微卫星技术在大耳白黑眼兔近交系培育中的监测分析

利用微卫星技术监测大耳白黑眼兔(white hair black eyes rabbits,WHBE兔)近交培育中第五代(F5)、第六代(F6)和第七代(F7)的遗传多样性。选取21个微卫星座位,筛选出扩增产物稳定并且具有多态性的11对微卫星引物用于本研究。结果表明,F5代WHBE兔在每个座位上的等位基因数(Na)为3～9个不等,11个座位的平均有效等位基因数(Ne)为1.81个,平均观察杂合度(Ho)和平均多态信息含量(PIC)分别为0.381和0.524,累积个体识别率(CDP)达到100%,累积非父排除概率(CPE)在双亲信息都是未知情况下的为0.926,而在得知任一亲本信息的情况下,CPE值为0.993。F6代WHBE兔在每个座位上的Na为3～8个不等,11个座位的平均Ne为1.68个,平均Ho和PIC值分别为0.356和0.548,CDP达到100%,CPE在双亲信息都是未知情况下的为0.931,而在得知任一亲本信息的情况下,CPE值为0.994。F7代WHBE兔在每个座位上的Na为2～6个不等,11个座位的Ne为1.51个,平均Ho和PIC值分别为0.287和0.498,CDP达到100%,CPE在双亲信息都是未知情况下的为0.891,而在得知任一亲本信息的情况下,CPE值为0.986。在近交系培育过程中,从F5代到F7代,WHBE兔的平均Ne和平均Ho都呈下降趋势,提示随着近交代数的增加,WHBE兔的基因纯合度越来越高。

WHBE兔血液蛋白的特性

目的比较大耳白黑眼兔(WHBE兔)与日本大耳白兔(JW兔)和新西澜兔(NZW兔)血液蛋白的多态性,从分子水平了解WHBE兔特殊性状的遗传背景。方法采用聚丙烯酰胺凝胶电泳对WHBE兔、JW兔和NZW兔血液中的前白蛋白(Pr),后白蛋白(Po),前转铁蛋白1(Prt1),前转铁蛋白2(Prt2),转铁蛋白1(Tf1),转铁蛋白2(Tf2),后转铁蛋白(Ptf),慢α球蛋白(Sag)、血红蛋白(Hbα、Hbβ)和白蛋白(Alb)共11个蛋白位点进行检测。结果Pr、Ptf、Hbα、Hbβ、Alb、Po、Sag和Prt2在所有实验兔个体中的表型一致,而Tf1、Tf2和Prt1的表型在各实验兔品系间存在显著差异。在Tf1位点,NZW兔以BC表型为主,无AA型;JW兔只有AA型,而WHBE兔以AB型为主。在Tf2位点,NZW兔有AA型,而JW兔和WHBE兔无AA型。在Prt1位点,NZW兔无AB、BB和BC表型而有AC表型。NZW兔蛋白位点的平均杂合度大于JW兔和WHBE兔。JW兔与WHBE兔的遗传距离最近。结论Tf1、Tf2和Prt1可作为区分NZW兔、JW兔和WHBE兔的特征标记,并且与WHBE兔特殊性状形成有关。JW兔与WHBE兔的亲缘关系最近。

RAPD标记技术用于WHBE兔近交系培育中的遗传分析

目的探讨用随机引物扩增多态性DNA技术对大耳白黑眼兔近交系培育中的遗传监测作用。方法选用F4、F5、F6和F7代共70只WHBE兔的皮肤组织样品提取基因组DNA,用60个随机引物对基因组DNA进行PCR扩增,根据电泳结果筛选出其中25个多态性较高的引物进行RAPD-PCR分析,再利用Popgene 3.2统计软件对共检测到的584个扩增片段进行遗传分析,获得实验数据。结果①F4代扩增得到124条片段,F5代扩增得到150条片段,F6扩增得到152条片段,F7代扩增得到158条条带;其中F4代与F5代的共有条带数为105,F5代与F6代的共有条带数为119,F6代与F7代的共有条带数为125。②F4代与F5代的遗传相似度为0.7674,F5代与F6代的遗传相似度为0.7984,F6代与F7代的遗传相似度为0.8092。结论随着WHBE兔近交培育代数的增加,遗传相似度呈上升趋势,说明RAPD技术可以用于WHBE兔近交系培育的遗传检测。

WHBE兔骨髓、外周血和脾脏来源树突状细胞的比较

目的建立大耳白黑眼兔（WHBE兔）树突状细胞（Dc）体外诱生培养的经济有效的方法，为进一步实验奠定基础。方法分离WHBE兔骨髓、外周血和脾脏三种来源单核细胞分别作为DC的前体细胞，以GM-CSF和IL-4联合诱生未成熟DC，并经LPS刺激分化成熟。通过DC形态学和超微结构观察、表型鉴定以及同种异体混合淋巴细胞反应检测，比较三种DC的生物学特征和免疫功能。结果三种来源单核细胞经LPS刺激后其表面均显示出明显的树枝状突起，外周血和脾脏的DC分化速度较骨髓稍快，均能成功诱生出106～107数量级的DC，其中外周血来源获得的数量最多。CD86分子表达显著升高，脾脏来源DC的表达稍高于另外两组。具有显著刺激T细胞增殖的能力（P〈0．05），但三组之间无显著性差异（P〉0．05）。结论采集外周血单核细胞体外诱导扩增DC是获得WHBE兔树突状细胞最简便经济的手段。