大戟脂化学成分的研究

目的研究大戟脂的化学成分。方法采用硅胶柱色谱、SephadexLH-20柱色谱、ODS柱色谱对大戟脂化学成分进行分离纯化,利用核磁共振核磁共振技术鉴定分离纯化得到的化合物结构。结果从大戟脂中共分离鉴定了10个化合物,分别为methyl (20R)-3β-acetoxychol-5-en-24-oate(1)、ergosta-7, 22-diene-3-one(2)、邻苯二甲酸二丁酯(3)、邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(4)、ingol-7, 8, 12-triacetate3-(4-methoxyphenyl)acetate(5)、eupha-8, 24-diene-3-ol-26-al(6)、大戟醇(7)、3-oxolanost-9(11)-ene-24S, 25-diol(8)、Amijiol-7, 10-diacetate(9)和羊毛甾醇(10)。结论从大戟脂中分离得到10个化合物,其中methyl (20R)-3β-acetoxychol-5-en-24-oate(1)、ergosta-7, 22-diene-3-one(2)、邻苯二甲酸二丁酯(3)、邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(4)、3-oxolanost-9(11)-ene-24S, 25-diol(8)和羊毛甾醇(10)是首次从大戟脂中分离得到。

大戟脂中二萜类成分及细胞毒活性研究

〔目的〕研究大戟脂中二萜类抗肿瘤活性成分。〔方法〕通过硅胶柱色谱、ODS柱色谱和RP-HPLC等方法,从大戟脂的甲醇提取物中共分离得到5个二萜类化合物,利用各种波谱学手段及理化性质确定化合物的结构。对分离得到的二萜类化合物的生合成途径进行了简单推测,并采用MTT法对分离得到的单体化合物进行细胞毒活性测试。〔结果〕分离得到的5个二萜类化合物包括3个Ingol烷型二萜、2个巴豆烷型二萜,分别鉴定为:ingol7,8,12-triacetate-3-(4-me-thoxy-phenyl)acetate(1)、ingol7,8,12-triacetate-3-phenylacetate(2)、ingol3,8,12-triacetate(3)、12-deoxyphorbol-13-isobu-tyrate-20-acetate(4)、12-deoxyphorbol-13-angelate-20-acetate(5)。〔结论〕化合物1~3是首次从该植物中分离得到,并对C6细胞株有较强的细胞毒活性。

多脂大戟中Lathyrane-type类二萜化合物对烟草花叶病毒的抑制活性分析

【目的】烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)严重危害烟草、番茄、辣椒等多种作物,给农业生产造成巨大经济损失,本研究为利用低毒、高效植物源药剂防治TMV病毒病害提供先导化合物和理论依据。【方法】采用枯斑计数法对从多脂大戟中分离的11种化合物进行抗TMV活性测定。【结果】接种TMV 24 h后施用100μg/mL的化合物制剂进行防控实验,其中化合物Euphorblin E(HZ-7)的抑制率为67.54%,高于对照宁南霉素(52.89%);先施用11种化合物制剂6 h后再接种TMV进行预防实验,其中化合物Euphorblin E(HZ-7)抑制率为72.29%,高于对照宁南霉素(58.21%)。【结论】多脂大戟中化合物Euphorblin E可作为抗TMV病毒病害环保型生物源农药研发的先导化合物。

