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大肠杆菌不耐热肠毒素B亚基表达系统的研究进展 被引量:2
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作者 刘汉清 武力 +2 位作者 李美娣 王甜 苏胖 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期333-338,共6页
随着分子生物学的快速发展,各种工程菌株的遗传操作体系逐渐完善,蛋白质、酶和多肽制剂等产品的生产制备在满足科研需要的同时,也为生物制剂市场带来了巨大的经济效益[1]。原核和真核表达系统是使用最广泛和研究最成熟的表达系统,利用... 随着分子生物学的快速发展,各种工程菌株的遗传操作体系逐渐完善,蛋白质、酶和多肽制剂等产品的生产制备在满足科研需要的同时,也为生物制剂市场带来了巨大的经济效益[1]。原核和真核表达系统是使用最广泛和研究最成熟的表达系统,利用原核或真核表达系统获取各种发酵产物开始进入工业化生产阶段[2]。 展开更多
关键词 大肠杆菌不耐热肠毒素 生物制剂 表达系统 b亚基 生产制备 遗传操作 分子生物学 工程菌株
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大肠杆菌耐热肠毒素b及其致动物腹泻的机理 被引量:5
2
作者 尤建嵩 牛冬燕 +3 位作者 崔乃忠 孙永欣 金礼吉 徐永平 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期847-851,共5页
介绍了大肠杆菌耐热肠毒素b(STb)的编码基因、理化性质、免疫学特征、分泌特征、毒性相关氨基酸残基、空间结构、膜受体以及STb致动物腹泻的机理。认为STb是一种十分重要的肠毒素,应进一步加强对STb及其致腹泻机理的研究。
关键词 肠毒素大肠杆菌 耐热肠毒素b 腹泻 机理
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大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位的分泌表达与性质鉴定 被引量:6
3
作者 冯强 杨珺 +3 位作者 张卫军 郭桐生 刘开云 邹全明 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期364-368,共5页
目的 较高效率分泌表达大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位并鉴定其性质。方法 将编码成熟大肠杆菌不耐热肠毒素 (LTB)的基因引入pET2 2b(+)并转化E .coliBL2 1(DE3) ;重组工程菌在改良M9 CAA培养基内进行表达 ;对分泌表达的LTB进行纯化后... 目的 较高效率分泌表达大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位并鉴定其性质。方法 将编码成熟大肠杆菌不耐热肠毒素 (LTB)的基因引入pET2 2b(+)并转化E .coliBL2 1(DE3) ;重组工程菌在改良M9 CAA培养基内进行表达 ;对分泌表达的LTB进行纯化后进行神经节苷脂 (GM1)结合活性、免疫原性与黏膜免疫佐剂活性的鉴定。结果 LTB既能分泌表达至胞周质又能以包含体形式表达 ,两者都与pelB信号肽准确分离。纯化出的LTB具有正常的GM1结合活性、免疫原性及黏膜免疫佐剂活性。结论 pET2 2b(+)质粒的pelB信号肽可使LTB以较高效率分泌表达。 展开更多
关键词 大肠杆菌不耐热肠毒素b亚单位 pelb信号肽 分泌表达
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重组大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位的纯化及生物学活性鉴定 被引量:3
4
作者 田文标 邹全明 +4 位作者 吴超 张卫军 杨珺 冉向阳 王缚鲲 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期131-134,共4页
目的 纯化rLTB并对其生物学功能进行初步研究。方法 重组基因工程菌发酵后 ,以包涵体形式表达的rLTB经过洗涤、变性溶解后 ,分别采用QSepharoseTM HighPerformance阴离子交换层析和PhenylFF(highsub)疏水层析对其进行纯化并透析复性 ... 目的 纯化rLTB并对其生物学功能进行初步研究。方法 重组基因工程菌发酵后 ,以包涵体形式表达的rLTB经过洗涤、变性溶解后 ,分别采用QSepharoseTM HighPerformance阴离子交换层析和PhenylFF(highsub)疏水层析对其进行纯化并透析复性 ,然后采用SDS PAGE和HPLC检测纯度 ,并选用ELISA、动物实验和Western blotting实验对纯化蛋白的生物学活性进行鉴定。结果 得到纯度达 97 85 %的rLTB ,复性的rLTB经检测具有良好的生物学活性。结论 得到纯度较高、生物学活性较好的rLTB 。 展开更多
