大曲高温放线菌CICC 10681在不同温度下的脂肪酸代谢变化

通过RNA-seq结合实时荧光定量PCR研究了不同温度下大曲高温放线菌脂肪酸代谢相关基因差异表达,并利用气相色谱结合Sherolock全自动细菌鉴定系统研究了不同温度大曲高温放线菌脂肪酸的组成变化。结果表明:与45℃相比,大曲高温放线菌CICC 10681在55℃和60℃时与脂肪酸合成相关基因平均上调表达7. 3和8. 4倍,与脂肪酸分解相关基因平均下调表达7. 3和7. 6倍,与支链氨基酸分解相关基因平均下调表达5. 3和6. 0倍,与乙酰辅酶A合成相关基因平均上调表达2. 7和3. 1倍。大曲高温放线菌主要以饱和的直链和支链脂肪酸为主,随着温度升高,支链饱和脂肪酸呈下降趋势,直链饱和脂肪酸呈上升趋势。与45℃相比,大曲高温放线菌在60℃条件下的C_(16∶0)和C_(18∶0)的含量分别升高了1. 6和10倍。

大曲高温放线菌Thermoactinomyces daqus CICC 10681的DNA(G+C)含量分析

通过热变性温度法(Tm法)、高效液相色谱(HPLC)法并结合全基因组测序结果对大曲高温放线菌(Thermoactinomycesdaqus)CICC 10681的(G+C)摩尔分数进行了分析,完善其遗传学特征。并对Tm法和HPLC法这两种常规测定方法进行了比较。结果显示,Tm法和HPLC法得到的CICC 10681(G+C)摩尔分数分别为47.0%(Tm)和49.3%(HPLC),与全基因组测序的结果相近,并且与已报道的高温放线菌属的(G+C)摩尔分数范围一致,符合高温放线菌低(G+C)摩尔分数的特征;与Tm法相比,HPLC法得到的(G+C)摩尔分数更准确,适合用于对微生物菌株(G+C)摩尔分数的分类学描述。

耐高温菌株大曲高温放线菌CICC 10681培养条件的响应面优化

为了获得耐高温菌株大曲高温放线菌(Thermoactinomyces daqus,T.daqus)CICC 10681的最佳培养条件,以生物量(OD_(620nm))为响应值,通过单因素试验、Plackett-Burman、响应面试验对菌株CICC 10681的生长条件进行优化。研究结果表明,T.daqus CICC 10681的最佳培养条件为可溶性淀粉4.5 g/L、大豆蛋白胨8.4 g/L、硫酸镁5 g/L、53℃、接种量2%、装液量60 mL/250mL、转速180 r/min,在此条件下进行验证试验,菌株OD 620nm达到1.98±0.029,较优化前提高了6.2倍,因此运用响应面试验预测的该模型有一定的实践指导意义,为后续菌株在高温大曲堆积发酵生产中的应用提供理论基础。