大耳白兔骨髓间充质干细胞的分离培养与生物学鉴定

骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)来源于发育早期的中胚层和外胚层,作为干细胞中的种子细胞,具有强大的自我复制和更新能力,并对治疗、修复、补充受损或缺损的肝、肌肉等组织有修复和治疗作用。为了研究BMSCs的生物学特性和多化潜能,对日本大耳白兔BMSCs进行体外分离培养及生物学鉴定研究。取日本大耳白胎兔骨髓组织,采用全骨髓贴壁法分离纯化、体外培养,鉴定日本大耳白兔BMSCs生物学特性,并进行细胞形态学观察、生长动力学检测及其成骨、成软骨、成脂肪能力鉴定。结果表明,采用全骨髓贴壁法成功从日本大耳白胎兔骨髓中分离得到生长状态良好的大耳白兔BMSCs,细胞形态为长梭形,生长曲线呈典型“S”形;免疫荧光和RT-PCR结果显示,大耳白兔BMSCs表达CD29、CD44、CD73、CD105间充质干细胞表面标记物基因,但不表达原始造血祖细胞标志物CD45;经特异性染色和RT-PCR分析表明,分离的细胞是间充质干细胞;体外诱导大耳白兔BMSCs能够分化为骨骼细胞、软骨细胞、脂肪细胞。建立了大耳白兔BMSCs体外分离培养体系,为利用骨髓间充质干细胞进行组织与工程学研究和动物遗传资源保存研究奠定了一定的理论基础。

发光二极管630nm红光和460nm蓝光照射对日本大耳白兔皮肤创面愈合的影响

目的观察发光二极管(LED)630 nm红光和460 nm蓝光照射对日本大耳白兔皮肤创面愈合的影响。方法采用日本大耳白兔8只,建立兔背部皮肤创伤模型,每只兔子3个伤口,分别给予红、蓝光距离15 cm垂直照射(15 min/次)和自然愈合处理。照射至创伤后第21天,观察各组创面愈合数目、愈合面积,计算创伤愈合面积百分比,比较两种光源的治疗作用;HE染色观察新生组织结构;Masson染色观察胶原纤维增生情况;免疫组织化学分析新生皮肤纤维细胞生长因子(FGF)、表皮生长因子(EGF)、内皮细胞生长因子(CD31)、增殖细胞核抗原(Ki-67)及炎性细胞因子(CD68)的表达情况。结果红光组、蓝光组和对照组的愈合率分别为50.0%(4/8)、25.0%(2/8)和12.5%(1/8)。自造模后第12天起,红光组伤口的愈合面积百分比均明显高于蓝光组及对照组(P<0.05或P<0.01)。建模后第21天,红光组新生皮肤厚度为(2.95±0.34)mm,明显高于对照组的(2.52±0.42)mm(F=3.182,P=0.016)。胶原纤维平均光密度为0.15±0.03,明显高于蓝光组的0.09±0.01(F=7.316,P=0.012)和对照组的0.07±0.01(F=7.316,P=0.003)。免疫组织化学检测结果显示,红光组的EGF、FGF、CD31抗原、Ki-67表达较蓝光组和对照组明显增多,CD68较蓝光组和对照组明显减少(P<0.05或P<0.01)。结论 LED红光照射可促进日本大耳白兔皮肤创面愈合,其可能是通过引起皮肤表皮细胞和血管内皮细胞生长及纤维组织增生来促成的。