大戟脂药材中四环三萜类成分大戟二烯醇、大戟醇的含量测定及提取工艺优化

目的:建立同时测定大戟脂药材中大戟二烯醇和大戟醇含量的方法,并优化其提取工艺。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为Agilent ZORBAX Eclipse Plus C8,流动相为乙腈-水(90∶10,V/V),流速为1.0 mL/min,检测波长为210 nm,柱温为30℃,进样量为10μL。以大戟二烯醇、大戟醇含量、出膏率为评价指标进行综合评分,以乙醇体积分数、提取时间、溶剂用量为考察因素,采用L9(34)正交试验优化其提取工艺并进行验证。结果:大戟二烯醇、大戟醇检测质量浓度的线性范围分别为0.0304~1.216mg/mL(r=0.9996)、0.01~0.4 mg/mL(r=0.9999);精密度、稳定性(24 h)、重复性试验的RSD均小于2%,平均加样回收率分别为100.46%(RSD=1.03%,n=6)、99.36%(RSD=0.91%,n=6)。最优提取工艺为40 mL的95%乙醇回流提取1 h。经3次试验验证结果显示,大戟二烯醇的平均含量为94.43 mg/g(RSD=0.92%,n=3),大戟醇的平均含量为25.42 mg/g(RSD=0.98%,n=3),平均出膏率为51.42%,(RSD=1.95%,n=3),平均综合评分为98.87(RSD=0.92%,n=3)。结论:所建含量测定方法简便、准确,重复性好,可用于大戟脂的质量控制;优化所得提取工艺稳定、可行。

大戟脂有效部位及大戟二烯醇抗炎镇痛作用研究

目的考察大戟脂有效部位和大戟二烯醇的抗炎镇痛作用。方法取昆明种小鼠80只,随机分为8组,分别为大戟脂有效部位大、中、小(60,30,15 mg·kg^(-1))剂量组,大戟二烯醇大、中、小(30,15,7.5 mg·kg^(-1))剂量组,0.5%CMC-Na组和吲哚美辛组(10 mg·kg^(-1)),每组10只。通过二甲苯致小鼠耳肿胀法、毛细血管通透性实验和棉球肉芽肿实验,综合观察大戟脂有效部位和大戟二烯醇的抗炎作用;采用热板法、醋酸扭体法和福尔马林法,评价其镇痛作用。结果大戟脂有效部位和大戟二烯醇在三种炎症模型上均显示了一定的抗炎作用,同时表现出良好的镇痛作用,其中以大戟二烯醇高剂量组效果最佳。结论大戟脂有效部位和大戟二烯醇具有显著的抗炎镇痛作用,其中大戟二烯醇发挥主要作用。

维药多脂大戟治疗白内障活性部位化学成分研究

目的:研究多脂大戟治疗白内障活性部位化学成分。方法:利用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱、高效液相色谱等分离技术,对多脂大戟树脂抗白内障活性部位进行分离纯化,并通过1H-、13 C-NMR等波谱技术进行结构鉴定。结果:共鉴定6个萜类化合物,分别为eburicol(1)、羊毛甾醇(2)、ingol 7,8,12-triacetate 3-phenylacetate(3)、ingol 7,8,12-triacetate 3-(4-methoxyphenyl)acetate(4)、12-O-Acetyl-8-O-tigloylingol(5)、3,12-di-O-acetylingol(6)。结论:化合物1、4、6首次从本种分离得到。

大戟脂的化学成分研究

目的:研究大戟脂的化学成分。方法:利用各种色谱手段对大戟脂进行分离纯化,并通过^(1)H-NMR、^(13)C-NMR等波谱技术进行结构鉴定。结果:从大戟脂中共纯化分离得到10个化合物,分别鉴定为:23,24-dihyroeuphatexol B(1)、eupha-8,24-diene-3β-ol-7,11-dione(2)、(24R)-eupha-8,25-diene-3β,24-diol(3)、(20R,23E)-eupha-8,23-diene-3β,25-diol(4)、eupha-24-methylene-8-ene-3β-ol-7,11-dione(5)、3β-hydroxy-25-methyloxylanosta-8,23-diene(6)、euphorol D(7)、euphorbol-7-one(8)、kansenone(9)、kansenol(10)。结论:其中,化合物1为新的降三萜类化合物。

