可溶型人干细胞因子cDNA的克隆表达、复性与纯化

目的 :构建可溶型人干细胞因子 (hSCF)基因的表达载体。优化培养条件 ,实现hSCF基因在大肠杆菌中的高表达。方法 :利用PCR技术 ,以人淋巴结cDNA为模板扩增并克隆hSCF基因。用简并PCR对hSCF基因 5′端的序列进行修饰 ,以实现在大肠杆菌中的高效表达 ;用MTT比色法测定初步复性和纯化的hSCF蛋白的生物学活性。结果 :扩增并克隆了hSCF成熟肽cDNA。将其插入表达载体pBV2 2 0构建了hSCF基因的表达质粒 ,并在大肠菌中初步表达。表达量占总菌体的 2 0 %以上 ,优化培养条件后表达量可达到 4 0 %以上 ,表达产物为包涵体。将包涵体溶解在 8mol/L脲或 7mol/L盐酸胍中 ,用疏水色谱法进行复性并同时纯化 ,得到具有天然生物学活性的rhSCF蛋白。结论 :成功地克隆hSCF基因 ,并实现在原核系统中的高表达 ,所获表达菌株可用于生产以获得具有生物学活性的rhSCF蛋白产品。