WHBE兔与日本大耳白兔腹泻型肠易激综合征模型的肠道菌群研究

目的比较分析WHBE兔和日本大耳白(Japanese white rabbit,JW)兔腹泻型肠易激综合征(irritable bowel syndrome,IBS)模型肠道菌群的差异性。方法 WHBE兔和JW兔各16只,按品系随机分为两组,即正常对照(NC)组和IBS模型组,每组8只。采用湿热应激复合番泻叶方法建立腹泻型IBS兔模型,观察实验兔的腹围指数、粪便含水量、结肠转运功能,处死后分别取结肠组织和结肠内容物进行病理组织学观察和肠道菌群多样性分析。结果与NC组比,IBS模型兔均出现腹围指数和粪便含水量增加,结肠转运时间缩短,但结肠组织未见病理性改变;同时IBS模型兔Shannon指数和Chao1指数均显著下降(P<0.05)。根据OTU分类分析的结果,厚壁菌门和拟杆菌门为兔肠道菌群的绝对优势菌群。与NC组比较,WHBE兔IBS模型组厚壁菌门、疣微菌门、绿弯菌门、Akk菌属、链球菌属均明显下降(P<0.05,P<0.01),拟杆菌门和rc4-4菌属丰度显著上升(P<0.05,P<0.01);而JW兔IBS模型组优杆菌属和罕见小球菌属均显著上升(P<0.05),乳酸杆菌属、粪杆菌属、韦荣球菌属和链球菌属均显著下降(P<0.05)。与JW兔NC组比,WHBE兔NC组厚壁菌门、Odoribacter菌属、韦荣球菌属、链球菌属、颤螺旋菌属、Pseudoflavonifractor菌属较低(P<0.05,P<0.01),拟杆菌门、疣微菌门、优杆菌属、粪杆菌属、Akk菌属较高(P<0.05,P<0.01)。与JW兔IBS模型组比,WHBE兔IBS模型rc4-4菌属、粪杆菌属、梭菌属的丰度较高(P<0.05,P<0.01),而厚壁菌门、多尔氏菌属、粪球菌属和罕见小球菌属的丰度则较低(P<0.05,P<0.01)。结论 IBS模型兔存在肠道菌群失调,导致菌群多样性降低;WHBE兔和JW兔IBS模型肠道菌群变化均具有其自身的特点,且具有明显的差异性。

螺旋CT对日本大耳白兔气道的测量研究

目的探讨日本大耳白兔气管和主支气管各解剖径线的长度、角度及相关性,为进行气道疾病内支架介入治疗的动物实验研究奠定基础。方法用多层螺旋CT扫描30只成年健康日本大耳白兔的颈胸部,测量和测算气管各段前后径、左右径,声门水平到隆突的气管长度,左右主支气管和中间支气管内径与长度,以及左、右主支气管长轴与矢状面的夹角。结果气管各段直径、左右上肺尖叶支气管开口内径无差异,右主支气管长度、右主支气管长轴与矢状面夹角小于左侧,右主支气管内径大于左侧并有相关性。结论多层螺旋CT测定的日本大耳白兔气管、左和右主支气管径线值,获得左、右主支气管内径值、长度、嵴下角之间的回归方程,有助于为兔实验提供相关气管和支气管的解剖参数。

螺旋CT测量日本大耳白兔气道径线的窗宽窗位选择

目的探讨日本大耳白兔气管和主支气管解剖径线CT测量的窗位与窗宽选择,为气道支架动物实验奠定基础。方法多层螺旋CT扫描30只成年健康日本大耳白兔的胸部,分别常规肺窗、纵隔窗和特殊的脂肪窗测量气管胸段前后径、左右径、左右主支气管前后径。比较不同窗宽窗位下气管壁显示以及测量数据与解剖数据之间的差异。结果肺窗气管壁均清晰显示,但测量的结果偏小;纵隔窗气管壁显示模糊,测量的结果偏大;而脂肪窗气管壁显示均匀,测量的数据比较接近实际气管直径的解剖参数。结论多层螺旋CT测定日本大耳白兔气管左右径和前后径应选择脂肪窗为佳。有助于为人相关气管和支气管定制气道支架确定最佳的窗宽和窗位。

日本大耳白兔、新西兰兔血液蛋白多态性的研究

采用垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳法对日本大耳白兔、新西兰兔血液中的血清转铁蛋白 (Tf)、前转铁蛋白 (Prt)、后白蛋白 (Po)、血液结合素 (Hp)、红细胞酯酶 (ES - 1、ES - 2和ES - 3)等 7个蛋白座位进行测定。结果表明 :这 7个座位均呈多态。在多态座位中 ,Tf、Prt、Po、Hp、ES - 1、ES - 2、ES - 3分别出现 3、3、6、3、3和 3种表型 ,受 2、2、3、2、2和 2个共显性等位基因控制。X2 检验表明 ,新西兰兔在这 7个座位上均处于平衡状态 (P >0 .0 5 ) ,日本大耳白兔在Tf、Po、ES -1、ES - 34个座位处于平衡 (P >0 .0 5 ) ,而在Prt、Hp、ES - 2出现不平衡状态 (P <0 .0 5 )。

Vc-獭兔、日本大耳白兔与新西兰白兔血液蛋白多态性研究

为给加速 Vc-獭兔育种提供理论依据 ,利用垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对 Vc- 系、 系獭兔、日本大耳白兔和新西兰白兔血液中的红细胞酯酶 (Es-1、Es-2和 Es-3 )、血清前转铁蛋白 (Prt)、后白蛋白 (Po)等 5个蛋白位点的多态性进行了测定 ,结果表明 :在 4个群体中 ,Es-1、Es-2、Es-3和 Po各有 3种表型 ,分别受 2个共显性等位基因控制 ,Prt有 6种表型 ,受 3个共显性等位基因控制。计算表型频率及基因频率。并根据基因频率计算遗传距离和聚类分析 ,分析结果 :Vc- 系、Vc- 系獭兔的亲缘关系最近 ;Vc-獭兔与日本大耳白兔的亲缘关系较近 ,与新西兰白兔的亲缘关系较远 ,日本大耳白与新西兰白兔的亲缘关系最远。

