平均增长值对妊娠率的影响

目的探索雌二醇(E2)和卵泡大小的单卵泡日平均增长情况对妊娠率的影响。方法选用59例接受体外受精-胚胎移植(IVF-ET)的患者。纳入标准:原发不孕,年龄≤38岁,因输卵管因素助孕,本次为第1周期助孕,且移植第3天新鲜胚胎,均采用卵泡期长方案控制性促排卵,未发生卵巢过度刺激综合征。排除标准:生殖系统畸形,合并代谢性疾病,有子宫内膜异位症、多囊卵巢综合征、宫腔黏连等疾病。按妊娠与否分为妊娠和未妊娠2组,比较2组间血清基础性激素、抗苗勒管激素(AMH),Gn启动日血清促卵泡激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、雌二醇(E2),最大卵泡生长至14 mm、14 mm至人绒毛膜促性腺激素(HCG)日LH、E 2,14 mm前、14 mm至HCG日E 2和卵泡大小平均日增长、14 mm前、14 mm至HCG日E 2和卵泡大小单个卵泡平均日增长的差异性。结果E 2浓度和卵泡大小的妊娠组14 mm前日增长和14 mm至HCG日日增长均低于未妊娠组,差异有统计学意义(P<0.05),而卵泡大小的总体日增长差异无统计学意义(P>0.05),E 2浓度的单个卵泡增长中妊娠组14 mm前日增长、14 mm至HCG日日增长和总体增长均低于未妊娠组,差异有统计学意义(P<0.05),卵泡大小的单个卵泡增长中妊娠组14 mm至HCG日日增长和总体增长均低于未妊娠组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在控制性促排卵过程中,密切监测和控制E 2和卵泡大小的单卵泡日平均增长可以提高IVF-ET妊娠率。

不同发情周期阶段和不同体积卵泡的卵母细胞对体外受精及其发育的影响

根据母牛卵巢黄体发育状态将实验用卵巢相应地划分为早期黄体(ELP)、功能黄体(LP)和退化黄体(LLP)三个试验组(实验1);实验2则按实验卵巢上卵泡的表面直径大小划分为小于2mm,2～6mm 和大于6mm 三组.采用注射器抽取法采集卵泡里的卵母细胞,然后按 Lu 等报导的方法进行体外成熟培养和体外受精。受精卵继续在体外条件下培养到囊胚阶段。实验2还进一步观察了囊胚体外发育到孵化囊胚的比率。结果表明,来自不同发情周期阶段的牛卵母细胞,经体外成熟培养后,各组体外受精分裂率(74.3%～78.4%)及体外囊胚发育率(27.7%～31.3%)均无显著差异;而来自表面直径小于2mm 卵泡的卵母细胞,其体外受精分裂率和体外囊胚发育率均显著地低于2～6mm 及大于6mm 组(P<0.01);来自直径大于6mm 卵泡的卵母细胞受精后的早期胚胎体外囊胚发育率均显著高于其余两组(p<0.01)。表明卵泡及其卵母细胞在体内的发育程度对其后体外受精及早期胚胎进一步发育的能力只有一定的影响。

三维超声卵泡容积测量技术在监测卵泡发育中的应用

目的:探讨经阴式三维超声卵泡容积测量技术在监测卵泡发育的应用价值。方法:分析65例不孕症患者二维超声常规检查和经阴式三维超声卵泡容积测量两种方法对卵泡监测结果,并运用Bland-Altman图像分析软件对二者进行一致性评估。结果:经阴式超声卵泡容积测量评估排卵日诊断符合率高于二维超声检查,差异有统计学意义(P<0.05);二维直径和三维球径两种测量方式对于单卵泡直径的测量一致性分析显示一致性不佳。结论:经阴式三维超声卵泡容积测量技术能够更准确评估排卵日及观察窦卵泡数目。

影响腔前卵泡体外发育的因素

哺乳动物腔前卵泡体外培养是获得成熟和具有受精能力卵母细胞的一项重要技术。腔前卵泡在体外发育受到多种因素影响,主要有动物年龄(年龄越大腔前卵泡数量越少,但存活率上升)、卵巢大小(采集的数量与卵巢大小及类型有关)、卵泡大小(大卵泡易于成熟与存活)、分离方法(不同分离方法获得的腔前卵泡数量不同)还有培养基的选择和添加物等,这些影响因素解决好坏将直接决定培养的效果。