关键词 大肠杆菌 不耐热肠毒素 b亚单位 纯化 生物学活性
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重组大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位表达条件的优化及其佐剂作用 被引量:2
5
作者 雷清 黄思扬 +3 位作者 应莲芳 梁凌宇 马亚茹 蒋琳 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2008年第3期174-177,共4页
目的优化重组大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)的表达条件,并检测其黏膜佐剂作用。方法通过向LB培养基中添加葡萄糖(终浓度为0.5%)、低温培养诱导等方法诱导LTB的表达;采用阳离子交换法对目的蛋白进行纯化;以LTB作为佐剂进行免疫试验... 目的优化重组大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)的表达条件,并检测其黏膜佐剂作用。方法通过向LB培养基中添加葡萄糖(终浓度为0.5%)、低温培养诱导等方法诱导LTB的表达;采用阳离子交换法对目的蛋白进行纯化;以LTB作为佐剂进行免疫试验。结果可溶性重组大肠杆菌不耐热肠毒素(LTB)的表达量明显提高,纯化后蛋白含量达95%以上,经纯化的LTB作为三价流感裂解疫苗或gD抗原的佐剂免疫BALB/c小鼠,可提高小鼠血清及黏膜的抗体水平,且其效果与铝化剂及福氏佐剂相当或更高。结论优化了LTB的表达条件,且表达的LTB具有较强的黏膜免疫佐剂作用。 展开更多
关键词 大肠杆菌不耐热肠毒素b亚单位 黏膜免疫 表达 纯化 佐剂
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大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位基因工程菌发酵工艺的研究 被引量:4
6
作者 田文标 邹全明 张卫军 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期115-118,共4页
目的 研究建立大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位 (LTB)基因工程菌的发酵工艺。方法 先通过摇瓶培养初步确定工程菌的最适生长条件 ,然后以此为基础在发酵罐中比较、筛选影响菌体生长和目的蛋白表达率的各种条件 ,并进一步对发酵工艺进行... 目的 研究建立大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位 (LTB)基因工程菌的发酵工艺。方法 先通过摇瓶培养初步确定工程菌的最适生长条件 ,然后以此为基础在发酵罐中比较、筛选影响菌体生长和目的蛋白表达率的各种条件 ,并进一步对发酵工艺进行改良优化。结果 经试验确定了rLTB基因工程菌发酵罐培养的各项条件的最佳组合 ,优化后工程菌菌体产量平均可达 40 5g/L ,目的蛋白的表达率平均为 3 0 6%。结论 建立了稳定、高效的工程菌发酵工艺。 展开更多
关键词 毒素大肠杆菌 不耐热肠毒素b亚单位 发酵
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大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位的克隆、表达及初步纯化 被引量:3
7
作者 黄思扬 马超 +3 位作者 雷清 蒋琳 沈心亮 王锐 《生物技术》 CAS CSCD 2005年第6期17-20,共4页
为研究大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)的佐剂活性。从大肠杆菌中调出LTB的原始基因,将该基因克隆、构建pET21b-LTB表达载体、转化大肠杆菌BL21(DE3)进行表达,并对表达产物进行初步纯化;经DNA测序、SDS-PAGE、ELISA检测,结果表明成功... 为研究大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)的佐剂活性。从大肠杆菌中调出LTB的原始基因,将该基因克隆、构建pET21b-LTB表达载体、转化大肠杆菌BL21(DE3)进行表达,并对表达产物进行初步纯化;经DNA测序、SDS-PAGE、ELISA检测,结果表明成功构建了能够稳定表达可溶性LTB的菌株,并获得初步纯化LTB的方法。为今后LTB的研究及应用奠定了基础。 展开更多
关键词 大肠杆菌不耐热肠毒素b亚单位 表达 纯化 粘膜佐剂