日本大耳白兔、新西兰白兔的遗传分化研究

应用平均基因杂合度、平均基因纯合度、等位基因有效数、基因均质度、Lewontin的Shannon信息测度 ,对日本大耳白兔、新西兰免两个群体存在的血液蛋白位点的基因频率进行遗传分析 ,研究表明 :日本大耳白兔的基因杂合度、等位基因有效数指标和Shannon信息测度值均高于新西兰白兔 。

微卫星标记对WHBE兔封闭群、日本大耳白兔和新西兰兔的遗传分析

目的分析比较大耳白黑眼兔（WHBE兔）封闭群与日本大耳白兔（Jw兔）、新西兰兔（NZW兔）基因组存在的微卫星结构，研究WHBE兔封闭群的微卫星多态性。方法利用21个微卫星位点，通过微卫星分子标记技术对WHBE兔封闭群、Jw兔和NZW兔进行遗传多样性检测和对比。结果根据初步结果，在21对微卫星引物中筛选出扩增产物稳定并且具有多态性的11对引物。WHBE兔封闭群在每个位点上的等位基因数为3～8个不等，11个位点的平均有效等位基因数为2．0402个，平均杂合度为0．4810；Jw兔在每个位点上的等位基因数为2～8个不等，11个位点的平均有效等位基因数为3．6077个，平均杂合度为0．5039；NZW兔在每个位点上的等位基因数为3～9个不等，11个位点的平均有效等位基因数为2．6537个，平均杂合度为0．5334。WHBE兔封闭群在11个微卫星位点上的平均多态信息含量（PIC）为0．6005，多位点累积个体识别率达到100％，多位点累积非父排除概率（CPE）在双亲信息都是未知情况下的为0．9613，而在得知任一亲本信息的情况下，CPE值高达0．9973。在11个微卫星座位中，9个位点上出现了WHBE兔封闭群特有等位基因，其中在Sat2、Sat5、Sat7、Sat12、Sat13、Sat16、S0144和INRACCDDV0003八个位点上WHBE兔封闭群的特有等位基因为一个，在sat8位点上为两个。结论WHBE兔8个位点的平均杂合度、平均有效等位基因数均比JW兔及NZW兔低，说明WHBE兔群体的基因纯合度高于其他两个品系，具有更优的遗传稳定性。9个WHBE兔特有的等位基因可作为区分WHBE兔封闭群和其它两个品系实验兔的分子标记。

湖北封闭群日本大耳白兔部分生物学参数的观察

目的 建立湖北封闭群日本大耳白兔生物学数据库 ,为毒理学实验提供相关的实验动物背景资料。方法 采用物理称重法测定日本大耳白兔体重、脏器重量 ;自动血球计数仪、半自动生化分析仪测定红细胞数等 10项血液有形成分和血红蛋白 ,以及碱性磷酸酶等 10项生化参数。并与国内常用新西兰和北京的大耳白实验兔有关参数进行对比。结果 提供了湖北封闭群日本大耳白兔的体重、脏器重量 ;RBC ,HGB ,MCV ,MCH ,MCHC ,HCT ,PLT ,MPV ,WBC ,W SCRW LCR ,和AST、ALT、ALP、BUN、TP、ALB、GLU、T -BIL、Grea、T -CHO等与安全性评价有关常用参数。结论 不同品种间的动物生物学特性有差异 ,即使同一品种而地区不同的封闭群动物 ,由于环境、饲养方式、营养状态不同 ,某些生物学特性和血液、生化参数也有差别。因此 ,为毒理学实验者提供实验家兔时 ,除提供微生物等级合格证外 ,还应按实验需求提供有关的生物学参数。

大耳白兔动脉血和脑脊液酸碱电解质值及其相互关系

30只正常大耳白兔 ,经股动脉穿刺插管和枕骨下经皮穿刺入枕骨下池 ,在严格隔绝空气的情况下 ,分别取得动脉血和脑脊液 (CSF)标本 ,用ABL3型血气分析仪及CN6 44型生化分析仪检测主要酸碱变量及电解质值。经统计学处理结果表明 :CSFpH及K+ 、Ca2 + 、Mg2 + 浓度 <动脉血 ,CSFPCO2 及HCO- 3、Cl- 、Na+ 、H+ >动脉血。另外 ,CSFpH与 pHa、CSFPCO2 与PaCO2 、CSF[K+ ]与 [K+ ]a及CSF[Cl- ]、[Cl- ]a均显著正相关。说明CSF主要酸碱变量及离子值均不同于动脉血 ,CSF绝不是血浆的滤过液。

