miRNA-143表达载体构建及表达活性检测

以大白猪基因组DNA为模板,利用PCR扩增miRNA-143前体序列,构建重组载体pEGP-miR-143,转染猪胎儿成纤维细胞,通过荧光观察转染效率和报告基因表达效率,再利用实时荧光定量PCR(QRT-PCR)测定细胞内miRNA-143的表达,以检测外源基因的表达活性;对PCR产物进行测序鉴定及重组载体酶切验证。结果表明:成功构建了pEGP-miR-143载体;转染细胞后进行荧光观察,载体中GFP有较好的表达活性;QRT-PCR表明,与对照组细胞相比,试验组miRNA-143表达有显著提升,差异极显著(P<0.01)。说明已成功制备miRNA-143过表达载体,为在动物细胞和体内开展miRNA-143相应的功能研究奠定基础。