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大肠杆菌不耐热肠毒素A亚基K63突变体表达载体的构建及其在真核细胞中的表达 被引量:1
8
作者 韩冬梅 李秀锦 +4 位作者 李楠 王微 李巍 潘素敏 仲飞 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第4期5-8,共4页
采用PCR方法从产肠毒素大肠杆菌(ETEC)44815菌株基因组中扩增不耐热肠毒素A亚基(LTA)编码基因,并将大肠杆菌不耐热肠毒素A亚基基因插入到含有人CD5信号肽序列的pcDNACD5sp真核表达载体中,构建成pcDNACD5sp/LTA分泌性真核表达载... 采用PCR方法从产肠毒素大肠杆菌(ETEC)44815菌株基因组中扩增不耐热肠毒素A亚基(LTA)编码基因,并将大肠杆菌不耐热肠毒素A亚基基因插入到含有人CD5信号肽序列的pcDNACD5sp真核表达载体中,构建成pcDNACD5sp/LTA分泌性真核表达载体,然后采用定点突变方法将大肠杆菌不耐热肠毒素A亚基第63位的丝氨酸改变为赖氨酸,构建成pcDNACD5sp/LTAK63突变体,经磷酸钙介导将pcDNACD5sp/LTAK63质粒转染HEK293T细胞进行表达。结果表明:试验克隆的大肠杆菌不耐热肠毒素A亚基基因与GenBank中大肠杆菌不耐热肠毒素A亚基基因序列相比,碱基序列、氨基酸序列同源性均达99%;表达产物经Western-blot检测,结果说明构建的含有人CD5信号肽的LTAK63基因能够在真核细胞中进行分泌性表达。 展开更多
关键词 大肠杆菌 大肠杆菌不耐热肠毒素A亚基 基因克隆 定点突变 CD5信号肽 真核表达
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大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位与产气荚膜梭菌β_1、β_2毒素融合基因的构建及表达 被引量:1
9
作者 曾瑾 邓光存 +3 位作者 陈耀光 张思浓 张玉婷 王玉炯 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第9期21-23,共3页
为了构建含大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)与产气荚膜梭菌β1、β2毒素融合基因的表达菌株,试验将亚克隆LTB基因融合到β2-β1毒素基因的上游,构建了pET30a-LTB-β2-β1原核表达载体,经IPTG诱导表达,对其表达产物进行SDS-PAGE检测和W... 为了构建含大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)与产气荚膜梭菌β1、β2毒素融合基因的表达菌株,试验将亚克隆LTB基因融合到β2-β1毒素基因的上游,构建了pET30a-LTB-β2-β1原核表达载体,经IPTG诱导表达,对其表达产物进行SDS-PAGE检测和Western-blot分析。结果表明:重组菌株可以表达LTB-β2-β1融合蛋白,且该融合蛋白可以被相应的抗体识别。 展开更多
关键词 产气荚膜梭菌 毒素 大肠杆菌不耐热肠毒素b亚单位(LTb) 融合基因
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重组大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位基因表达系统构建 被引量:1
10
作者 全胜 严杰 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2003年第2期14-15,20,共3页
从E .coli 4 4 815株基因组DNA中扩增不耐热肠毒素B亚单位 (LTB)基因并分析了核苷酸序列 ,构建pET32a的LTB表达载体 ,在E .coliBL2 1DE3宿主菌中用不同浓度的IPTG诱导表达 ,采用SDS PAGE鉴定表达产物。克隆的LTB基因与报道的核苷酸和氨... 从E .coli 4 4 815株基因组DNA中扩增不耐热肠毒素B亚单位 (LTB)基因并分析了核苷酸序列 ,构建pET32a的LTB表达载体 ,在E .coliBL2 1DE3宿主菌中用不同浓度的IPTG诱导表达 ,采用SDS PAGE鉴定表达产物。克隆的LTB基因与报道的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为 99.12 %~ 99.71%和 97.5 8%~ 99.19% ,pET32a LTB BL2 1DE3系统表达的rLTB量约占细菌总蛋白的 30 %。 展开更多
关键词 重组大肠杆菌不耐热肠毒素 b亚单位 基因表达系统 构建