不同周龄大耳白兔血液生理生化指标的测定

为了明确大耳白兔中国兽药监察所封闭群的生物学特性 ,对其血液生理生化指标进行了测定。选 5、1 0及 1 3周龄的雄兔和雌兔 ,空腹采血测定红细胞、白细胞等 1 6项血液生理指标和血糖、总蛋白等 1 6项生化指标。 1 0周龄的红细胞数、白细胞数、红细胞压积和平均红细胞血红蛋白含量高于 5周龄和 1 3周龄 ,雌雄间血液生理指标无明显差异 ;血清丙氨酸转氨酶含量随着周龄的增加而升高 ,碱性磷酸酶则随着周龄的增加而下降。与日本大耳白兔相比 ,主要血液生理指标比较接近 ,丙氨酸转氨酶、白蛋白、尿素氮、直接胆红素等血液生化指标相近 ,其他指标有所不同。测定结果表明 ,该封闭群具有不同于日本大耳白兔 (Slc:JW/ CSK)

WHBE兔血气-电解质分析及与日本大耳白兔和新西兰白兔比较研究

目的探讨WHBE兔、日本大耳白兔和新西兰白兔血气、电解质指标的差异性。方法取WHBE兔、日本大耳白兔和新西兰白兔经耳中动脉取肝素抗凝血，在NOVA血气电解质分析仪上测定血气、电解质指标。结果与日本大耳白兔比较，WHBE兔pH值、PCO2、PO2、SO2、BE-ECF、BE-B、SBC、HCO3^-、TCO2、a／A和P02／FI11个指标均明显低于日本大耳白兔（P〈0．05，P〈0．01），而Osm、Na^＋和Mg^＋＋明显高于日本大耳白兔（P〈0．01）；与新西兰白兔比较，WHBE兔pH值明显低于新西兰白兔（P〈0．01）。而Mg^＋＋明显高于新西兰白兔（P〈0．01）。结论上述结果为WHBE兔标准化提供可靠的生物学数据，同时为WHBE兔在呼吸系统和心血管疾病中的应用提供了实验依据。

天津日本大耳白兔生长期间体重增长及体尺变化的研究

通过研究天津日本大耳白兔生长期间体重及体尺的变化 ,结果表明 :兔在 3月龄内随日龄增长 ,体重持续增加 ,数学方程模拟呈直线回归形式 ,其方程式Y =- 87.16 82 43+ 2 6 .70 98X ;仔兔 2 1日龄内 ,保持最高的相对生长强度 ;大耳白兔从 1～ 84日龄的体长、胸围、胸围 /体长 (% )、耳长、耳宽、耳长 /耳宽、耳根粗、额宽。

日本大耳白兔超数排卵研究

In this paper,Japanese Giant Ear rabbits were superovulated with the same hormone combination( FSH+hCG) but the different hormone level( project 1,project 2,project 3).The results were as follows, the average number of ovulation point and the average number of oocytes recovered from project 2 and project 3 were more than which recovered from project 1(P<0.05),the average number of ovulation point(39.00±9.17),the average number of oocytes(30.67±7.71)and the average recovered rate(78.63%)recovered from spring were higher than autumn(21.58±7.10,15.17±4.97,70.27%)(P<0.05),injected the same dose of FSH with the method of constant and degressive, the results showed no significant difference(P>0.05).

WHBE兔与日本大耳白兔冠脉结扎致心肌缺血模型的比较研究

目的 复制WHBE兔冠脉结扎所致心肌缺血模型,并与日本大耳白兔比较其心血管系统的敏感性.方法 雄性WHBE兔和日本大耳白兔各20只,随机分成伪手术组和模型组,每组10只,伪手术组只开胸不结扎,模型组采用冠脉结扎复制心肌缺血模型,各组分别在造模前,造模后60 min观察sT段抬高程度,并取血测定血浆AST、CK、LDH活性的变化;用NBT染色法,结合图像分析软件计算心肌缺血梗死程度.结果 与伪手术组比,冠脉结扎后WHBE兔和日本大耳白兔模型组ST段明显抬高（P〈0.01）,梗死面积程度明显增加（P〈0.01）,且血浆AST、CK、LDH活性水平均显著升高（P〈0.05,P〈0.01）;与日本大耳白兔比,WHBE兔冠脉结扎所致心肌觖血的ST段、梗死面积程度和血浆AST、CK、LDH活性水平的上升变化程度均略高于日本大耳白兔,以梗死面积程度变化最为显著（P〈0.05）.结论 WHBE兔对冠脉结扎所致心肌缺血较为敏感,是比较理想的心肌缺血模型,更适合于心血管缺血性疾病的研究.