排卵期单个成熟卵泡血清雌二醇水平与周期妊娠率的关系

目的观测卵泡大小、子宫内膜厚度、血清E_2水平、尿LH峰及宫颈粘液评分,探讨排卵期单个成熟卵泡血清雌二醇(E_2)水平与周期妊娠率的关系。方法对198例在我院生殖科行供精人工授精,至少一侧输卵管通畅的不孕患者的卵泡大小、子宫内膜厚度、排卵前3日内的血清E_2水平,半定量尿LH峰和宫颈粘液进行监测或评分。按排卵期单个成熟卵泡血清E_2值分成A、B、C三组,A组E_2<110pg/ml,B组110~300pg/ml,C组>300pg/ml,观察三组的周期妊娠率。结果 (1)三组的年龄、不孕年限、采血时间、排卵前成熟卵泡平均值及子宫内膜厚度均无显著差异(P>0.05);(2)三组的宫颈粘液评分A组明显低于B、C两组(P<0.01),B、C两组间无显著差异(P>0.05);三组的排卵日尿LH峰水平为A<B<C,有显著性差异;(3)三组周期妊娠率分别为5%(1/20)、38.37%(33/86),41.38%(24/58),A组明显低于B、C两组(P<0.01),B、C两组间无显著差异(P>0.05)。结论排卵期单个成熟卵泡血清E_2水平与宫颈黏液评分、尿LH峰成正比,与卵泡大小、子宫内膜厚度无显著相关;若低于110pg/ml,周期妊娠率显著降低。单个成熟卵泡血清E_2水平更能反映卵子和子宫内环境质量,能更好的预测周期妊娠结局。

母马大、小卵泡的卵泡液代谢组学分析及其对卵泡发育的影响

本实验旨在研究母马大、小卵泡液代谢物的差异,从卵泡液代谢组层面初步探讨差异物对卵泡发育的影响及卵泡发育机制。选用8匹山东即墨地区母马的卵泡液进行代谢组学分析,大卵泡直径设为45~60 mm、小卵泡直径设为20~30 mm,采用超高液相色谱-高分辨质谱联用技术,通过主成分分析法(PCA)、偏最小二乘法-判别分析法(PLS-DA)得到大小卵泡液差异性物质质荷比。结果表明:在大卵泡液中含量多的代谢物有睾酮、1-棕榈酰溶血磷脂酸、β-硫酸雌醇、硫酸雌酮,小卵泡液中含量多的代谢物有硫酸吲哚酚、木子塘、水苏糖和3-脲基丙酸酯。综上可知,在大卵泡液中,上调物质主要是类固醇,比较单一集中,但小卵泡中不存在上调的类固醇物质,说明在母马中类固醇激素是促使卵泡发育的主要代谢物;在小卵泡液中,上调物质种类复杂,当优势卵泡出现时,可能有一些代谢物会抑制其余的小卵泡继续发育。

绒毛膜促性腺激素注射日直径≥17mm卵泡占比与妊娠结局的关系

目的：回顾性分析绒毛膜促性腺激素（hCG）注射日直径≥17mm卵泡占比与妊娠结局的关系。方法：根据hCG注射日直径≥17mm卵泡在直径≥14mm卵泡中的占比分为3组,其中〈50%者为A组;50%～70%为B组;〉70%为C组,比较3组妊娠结局。结果：3组直径≥14mm卵泡的每卵泡数平均雌二醇（E2）水平、获卵率,受精率无统计学差异（P〉0.05）。hCG日A组E_2（18695.93±13289.03pmol/L）、孕酮（5.25±8.43nmol/L）水平均高于B组（13822.65±8747.08pmol/L、3.85±1.75nmol/L）、C组（11909.99±9878.43pmol/L,3.63±1.53nmol/L）,差异有统计学意义（P〈0.05）;A组优质胚胎率（41.03%）、胚胎种植率（28.93%）、临床妊娠率（39.62%）低于B组（43.76%、30.70%、47.9%）、C组（45.40%、35.22%、51.14%）,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：hCG注射日直径≥17mm卵泡在直径≥14mm卵泡中占比达到50%以上,可获得更好的妊娠结局,可作为确定控制性超排卵hCG注射时机的主要指标。

山羊卵泡大小对卵母细胞体外发育能力的影响

目的比较不同大小山羊卵泡的卵母细胞体外成熟、体外受精及胚胎发育的能力。方法收集不同大小山羊卵泡的卵母细胞,分3组进行体外培养。Ⅰ组:卵泡直径≥5.0mm;Ⅱ组:卵泡直径3.0～4.9mm;Ⅲ组:卵泡直径<3.0mm。观察各组卵母细胞体外成熟率、体外受精率、卵裂率及囊胚形成率。结果3组卵母细胞体外成熟率与受精率差异无统计学意义(均P>0.05)。Ⅲ组卵母细胞的卵裂率及囊胚形成率分别为53.8%和28.6%,均显著低于Ⅰ组和Ⅱ组(均P<0.01)。结论在进行山羊未成熟卵体外成熟培养时,卵泡直径≥3mm的卵母细胞体外发育潜能较卵泡直径<3mm的卵母细胞好。