血清学检测和基因分型在ABO疑难血型鉴定中的性能评价

目的分析血清学检测和基因分型在ABO疑难血型鉴定中的应用。方法对106例ABO疑难血型实施血清学检测(吸收放散试验)等,同时对其实施基因分型检测(荧光定量PCR试验),以基因测序结果为金标准,评估血清学检测和基因分型所得结果与基因测序一致性,比较两种检查方式灵敏度、特异度。结果以基因测序为金标准,血清学检测所得结果一致性为中度,基因分型检测所得结果一致性很好。通过比较血清学检测和基因分型灵敏度、特异度可知,两种检查方式所得特异度、灵敏度差异有统计学意义,基因分型灵敏度、特异度更高(P<0.05)。结论基因分型检测和血清学检测有各自的优缺点,但总体上来说,基因分型检测具有更高的准确性和可靠性,更快速、高效。

基于连接酶链式反应的EML4-ALK融合基因分型检测

针对棘皮动物微管相关蛋白样4-间变性淋巴瘤激酶(EML4-ALK)融合基因变异体V1、V2、V3a、V3b设计引物、探针,优化连接探针长度及其浓度,建立基于连接酶链式反应的qPCR法检测方案,并对该方案的特异性、检出限、抗干扰性进行验证。结果表明:基于连接酶链式反应的qPCR法能对EML4-ALK融合基因进行有效分型;连接探针长度在30 nt(nucleotide)时检测灵敏度、特异性最高;连接探针终浓度在0.1~1.0 nmol/L较为合适;设计的引物、探针特异性好,只扩增靶RNA,对其他RNA无扩增;对EML4-ALK融合基因变异体V1、V2的检出限为10 copies/μL,变异体V3a、V3b的检出限为100 copies/μL;在EML4-ALK融合基因RNA标准品检测过程中加入100 ng的肺癌样本RNA作为干扰,检测结果未受到明显干扰。

人乳头瘤病毒基因分型检测在绝经后妇女HPV感染中的应用价值

目的探究人乳头瘤病毒(HPV)基因分型检测在绝经后妇女HPV感染中的应用价值。方法选择80名接受HPV筛查的绝经后妇女为研究对象,采集其宫颈脱落细胞标本,采用聚合酶链式反应(PCR)-反向杂交法进行检测。以柱提法提取样本DNA,将提取液及阴、阳性对照品同时在天隆PCR扩增仪上进行扩增,在安必平杂交仪上进行杂交。分析阳性率、危险分型情况、阳性样本与感染样本分型情况及不同年龄段妇女HPV感染阳性率。结果在80名绝经后妇女中,HPV阳性检出率为15.00%(12/80)。其中,HPV-16型2例,占比16.67%;HPV-52型2例,占比16.67%;HPV-58型1例,占比8.33%;HPV-53型1例,占比8.33%;HPV-68型1例,占比8.33%;HPV-33型1例,占比8.33%;HPV-11型1例,占比8.33%;HPV-18型1例,占比8.33%;HPV-cp8304型1例,占比8.33%;HPV-66型1例,占比8.33%。在12例HPV阳性样本中,多重感染样本3例,占比25.00%;单一感染样本9例,占比75.00%。不同年龄组HPV感染阳性例数分布数据差异不明显(P>0.05)。结论绝经后不同年龄段妇女HPV阳性率无明显分布,感染以单一感染为主,HPV基因分型检测有着较高的检验诊断价值,值得推广。

膜杂交多重检测技术在HPV基因分型中的应用

目的 应用膜杂交多重检测技术进行人乳头瘤病毒（HPV）基因分型诊断，以了解HPV亚型的感染状况。方法采用膜杂交多重检测技术对深圳地区不同年龄段就诊妇女4419例进行23种HPV基因亚型检测。结果4419例标本共检出HPV亚型感染阳性者897例，阳性率为20．3％；其中高危型感染649例，低危型感染183例，混合感染65例，分别占总阳性的72.4％，20．4％和7．2％。不同年龄组的HPV亚型感染检出率差异明显，〈20岁，20～35岁，36～50岁和〉50岁年龄组的HPV亚型感染阳性率分别为2.3％，70．1％，22．0％，5．6％；各年龄组低危型和高危型感染阳性率分别为0．9％和1．4％，17、0％和53．1％，5、3％和16、7％，0和5．6％。结论膜杂交多重检测技术在HPV感染基因分型中的应用具有高度特异性、敏感性，可为临床HPV感染诊断和宫颈癌的监测及预防提供可靠的实验依据。

