重组人脂联素融合蛋白在大肠埃希菌BL21中的表达

目的在大肠埃希菌BL21中对构建的重组人脂联素质粒pET-32a(+)/AP进行诱导表达,并对产物进行纯化、鉴定。方法将pET-32a(+)质粒和重组pET-32a(+)/AP质粒转化到大肠埃希菌BL21中进行诱导表达,建立表达体系,筛选高表达的克隆子,用不同诱导时间和不同异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导浓度确定最佳诱导条件,用Ni^(2+)金属层析柱进行蛋白亲和层析,对纯化蛋白进行浓缩,蛋白质印迹鉴定所诱导的蛋白。结果得到分子量为43 kD的新生蛋白,经蛋白质印迹鉴定为重组脂联素融合蛋白。结论将重组pET-32a(+)/AP质粒转化到大肠埃希菌BL21中,建立表达体系,且获得高效表达。

IBDV VP2基因重组质粒pBV220表达条件的优化

采用三角瓶小量法振荡培养，对含传染性法氏囊病病毒VP2基因的重组质粒pBV220在大肠埃希菌BL21内表达条件进行优化。在37。C时诱导，对起始OD600值（0．40±0．025～0．65±0．025）进行筛选；在42℃时诱导，对起始OD600值（O．40±0．025～0．65±0．025）进行筛选；在37℃和42℃时诱导，分别对诱导时间（5、6、7、8h）及待选培养基（R1、R2、R3）进行筛选。以菌体湿重和菌体VP2蛋白表达水平两个指标进行统计分析及综合评价。结果表明，37℃时诱导，最适宜起始OD600为0．45±0．025，最佳诱导时间为7h，最佳培养基是R1；42℃时诱导，最适宜起始OD600为0．40±0．025，最佳诱导时间为5h，最佳培养基是R2。42℃时的每一诱导时间组菌体湿重和VP2表达水平都显著低于37℃时。因此，以重组质粒pBV220的大肠埃希菌BL21表达IBDVVP2基因，在37℃时诱导表达要比42℃时好。