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重组大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位在鸭体内的吸收代谢及组织分布
11
作者 周晓丽 王一成 +3 位作者 姜平 袁秀芳 李军星 杜晓莉 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2014年第2期104-109,共6页
研究重组大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(rLTB)在鸭体内的吸收代谢及组织分布,为rLTB的临床应用安全性提供依据。试验鸭分别肌注1,50,100 mg/kg rLTB后,以神经节苷脂GM1酶联免疫吸附法(GM1-ELISA)测定注射后不同时间点鸭血清中的rLTB含量... 研究重组大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(rLTB)在鸭体内的吸收代谢及组织分布,为rLTB的临床应用安全性提供依据。试验鸭分别肌注1,50,100 mg/kg rLTB后,以神经节苷脂GM1酶联免疫吸附法(GM1-ELISA)测定注射后不同时间点鸭血清中的rLTB含量;连续3次肌注rLTB后,观察临床症状和剖检病理变化,并采集心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏和大脑制备组织切片,HE染色观察组织病理学变化,免疫酶组织化学染色观察rLTB在各脏器内的分布及含量变化。结果表明:鸭血清中的rLTB含量变化及维持时间与rLTB注射剂量呈正相关。1 mg/kg注射组2 h达到峰值,维持至6 h开始下降,24 h后基本检测不到;50,100 mg/kg注射组分别于2 h和1 h达到峰值,并均维持至12 h才开始下降,48 h后基本检测不到。HE染色切片显示50 mg/kg注射组肝细胞轻度浊肿变性,肺脏轻微炎症;100mg/kg注射组肝细胞浊肿变性明显、肺脏重度炎症、脑组织出现局灶性坏死。免疫组化染色结果显示,在被检脏器中均检出rLTB,以大脑含量最高,脾脏和肝脏次之,心脏和肺脏检出量低。rLTB大剂量肌肉注射可引起鸭一定的组织学病变,对鸭的安全使用剂量应不超过50 mg/kg。 展开更多
关键词 大肠杆菌不耐热肠毒素b亚单位 吸收代谢 组织分布
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肠毒素大肠杆菌LT—B基因转基因马铃薯口服免疫原性研究 被引量:2
12
作者 王利 赵凯 +2 位作者 陈琦 姜丽丽 贾宇臣 《科学技术与工程》 2011年第27期6560-6563,共4页
探讨马铃薯表达的产肠毒素大肠杆菌热敏肠毒素B亚基口服免疫原性,选择4周龄的昆明白小鼠。转基因马铃薯块茎经冷冻干燥后,研磨成粉状,以灌胃给药的方式对小鼠进行免疫。分0.2 g、0.4 g和0.6 g三个剂量组,免疫三次,每周一次。对照组用5μ... 探讨马铃薯表达的产肠毒素大肠杆菌热敏肠毒素B亚基口服免疫原性,选择4周龄的昆明白小鼠。转基因马铃薯块茎经冷冻干燥后,研磨成粉状,以灌胃给药的方式对小鼠进行免疫。分0.2 g、0.4 g和0.6 g三个剂量组,免疫三次,每周一次。对照组用5μg细菌中表达的抗原蛋白腹腔注射免疫小鼠,空白组小鼠饲喂普通鼠粮。利用ELISA方法对小鼠血清、粪便特异性抗体表达进行分析。结果有45%小鼠经转基因马铃薯口服免疫后可诱导特异性的免疫应答。与细菌表达的抗原免疫反应相比,血清IgG反应和黏膜sIgA反应略强或相当。说明产肠毒素大肠杆菌转基因植物疫苗免疫动物可诱导特异的系统免疫应答和黏膜免疫应答。为利用植物生产预防大肠杆菌性腹泻可食用的口服疫苗,保护儿童免受细菌性腹泻的侵染奠定了基础。 展开更多
关键词 植物疫苗 腹泻 肠毒素大肠杆菌热敏肠毒素 b 亚基 免疫原性
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淋球菌nspA和大肠杆菌ltB融合基因的构建、表达及鉴定 被引量:9
13
作者 秦勇 胡四海 +3 位作者 张愉快 余敏君 唐莹 刘刚 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期197-201,共5页