APTIMA HPV E6/E7 mRNA和MALDI-TOF-MS HPV基因分型检测宫颈高度病变效果评价

目的：以HC-Ⅱ法HPV DNA为对照,评价APTIMA法HPV E6/E7 mRNA检测（A-HPV）和MALDI-TOF-MS HPV分型检测技术（M-HPV）用于宫颈癌与癌前病变筛查的临床价值。方法：深圳市25-59岁、3年内未行宫颈癌筛查、未接受过子宫切除和盆腔放疗的2095例未孕妇女参加了本次筛查。医生于患者宫颈外口处直接收集2份宫颈脱落细胞标本,一份用于液基细胞学检查,一份用于HC-Ⅱ、A-HPV和M-HPV检测。宫颈细胞学≥ASCUS及3种方法 HPV检测任一阳性结果者均回叫行阴道镜下定点或四象限活检及宫颈管诊刮（ECC）。以病理诊断为标准评价各种HPV检测方法用于宫颈癌筛查的价值。结果：2095例研究对象中各项检测数据齐全者1970例。1970例患者的平均年龄为（35.89±7.655）岁。细胞学≥ASCUS者占6.4%（127/1970）,CINⅡ＋者占1.3%（26/1970）,CINⅢ＋者占0.76%（15/1970）。HC-Ⅱ、A-HPV和M-HPV总的HPV阳性率分别是19.4%、12.1%和14.8%,差异有统计学意义（P〈0.05）。HC-Ⅱ、A-HPV和M-HPV对检出CINⅡ＋病变的敏感性分别为88.5%（95%CI为68.7-97.0）、100%（95%CI为84.0-100）和92.3%（95%CI为73.4-98.7）,特异性分别为81.5（95%CI为79.7-83.2）、89.1%（95%CI为87.6-90.4）和86.3%（95%CI为84.6-87.8）;A-HPV与HC-Ⅱ相比敏感性稍高（P〈0.05）,M-HPV敏感性和HC-Ⅱ相同（P〉0.05）,三者比较有统计学意义（P〈0.05）。结论：A-HPV和M-HPV用于宫颈癌筛查都有很好的敏感性和准确性,两者活检率明显低于HC-Ⅱ,可减少医疗负担和花费。HPV亚型分型和HPV E6/E7 mRNA结合有更好地预测宫颈癌患病风险的作用。

内阿米巴属原虫分子检测及基因分型方法研究进展

内阿米巴属原虫是可寄生于人和动物肠道及其他内脏器官的人兽共患原虫,属内种类较多,但致病性种类主要是溶组织内阿米巴,可引起人和动物出现痢疾和肝脓肿,严重者可危及生命。致病性和非致病性的内阿米巴属原虫的包囊和滋养体在形态上很难区别,且同种的致病性、感染力等也存在一定的差异,因此,临床上传统的诊断方法很难确定病原的种类,相应也直接影响了临床用药,为了解内阿米巴属原虫的种类分布及其分型情况,本文就内阿米巴属原虫分子检测及基因分型方法的研究进展情况进行综述。

20例宫颈组织石蜡标本HPVDNA基因分型检测假阴性结果分析

目的探讨宫颈组织石蜡标本HPV DNA基因分型检测中产生假阴性结果的原因。方法用Eppendorf PCR仪及HPV DNA分型检测试剂盒检测100例宫颈上皮内瘤变(CIN)病例,有25例未检测出HPV感染。根据临床表现和HE切片判断其中20例可能是假阴性,通过改进操作流程,再重新检测。结果 20例未检出HPV感染的病例经重新检测,有17例检出HPV感染。结论规范操作,优化流程,可有效避免HPV DNA基因分型检测中产生假阴性结果。