日本大耳白兔干扰素-γ基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

提取经ConA刺激后的日本大耳白兔外周血淋巴细胞总RNA,应用RT-PCR技术对其IFN-γ基因进行扩增和测序。将去除信号肽的IFN-γ基因片段插入原核表达载体pET-30a并在大肠杆菌中进行表达。结果显示,克隆的IFN-γ基因长为504个核苷酸,具有一个完整的开放阅读框,编码168个氨基酸,所测序列与GenBank中已登录的安哥拉兔、中国白兔、欧洲兔、新西兰兔IFN-γ同源性为100%,与獭兔同源性高达99.8%。构建的重组菌经过IPTG诱导后,通过SDS-PAGE电泳证实,IFN-γ基因片段在大肠杆菌中得到了融合表达,分子质量约为18 ku,表达量为菌体总蛋白的35%左右。以上结果为下一阶段兔IFN-γ重组蛋白生物学特性及其应用的研究奠定了基础。

WHBE兔与日本大耳白兔不同生长阶段肠道免疫功能的比较研究

目的比较WHBE兔与日本大耳白（JW）兔不同生长阶段肠道免疫功能的差异。方法分别选取离乳和2月龄WHBE兔、日本大耳白兔各8只，采用ELISA法，分别测定其血清及小肠匀浆液中分泌型IgA（SIgA）、P物质（SP）、IL-4、IFN-γ、生长抑素（SS）和血管活性肠肽（VIP）的含量水平。结果成年WHBE兔血清及小肠组织sIgA分泌水平、SS、SP含量较离乳WHBE兔明显降低，IFN-γ/IL-4比值明显升高，特别是与成年JW兔在小肠组织IgA分泌水平，SS、IFN．Y和IL-4含量方面具有显著性差异。结论WHBE兔的肠道免疫功能明显低于JW兔，可作为肠易激综合症研究的实验动物。

天津日本大耳白兔种群选育的研究

实验通过对天津日本大耳白兔经过三个世代的种群选育 ,其体形外貌基本符合日本大耳白兔品种特征。获得如下结果 :改善了生长性能 ,生长迅速 ,饲料报酬高 ,45～ 90日龄增长速度快 ;耳长和脚掌性能指标良好 ,耳朵长 ,直立 ,血管网明显 ,脚掌粗壮 ,抗脚皮炎能力强 ;繁殖性能有所提高 ,窝产活仔数、初生窝重、断奶成活率等均有升高 ,但差异不显著。

日本大耳白兔血常规及血气指标的正常值检测

[目的]使用新方法检测日本大耳白兔血常规及血气指标的正常值。[方法]选用健康3月龄日本大耳雄性白兔30只,用CD-1200全自动血液分析仪和i-TAT便携式血气分析仪分别系统测定白兔的静脉血WBC、RBC、HGB等15项血常规指标以及TCO2、PCO2、BEecf等10项血气指标。[结果]15项血常规指标检测结果分别为:WBC(7.20±1.49)109/L、RBC(6.20±0.41)1012/L、HGB(150.60±7.71)g/L、HCT(0.45±0.03)、MCV(71.80±4.05)fL、MCH(24.90±1.07)pg、MCHC(341.90±38.49)g/L、RDW(16.80±1.19)%、PLT(149.50±56.63)109/L、PCT(1.10±0.46)%、MPV(6.63±1.17)fL、PDW(15.40±1.33)%、LYM(4.70±1.04)109/L、MID(1.46±0.46)109/L、GRN(1.30±0.49)109/L;10项血气指标分别为:Na(143.250±2.193)mmol/L、K(3.210±0.371)mmol/L、TCO(2 17.130±2.330)mmHg、iCa(1.310±0.132)mmol/L、pH值7.280±0.035、PCO(2 31.71±3.88)mmHg、PO(2 56.92±6.75)mmHg、HCO3(-16.12±2.26)mmol/L、BEECF(-5.45±4.31)mmol/L、SO(2 82.40±5.62)%。[结论]该试验结果可作为教学参考,也可为相关研究提供参考。