通过基因工程的方法构建奈瑟氏淋球菌表面蛋白A(Neisseria gonorrhoeae surface protein A,nspA)和大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(B subunit of Escherichia coli heat-labile enterotoxin,ltB)融合基因的原核表达载体,对其进行表达与鉴... 通过基因工程的方法构建奈瑟氏淋球菌表面蛋白A(Neisseria gonorrhoeae surface protein A,nspA)和大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(B subunit of Escherichia coli heat-labile enterotoxin,ltB)融合基因的原核表达载体,对其进行表达与鉴定,为后续融合蛋白LTB-NspA的生物活性分析及其作为淋球菌粘膜免疫疫苗的研究奠定基础。用PCR法从标准菌株分别扩增出nspA、ltB基因,用重组PCR法通过接头将ltB与nspA融合,将其插入pEG30a中,转入BL21中表达。经测序、SDS-PAGE和Western blot分析,证实成功构建了ltB-nspA融合基因的原核表达载体,并在BL21中表达。ltB-nspA融合基因的成功表达,为进一步研究其生物活性及淋球菌粘膜免疫疫苗的研究奠定了一定基础。 展开更多
关键词 奈瑟氏淋球菌表面蛋白A 大肠杆菌不耐热肠毒素b亚单位 克隆 基因融合 表达 鉴定
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猪圆环病毒2型Cap蛋白部分基因序列与大肠杆菌LTB成熟肽基因的融合表达及免疫原性研究 被引量:4
14
作者 侯强红 余兴龙 +5 位作者 李微 李润成 罗维 刘浩 尹恒 刘忠华 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期847-851,共5页
为了获得猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV-2)衣壳蛋白(Cap)基因3’端396 bp的片段与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)成熟肽编码区融合基因的高效表达,并检验重组蛋白的免疫保护效果。以含PCV-2全基因组的pMDT PCV-2质粒... 为了获得猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV-2)衣壳蛋白(Cap)基因3’端396 bp的片段与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)成熟肽编码区融合基因的高效表达,并检验重组蛋白的免疫保护效果。以含PCV-2全基因组的pMDT PCV-2质粒为模板,用PCR的方法扩增PCV-2 Cap基因,并将其克隆到pET28a(+)中,构建得到pET-Cap质粒,利用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切切下Cap基因3’末端396 bp的片段,插入到pET-LTB原核表达质粒LTB基因的3’末端,从而构建pET-LTB△Cap原核表达质粒,将其转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS后,用IPTG诱导重组菌,用SDS-PAGE电泳和Western blot检测诱导物。表达产物经初步纯化后用昆明系小白鼠做免疫保护实验。结果表明:pET-LTB△Cap重组融合表达质粒在大肠杆菌中实现了高效表达,融合蛋白分子量约为29Ku,表达量约占菌体蛋白的36.67%,融合蛋白能被PCV-2阳性血清识别。攻毒后,所有小鼠临床表现正常。用PCR检测有1/8的免疫小鼠感染了PCV-2,而对照组8只小鼠都感染了PCV-21。PCV-2 Cap基因3’端396 bp的片段与LTB基因融合能实现高效表达,表达产物免疫的小白鼠可抵抗PCV-2的攻击此研究为PCV-2基因工程疫苗的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 大肠杆菌不耐热肠毒素b亚单位(LTb) 融合表达 免疫原性
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表达大肠杆菌LT-B/ST融合抗原的减毒鼠伤寒沙门氏菌株的构建 被引量:1
15
作者 徐兵 舒东 +2 位作者 张兆山 李淑琴 俞守义 《生物技术通讯》 CAS 1998年第4期264-267,共4页
编码LT-B/ST融合抗原的基因插入pYA248载体中,构建了重组质粒pXZL66。该重组质粒转入无毒鼠伤寒沙门氏菌SR-11,ΔCya,Δcrp,Δasd菌株X4072。此无抗药性的杂合菌株X4072(pXZL66)表达的LT-B/ST融合抗原具有LT和ST抗原性而没有生物毒性,... 编码LT-B/ST融合抗原的基因插入pYA248载体中,构建了重组质粒pXZL66。该重组质粒转入无毒鼠伤寒沙门氏菌SR-11,ΔCya,Δcrp,Δasd菌株X4072。此无抗药性的杂合菌株X4072(pXZL66)表达的LT-B/ST融合抗原具有LT和ST抗原性而没有生物毒性,可望成为预防ETEC腹泻和相应的沙门氏菌病双价口服活疫苗候选株。 展开更多
关键词 肠毒素大肠杆菌 热敏肠毒素b亚基 耐热肠毒素 鼠伤寒沙门氏菌
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大肠杆菌LTB与幽门螺杆菌HSPA融合表达载体的构建与表达