北京地区慢性丙型肝炎患者血清HCV-RNA定量检测与基因分型的研究

目的:探讨北京地区慢性丙型肝炎患者血清HCV-RNA定量检测和HCV基因分型的相关性。方法:用荧光定量PCR法检测310例北京地区慢性丙型肝炎患者血清HCV-RNA标本,应用RT-PCR和型特异性引物法对310例标本进行基因分型。结果:在310例标本中,HCV1b型有217例(70%),2a型74例(23.9%),2b型8例(2.6%),1b/2a混合型5例(1.6%),未分型6例(1.9%)。对299例HCV单基因型患者的基因型与性别的相关性进行统计学分析,结果显示没有统计学差异(χ2=0.028,P<0.978)。299例患者的首次血清病毒RNA定量测定与基因型之间有明显的统计学差异(F=16.525,P<0.01)。结论:北京地区丙型肝炎病毒感染以1b型为主,基因型在性别上的分布没有差异。治疗前HCV基因型与体内病毒的含量密切相关。

幽门螺杆菌vacA基因分型和cagA基因检测

〔目的〕建立检测幽门螺杆菌 (Hp)的 cag A、vac A基因及其基因型的方法 ,观察 vac A基因型与 cag A状态的相关性。〔方法〕应用聚合酶链反应 (PCR)对 172份 Hp阳性标本进行 Hp cag A和 vac A基因检测及其基因型分析。〔结果〕 172份 Hp阳性标本中 ,vac A阳性数 172 (10 0 % ) ,cag A阳性数 93(5 4.0 7% ) ;49例萎缩性胃炎患者中 ,cag A阳性菌株感染 47例 (95 .92 % ) ,6 4例浅表性胃炎患者中 ,vac A阳性菌株感染 2 8例 (4 3.75 % ) ,两者有显著差异 (p<0 .0 5 ) ;vac A中间区域型 m1和 m2分别为 80和 92例 ,两者无明显差异 (p>0 .0 5 ) ,信号序列型 sla、slb、s2分别为 82、6 8、2 2例 ,sla与slb无明显差异 (P>0 .0 5 ) ,sla、slb、sl(sla+ slb)均显著多于 s2型 (p<0 .0 5 )。检出所有的 6种信号序列 /中间区域组合型 ,slb/ m l和 sla/ m2分别为 48和 5 2例 ,明显多于其它基因型 (p<0 .0 5 ) ,s2 / ml仅为 2列 ,明显少于其它基因型 (p<0 .0 1)。对 Hp vac A基因型与 cag A状态相关性分析 ,s1/ m1、s1/ m2、s2 / m1、s2 / m2型的 cag A阳性数为分别为 45、48、0、0 ,93份 cag A阳性标本均为 s1(s1/ m1+ s1/ m2 )。〔结论〕vac A基因存在于所有 Hp中 ,而 cag A基因仅存在于 5 0 %～6 0 %的 Hp中 ,vac A

液相基因芯片技术在崇明地区人乳头瘤病毒检测和分型中的应用

目的探究液相基因芯片技术在崇明地区人乳头瘤病毒（HPV）检测和分型中的应用。方法选取2011年5月至2013年4月该院妇科门诊就诊者宫颈脱落细胞500例,使用液相基因芯片技术对其进行HPV基因型检测。并对80例患者进行病理诊断,根据组织病理学将80例患者分为炎性反应组、细胞学正常组、宫颈癌组、宫颈上皮内瘤变（CIN）Ⅰ组、CINⅡ组、CINⅠ～Ⅱ组、CINⅢ组。将病理诊断结果和HPV DNA亚型分布结果结合分析,对崇明地区宫颈病变程度和HPV感染基因型的关系进行分析。结果 500例标本中共180例HPV阳性患者,HPV总感染率为36%,共检出22种基因型,按照感染率从高到低依次为HPV-16、HPV-52、HPV-58、HPV-18、HPV-11、HPV-6、HPV-31。其中高危型感染为85.96%,低危型感染为14.04%。500例标本中共180例HPV阳性患者,其中44例（24.44%）患者年龄为21～25岁的女性,11例（6.15%）患者年龄为51～67岁的女性,随着年龄的增大HPV阳性例数减少。随着宫颈病变级别的升高HPV感染率逐渐升高,两两比较结果显示,炎性反应组与正常组、CINⅢ组与CINⅡ组、宫颈癌组与CINⅡ组、宫颈癌组与CINⅢ组之间差异无统计学意义（P〉0.05）;其余11对两两对比差异具有统计学意义（P〈0.05）。随着宫颈病变级别的升高HPV多重感染率逐渐升高,但是仅炎性反应组与CINⅢ、CINⅡ组间差异有统计学意义（P〈0.05）。将组织病理学作为确诊标准,液相芯片HPV DNA检测CINⅢ、CINⅡ的特异度为76.63%,灵敏度为88.57%,阴性预测值为92.16%,阳性预测值为68.89%。结论崇明地区常见的HPV感染基因型为HPV-16、HPV-52、HPV-58、HPV-18、HPV-11、HPV-6、HPV-31。HPV阳性多发于年轻女性,且HPV多重感染和感染率均随着宫颈病变的程度加重而加重。因而液相芯片HPV DNA检查对大规模筛查和宫颈病变的临床诊断有十分重要的价值。