不同炮制方法对大戟脂毒性的影响

目的:研究不同炮制方法对大戟脂毒性的影响。方法:将大戟脂用3种不同的方法进行炮制,生品和炮制品进行小鼠口服急性毒性试验,以LD50为毒性指标,判断毒性的大小。结果:大戟脂生品、烤制品、炒制品、灰埋制品的LD50分别为2.898g/kg、4.963g/kg、3.752g/kg、4.579g/kg。结论:3种不同的炮制方法均可显著降低大戟脂的毒性,以烤制法效果最佳。

维药大戟脂生品的小鼠口服急性毒性试验

目的：考察大戟脂生品单次灌胃给予小鼠后小鼠出现的毒性反应及死亡情况，及毒性反应的可能的靶器官。为反复给药毒性实验的剂量选择提供依据。同时，临床安全用药的剂量设计提供参考依据，为临床毒性反应的监护及生理生化指标监测提供依据。方法：取KM健康小鼠80只，雌雄各半，按体重和性别随机分7组，即在LD100与LD0间设计5个剂量，每组10只，间距1：0．75。每只0．2ml／10g灌胃给药。给药后观察14天，观察和记录有无异常反应和死亡情况。以生品不同剂量小鼠死亡情况和死亡率，以改良寇氏法计算LD50。结果：小鼠大戟脂生品灌胃，LD50为2．898g／kg，LD50 90％的可信区间是（3．639，4．581），LD50的平均可信区间是（2．427，3．369），毒性反应的主要表现为昏迷、滞呆、活动减少等。解剖肉眼观察脏器的病变情况，大部分心脏、血管瘀血，部分肝脏颜色呈深红色、小部分动物肝脏有黄斑，胃肠道颜色发黄、胀气。结论：大戟脂生品小鼠灌胃，改良寇氏法计算LD50为2．898g／kg，LD50 95％的可信区间是（3．639，4．581），LD50的平均可信区间是（2．427，3．369）。

基于Nrf2/HO-1/GPX4通路探讨大戟脂总三萜抗类风湿性关节炎的作用

旨在探讨大戟脂总三萜对类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的防治作用及其作用机制。采用完全弗氏佐剂(complete Freund′s adjuvant,FCA)诱导大鼠关节炎模型,将雄性大鼠随机分为6组,每组10只,分别为对照组,模型组,雷公藤多苷(7.5 mg·kg^(-1))组,大戟脂总三萜低、中、高剂量组(32、64、128 mg·kg^(-1));除对照组大鼠外,在大鼠右后足趾注射0.2 mL FCA。给药组灌胃给予药物,对照组和模型组给予相应体积0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)溶液,每日1次,期间测量大鼠后足肿胀度并进行关节炎评分至第30天。给药结束后,采用HE染色观察大鼠关节组织病理学改变。采用生化比色法检测关节组织中丙二醛(malondialdehyde,MDA)、还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)因子和Fe^(2+)的含量以及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性。采用RT-PCR法检测关节组织中核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)、谷胱甘肽过氧化物酶4(gluta-thione peroxidase 4,GPX4)、酰基辅酶A合成酶长链家族成员4(acyl-CoA synthetase long chain family member 4,ACSL4)mRNA的含量,Western blot法检测大鼠关节组织中Nrf2、Kelch样ECH相关蛋白1(Kelch-like ECH-associated protein 1,Keap1)、血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)、醌氧化还原酶1[NAD(P)H quinone oxidoreductase 1,NQO1]、超氧化物歧化酶(SOD2)、GPX4、ACSL4蛋白的表达。结果显示,与模型组比较,经雷公藤多苷(7.5 mg·kg^(-1))和大戟脂总三萜(32、64、128 mg·kg^(-1))治疗后,大鼠双侧后肢肿胀程度明显减轻,关节炎评分显著下降,关节组织病变程度减轻;关节组织中MDA和Fe^(2+)含量降低,GSH含量和SOD活性增加;氧化因子Nrf2、GPX4的蛋白表达和mRNA水平显著增加,ACSL4的蛋白表达和mRNA相对含量显著降低;Nrf2/HO-1/GPX4通路的Keap1、NQO1、HO-1、SOD2蛋白表达水平也显著升高。综上所述,大戟脂总三萜可通过抑制脂质过氧化从而抑制细胞异常铁死亡发挥抗RA作用,作用机制可能与其对Nrf2/HO-1/GPX4信号通路的调控相关。