16
作者 郭红 邹全明 +2 位作者 赵晓晏 吴超 毛旭虎 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期644-646,共3页
目的 构建大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位的包涵体形式融合表达载体。方法 PCR扩增LtB基因 ,并在其 5’端去掉信号肽 ,3’端去掉终止子 ,引入编码YPQD接头 ,通过PstI +BamHI酶切位点重组于PinPointTM Xa Ⅲ载体上 ,转化E .coliJM1 0 9,S... 目的 构建大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位的包涵体形式融合表达载体。方法 PCR扩增LtB基因 ,并在其 5’端去掉信号肽 ,3’端去掉终止子 ,引入编码YPQD接头 ,通过PstI +BamHI酶切位点重组于PinPointTM Xa Ⅲ载体上 ,转化E .coliJM1 0 9,SDS PAGE及Western blot分析其表达。结果 成功构建了LTB融合表达质粒 ,并将幽门螺杆菌热休克蛋白A亚单位与之融合获得了表达。结论 LTB融合表达载体的成功构建为研究分子内粘膜佐剂特性奠定了基础。 展开更多
关键词 不耐热肠毒素b亚单位 融合表达 载体 HSPA 幽门螺杆菌 大肠杆菌 LTb
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重组大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位的表达、纯化及黏膜佐剂活性研究 被引量:2
17
作者 吴超 冯强 +3 位作者 曾韦锟 郭桐生 高志刚 邹全明 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期307-311,共5页
目的 对大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)进行基因克隆、重组表达、蛋白纯化和黏膜佐剂活性分析。方法 应用PCR技术从产肠毒素大肠杆菌基因组中扩增出不耐热肠毒素B基因,将此构建于原核表达载体pET 11C,并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达... 目的 对大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)进行基因克隆、重组表达、蛋白纯化和黏膜佐剂活性分析。方法 应用PCR技术从产肠毒素大肠杆菌基因组中扩增出不耐热肠毒素B基因,将此构建于原核表达载体pET 11C,并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,然后采用D(+) immobilizedgalactose亲和层析柱对重组蛋白进行纯化。以纯化后重组LTB为佐剂,与幽门螺杆菌重组尿素酶B亚单位蛋白(rUreB)共同口服和滴鼻免疫BALB c小鼠,分析重组LTB的黏膜佐剂活性。结果 PCR扩增出390 bp LTB基因,与GenBank公布的核苷酸序列的相似性为99.5%。重组LTB蛋白的表达率为6%,以胞周质分泌形式表达,经亲和层析后蛋白纯度大于95%。该重组蛋白保持了与神经节苷脂GM1结合的生物学活性和良好的免疫原性及免疫反应性。动物试验表明,重组LTB与rUreB抗原共同口服和滴鼻免疫小鼠后的特异性血清IgG及鼻腔、气管、胃黏膜和小肠黏膜sIgA水平显著高于单独rUreB抗原免疫组(P<0.05)。结论 所获得的重组LTB具有较好的黏膜佐剂活性,为其在黏膜疫苗中的应用奠定基础。 展开更多
关键词 大肠杆菌不耐热肠毒素b亚单位 黏膜佐剂 活性研究 bL21(DE3) 肠毒素大肠杆菌 bALb/c小鼠 神经节苷脂GM1 肠毒素b基因 原核表达载体 重组蛋白 PCR技术 亲和层析柱 亚单位蛋白 幽门螺杆菌 LTb基因 核苷酸序列 免疫反应性
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大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位的原核表达及活性鉴定 被引量:2
18
作者 杜联峰 孙万邦 宋明英 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2009年第5期461-463,共3页