临床分离耐药阴沟肠杆菌超广谱β-内酰胺酶基因的检测与分型

阴沟肠杆菌已成为医院感染的重要条件致病菌，且有较高的耐药性。由于头孢菌素、碳青霉烯类在临床上的广泛使用，阴沟肠杆菌耐药机制不断发展，其中的细菌产β内酰胺酶（ESBLs）是其耐药的重要机制［1］。目前，ESBLs种类已超过200多种，其中TEM、CTX-M、SHV、KPC型临床上较常见。作者前期的研究，对耐药阴沟肠杆菌，所产ESBLs 进行了检测和分型，22.73％的菌株单产AmpC酶、19.32％菌株单产ESBLs［2］。本文对ESBLs基因进行分型，旨在为进一步研究耐药基因的调控奠定基础。

一种基于液相基因芯片技术对甲型和乙型流感病毒分型检测方法的建立

目的建立能够对甲型流感病毒(influenza virus A,INFA)和乙型流感病毒(influenza virus B,INFB)进行区分的液相基因芯片技术,为甲型和乙型流感病毒的分型提供一种高通量、高灵敏度的检测和鉴定方法。方法从NCBI的Gen Bank下载具有代表性的流感病毒基因组序列,利用生物信息学软件Bio Edit进行序列比对,分别设计针对INFA和INFB的简并引物和特异性探针,将设计好的引物和探针与Gen Bank中所有的基因序列进行比对,以验证其特异性。经探针合成、悬浮液相芯片制备和检测条件的优化获得用于甲型和乙型流感病毒分型的液相基因芯片。结果所检测INFA和INFB均可获得特异性杂交信号,非特异性杂交信号不明显,将2种病毒混合,模拟混合病毒感染也可以得到相应的特异性杂交信号。灵敏度评估结果表明INFA的检测灵敏度为1~10空斑形成单位(plaque forming unit,pfu),而INFB为10~100 pfu。将本方法用于检测11份临床样本,其结果与荧光定量分型逆转录聚合酶链反应(reverse transcriptase-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测方法的结果一致。结论本研究初步建立了INFA和INFB的液相基因芯片检测技术,可用于流感病毒的初步筛查和鉴定,并且可以进行混合感染样本的检测,为流感病毒的分型和鉴定提供了一种新的手段。

广西钦州地区3756例α-地中海贫血基因分型检测结果分析

目的分析广西钦州地区3756例α-地中海贫血基因分型检测结果,总结α-地中海贫血基因类型和分布特征。方法选择广西钦州市第二人民医院2014年1月1日—2018年12月1日收治的3756例α-地中海贫血患者作为研究对象,分别采用PCR基因诊断技术对患者行缺失型基因检测和采用RDB法行非缺失突变型基因检测,分析和总结患者检测结果。结果共检出α-地中海贫血缺失型基因2058例,占比54.8%;α-地中海贫血非缺失突变型1698例,占比45.2%。其中,缺失型基因又包含αα/--SEA1507例(占比73.2%)、-α3.7/αα349例(占比17.0%)、αα/-α4.2122例(占比5.9)、-α3.7/--SEA62例(占比3.0)、-α4.2/--SEA13例(占比0.6%)、-α3.7/-α4.24例(占比0.2%)、-α3.7/-α3.71例(占比0.05%)等类型;非缺失突变型基因包含HbCS41086例(占比63.9%)、HbQS408例(占比24.0%)、HbWS4205例(占比12.0%)等类型。结论α-地中海贫血存在多种基因分型,临床可采用PCR、RDB等基因诊断技术对患者进行检测判断,将能为α-地中海贫血基因诊断和后续临床治疗提供有效的参考。