维吾尔药大戟脂中2个新的三萜

目的研究大戟脂(多脂大戟Euphorbia resinifera的树脂状分泌物)的化学成分。方法采用反相C18、硅胶、凝胶柱色谱、制备型HPLC等方法进行分离纯化,通过红外、紫外、高分辨质谱、一维和二维的核磁数据和结合参考文献鉴定化合物的结构。结果从大戟脂甲醇提取物中分离得到了2个化合物,分别鉴定为大戟烷-8-烯-3,25-二醇-24-氯-7-酮(1)和22,23,24,25,26,27-六降大戟烷-8-烯-20-醇-3,7-二酮(2)。结论化合物1为新的三萜,化合物2为新的降三萜,分别命名为大戟脂A和大戟脂B。

维吾尔族药大戟脂中三萜类化学成分研究

该研究通过反复硅胶柱色谱、ODS柱色谱和半制备型HPLC等方法,从维吾尔族药大戟脂的甲醇超声提取物中共分离得到10个三萜类化合物。利用各种波谱学手段及理化性质确定了这些化合物的结构,分别鉴定为3β-hydroxy-25,26,27-trinoreupha-8-ene-24-oate(1)、iso-maticadienediol(2)、25,26,27-trinortirucall-8-ene-3β-ol-24-acid(3)、dammarendiolⅡ(4)、eupha-8,24-diene-3-ol-26-al(5)、lnonotusane C(6)、eupha-8,24-diene-3β-ol-7,11-dione(7)、inoterpene A(8)、inoterpene B(9)和eupha-24-methylene-8-ene-3β-ol-7,11-dione(10),其中化合物1为新天然产物,化合物2~4首次从该科植物中分离得到,化合物5和6首次从该属植物中分离得到。细胞毒活性测试结果显示化合物1~10对MCF-7,U937以及C6细胞株均未表现出明显的细胞毒活性。

大戟脂中三萜类化学成分的研究

通过正相硅胶、ODS柱色谱和半制备HPLC等多种色谱分离方法相结合对大戟脂化学成分进行分离纯化,从大戟脂乙醇提取物中分离得到7个三萜类化合物;借助各种波谱学手段鉴定分离纯化得到的化合物结构。分别鉴定为cycloartan-1,24-diene-3-one(1)、cycloartan-1,24-diene-3-ol(2)、3β-hydroxy-lanosta-8,24-diene-11-one(3)、lnonotusane C(4)、eupha-8,24-diene-3β-ol-7,11-dione(5)、eupha-24-methylene-8-ene-3β-ol-7,11-dione(6)、eupha-8,24-diene-3β,11β-diol-7-one(7)。化合物1和2为新化合物,化合物3为首次从自然界中分得。

大戟脂中4个新羊毛甾烷型三萜成分

综合采用多种色谱分离技术从大戟脂中分离得到4个羊毛甾烷型三萜,采用HR-ESI-MS、NMR等技术并与文献对照鉴定其结构为3β-hydroxy-12α-methoxylanosta-7,9(11),24-triene(1)、3β-hydroxy-12α-methoxy-24-methylene-lanost-7,9(11)-dien(2)、3,7-dioxo-lanosta-8,24-diene(3)和3,7-dioxo-24-methylene-lanost-8-en(4)。化合物1~4均为未见文献报道的新化合物。化合物对LPS诱导的RAW264.7细胞NO生成抑制结果显示,化合物1、2和4均表现出一定的抗炎活性,IC_(50)分别为30.4、37.5、28.3μmol·L^(-1)。