目的克隆大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(ltB)基因,构建其原核表达质粒,并对表达产物进行活性鉴定。方法采用PCR技术从产毒大肠杆菌129株基因组DNA中扩增ltB基因,克隆入载体pET-32a(+)中,构建原核表达质粒pET-32a(+)-ltB,转化E.coli BL21(... 目的克隆大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(ltB)基因,构建其原核表达质粒,并对表达产物进行活性鉴定。方法采用PCR技术从产毒大肠杆菌129株基因组DNA中扩增ltB基因,克隆入载体pET-32a(+)中,构建原核表达质粒pET-32a(+)-ltB,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,Ni2+-NTA树脂层析柱进行纯化,纯化产物采用ELISA法鉴定其与牛GM1的结合活性。结果重组表达质粒经菌落PCR鉴定证明构建正确,所克隆的ItB基因与GenBank中报道的相应核苷酸序列的同源性为99.9%。重组菌诱导4h,目的蛋白表达量最高,约占菌体总蛋白的25%。纯化的重组LTB蛋白纯度约为96%,具有与牛GM1特异性结合的生物学活性。结论已成功克隆了ltB基因,并构建了其原核表达质粒,表达的重组蛋白具有一定的生物学活性。 展开更多
关键词 大肠杆菌不耐热肠毒素b亚单位 原核表达 黏膜佐剂
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大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位对鸭禽流感疫苗的免疫效果 被引量:2
19
作者 周晓丽 王一成 +3 位作者 姜平 袁秀芳 李军星 杜晓莉 《畜牧与兽医》 北大核心 2014年第5期98-101,共4页
从大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)的生物安全性、对鸭的毒副作用以及对鸭禽流感疫苗免疫增强效果等方面进行研究,结果表明,LTB制品中未检测到自身编码基因和抗性标记基因残留;高剂量LTB能诱导产生抗LTB自身抗体,并与剂量呈正相关;当... 从大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)的生物安全性、对鸭的毒副作用以及对鸭禽流感疫苗免疫增强效果等方面进行研究,结果表明,LTB制品中未检测到自身编码基因和抗性标记基因残留;高剂量LTB能诱导产生抗LTB自身抗体,并与剂量呈正相关;当使用剂量增大至50 mg/kg时,试验鸭表现出一定的神经症状及组织学病变;肌肉注射1 mg/kg LTB可显著提高禽流感灭活疫苗免疫鸭的血凝抑制(HI)抗体滴度。研究表明LTB具有增强禽流感疫苗免疫效果的潜力,且对鸭的安全使用剂量不超过50 mg/kg。 展开更多
关键词 大肠杆菌不耐热肠毒素b亚单位 禽流感疫苗
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大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位的原核表达、纯化及其黏膜免疫佐剂作用 被引量:1
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作者 崔文禹 李媛媛 +3 位作者 单璞 凌媛 李计来 徐静 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2011年第12期1417-1420,共4页
目的原核表达、纯化大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(Heat-labile enterotoxin B subunit,LTB),并评价其黏膜免疫的佐剂作用。方法从产毒素大肠杆菌44815菌株中扩增出LTB基因,克隆至质粒pET-32a(+)中,构建重组原核表达质粒pET-32a(+)-LTB,... 目的原核表达、纯化大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(Heat-labile enterotoxin B subunit,LTB),并评价其黏膜免疫的佐剂作用。方法从产毒素大肠杆菌44815菌株中扩增出LTB基因,克隆至质粒pET-32a(+)中,构建重组原核表达质粒pET-32a(+)-LTB,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,IPTG诱导表达,表达的LTB经纯化后进行神经节苷脂GM1结合活性及黏膜免疫佐剂活性鉴定。结果重组表达质粒经双酶切及测序鉴定证明构建正确;重组LTB主要为可溶性表达,表达量约占菌体总蛋白的15%;纯化的LTB纯度可达95%以上,可与兔抗CTB血清发生特异性反应,且具有GM1结合活性及良好的黏膜免疫佐剂活性。结论在大肠杆菌中成功表达了重组LTB蛋白,纯化的LTB具有良好的黏膜免疫佐剂活性。 展开更多
关键词 大肠杆菌不耐热肠毒素b亚单位 免疫 黏膜 佐剂 免疫
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