人乳头瘤病毒分型基因检测和液基细胞学检查在宫颈癌前病变中的诊断作用

目的评估人乳头瘤病毒（HPV）基因分型检测和液基细胞学检查（TCT）在宫颈轻、中度卜皮细胞内瘤变（CINI—CIN2）中的诊断作用及意义。方法对我院2008年11月-2010年11月期间401例因宫颈癌前病变（CIN1-CIN2）要求宫颈环切的患者的HPV分犁基因检测情况勺液基细胞学检查结果进行总结分析。结果HPV的灵敏性较TCT明显增高（P〈0．01），TCT和HPV基因分型检测结合能提高宫颈病变的检出率；宫颈癌前病变中HPV感染以高危基因组的16、52、58、18亚型感染多见，HPV16型感染引起高度病变的几率较HPV52型和HPV58型明显增高（P〈0．01）。结论高危HPV感染是宫颈癌及癌前病变发病的主要致病因子，HPV16型感染易导致宫颈高度病变；HPV基因分型检测和液基细胞学检查结合，可以提高宫颈癌前病变的检出率。

载脂蛋白E基因三种分型检测方法临床效能对比评价

目的对3种载脂蛋白E(apo E)基因型分析的方法:多重特异性扩增突变系统快速分型法(MultiARMS PCR)、聚合酶链反应-限制性核酸内切酶片段长度多态性(PCR-RFLP)、聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)进行评价,试图对apo E基因分型的方法进行对比评价。方法对518名健康调查者分别采用Multi-ARMS PCR、PCR-RFLP、PCR-SSCP等方法进行apo E基因型的分析,并最后对所有标本采用核酸测序的方法进行分型确证。结果在核酸序列分析结果一致性比较上,3种apo E基因分型的方法有所不同(Multi-ARMS PCR Kappa值为0.964、PCR-RFLP为0.991、PCR-SSCP为0.913;Kappa越接近1,提示一致性越好)。结论PCR-RFLP在3种apo E基因型分析方法中最可靠。

HPV基因检测及分型在尖锐湿疣患者诊断中的应用

选取我院2014年1～8月尖锐湿疣患者264例,采用反向斑点杂交-基因芯片技术(RDB)对其进行HPV基因检测及分型.结果在264例尖锐湿疣患者中发现HPV阳性214例(81.1％),且分型成功,HPV阳性标本中有168例为低危型(78.5％),46例为高危型(21.5％),164例为单一型(76.6％),50例为混合型(23.4％).用基因芯片检测HPV基因及分型成功率高,适于应用在临床HPV感染的诊断.

基因芯片技术在乙型肝炎病毒基因分型检测中的应用探讨

目的 :探讨利用基因芯片技术建立乙型肝炎病毒基因分型诊断方法的可能性。方法 :查阅国际上主要的乙型肝炎病毒 (HBV)基因分型诊断标准和现行技术 ,通过将基因芯片技术与目前用于 HBV基因分型的技术方法进行对比 ,探讨利用基因芯片技术建立乙型肝炎病毒基因分型诊断方法的可能性。结果 :HBV的基因分型 ,既可通过全基因序列比对 ,也可通过片段基因序列比对 ,片段基因序列比对是实际工作中 HBV基因分型的主要方法 ,现有报道的技术主要为型特异引物 (SSP) PCR扩增法和 PCR扩增型特异探针 (SSO)杂交法。基因芯片技术具有高敏感、高通量和能够平行检测 DNA类型等特点 ,技术类型属于 PCR扩增型特异探针 (SSO)杂交法。尚未见有应用基因芯片技术进行 HBV基因分型检测的报道。结论 :借鉴现有的 PCR扩增型特异探针 (SSO)杂交法 ,如微板核酸杂交— ELISA显色技术 ,理论上利用基因芯片技术建立乙型肝炎病毒基因分型诊断的方法是完全可能的 ,并且具有高效。