大肠杆菌属Nissle 1917研究进展

大肠杆菌属Nissle 1917(EcN)是目前广泛应用的一种益生菌。研究发现EcN对常见胃肠道疾病有良好疗效,被广泛用于预防传染性腹泻、溃疡性结肠炎等炎性肠疾病,防止新生儿消化道内病原菌定殖等。近年研究发现EcN还具有免疫调节作用。本文对EcN的应用作一综述。

大肠杆菌Nissle 1917鞭毛蛋白FliC的结构特性及刺激Caco-2细胞作用的研究

试验旨在分析大肠杆菌Nissle 1917鞭毛蛋白FliC(FliC_(EcN))的结构特征及其对Caco-2细胞的刺激作用。试验通过大肠杆菌BL21(DE3)表达FliCEcN蛋白、经NTA柱纯化FliC_(EcN)蛋白并通过SDS-PAGE和Westernblot验证,利用SOPMA和Alphofold2预测FliC_(EcN)蛋白的结构模型、表面增强拉曼光谱和圆二色谱解析FliC_(EcN)蛋白的结构,使用FliC_(EcN)蛋白刺激Caco-2细胞后,检测免疫相关因子的分泌水平。结果显示,FliC_(EcN)蛋白的大小为64kDa,能够被抗His单克隆抗体特异识别;FliC_(EcN)蛋白的氨基和羧基末端主要由α-螺旋组成,中间结构域主要由β-折叠组成。FliC_(EcN)蛋白酰胺Ⅰ区最大吸收峰均位于1656 cm^(-1)处,主要二级结构为α-螺旋和β-折叠;FliC_(EcN)的α-螺旋占比44.4%,β-折叠占比23.4%,β-转角占比13.5%,无规则卷曲占比19.0%;FliC_(EcN)蛋白能够有效刺激Caco-2细胞分泌白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-10(IL-10);随着刺激时间延长,IL-6的分泌水平呈下降趋势,IL-10和TNF-α的分泌水平呈增加趋势。研究表明,α-螺旋和β-折叠是构成FliC_(EcN)的主要结构,可促进其构象的正确折叠和维持其三维结构稳定,FliC_(EcN)蛋白刺激Caco-2细胞分泌IL-6、IL-10、TNF-α的水平存在差异。

大肠杆菌Nissle 1917对炎症性肠病治疗作用的研究进展

炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)是一组特定的肠道疾病的统称,主要体现为慢性及复发性的肠道炎症。其全球发病率正在迅速上升,严重影响人们生活质量与生命健康,已成为当前的全球性健康问题。在过去的几十年里,大量研究表明IBD的发病率与肠道菌群失调有关。因此,以肠道益生菌为主的治疗策略成为一大热点,其中大肠杆菌Nissle 1917(Escherichia coli Nissle 1917,EcN)备受关注。本文聚焦肠道益生菌EcN在治疗IBD中的应用与机制,系统地综述了EcN的益生菌特性,概述EcN在临床实践中对IBD的治疗应用,同时从上皮屏障完整性调节、免疫调节、黏液屏障保护和肠道菌群稳态等方面阐述EcN治疗IBD的具体作用机制。此外,结合当前的研究现状,讨论了未来基于工程化EcN新疗法的发展前景,强调EcN在IBD治疗和预防中的适用性和可行性策略,并对该领域未来的研究方向进行了展望,为进一步深入研究EcN治疗IBD提供思路和参考。

益生菌大肠杆菌Nissle 1917抗逆性能、猪肠上皮细胞黏附率及抑菌效果研究

本试验旨在研究益生菌大肠杆菌Nissle 1917(Ec N)抗逆性能、猪肠上皮细胞黏附率及抑菌效果。采用体外法对Ec N进行生长曲线绘制和耐酸、耐胆盐、耐热性能的测定;以猪肠上皮细胞IPEC-J2细胞为体外细胞模型,考察了Ec N对该细胞的黏附率以及对致病菌大肠杆菌K88的黏附抑制率;同时通过蛋白质印迹法检测了Ec N对IPEC-J2细胞β-防御素-2和Toll样受体4的水平的影响。结果表明:1)Ec N对高酸、高胆盐和高温环境具有一定耐受能力。2)Ec N对IPEC-J2细胞的黏附作用以对数期最佳,黏附率达33.96%,显著高于迟缓期、稳定期和衰亡期(P<0.05)。3)Ec N对致病菌大肠杆菌K88具有良好的抑制效果,黏附抑制率达87.84%。4)Ec N还能上调IPEC-J2细胞β-防御素-2和Toll样受体4水平。结果提示,益生菌Ec N具有较好的抗逆性能,能够良好地黏附猪肠上皮细胞,对致病菌大肠杆菌K88具有良好的抑制作用。

大肠杆菌Nissle 1917株鞭毛展示6His标签的构建及相关生物学特性分析

为探索大肠杆菌Nissle 1917株(EcN)鞭毛展示的应用,本研究以重组质粒p UC18-fli C为模板,反向PCR产物经DpnⅠ、Exnase^(TM)Ⅱ重组环化,将6His标签基因分别插入无质粒大肠杆菌Nissle 1917(EcNcured of its two cryptic plasmids p MUT1和p MUT2;EcNc)fli C高变区774 bp^775 bp和792 bp^811 bp之间,构建嵌合鞭毛基因片段fliC01和fliC02。分别将其克隆于自杀性载体pRE112中,构建重组质粒pRE112-fliC01和pRE112-fliC02,并分别转化至EcNc中。通过一次重组和二次重组将嵌合鞭毛基因整合于EcNc基因组中,构建无抗性筛选的重组菌株EcNc fliC01和EcNc fliC02。对重组菌株进行生长状况、鞭毛形成以及体外细胞黏附试验和小鼠体内定植试验检测,结果表明EcNc fliC01和EcNc fliC02的生长未受影响,表达的嵌合鞭毛能够被H1多抗或His-Tag单克隆抗体识别并组装形成鞭毛丝;重组菌对IPEC-J2细胞的黏附能力及小鼠肠道定植能力与亲本株EcNc相比无显著性差异。本实验结果为进一步研究EcNc鞭毛展示技术应用于活疫苗研制奠定了基础。

大肠杆菌Nissle 1917鞭毛蛋白部分高变区功能初步研究

初步研究大肠杆菌Nissle 1917(E.coli Nissle 1917,EcN)鞭毛蛋白(Flagellin,FliC)高变区的功能,为探讨其作为表面展示系统的可行性打下基础。以EcN无质粒克隆(EcN was cured of its 2 cryptic plasmids pMUT1 and pMUT2 resulting in EcNc)为实验菌株,分别构建2个鞭毛蛋白基因(fl iC)高变区859-888位、829-858位的缺失突变株和回补菌株。分析突变区域对EcNc的生长性能、生化特性、运动性及抗原性等方面的影响。结果显示:EcNc、两个缺失株和回补株的生长特性无明显差异,且三者生化试验结果一致。缺失突变株在半固体培养基上不能运动,而回补株均恢复了原运动性;缺失突变株均不与H1单因子血清发生凝集,而互补菌株均能产生与EcNc一致的凝集反应。表明高变区的这两个区域尽管不影响菌株的生长性能和生化特性,但与EcN的运动性及抗原性密切相关。这为进一步探索EcN鞭毛展示技术的研究提供了一定的数据。

大肠杆菌Nissle 1917与肠屏障功能的研究进展

革兰氏阴性菌大肠杆菌Nissle 1917(Escherichia coli Nissle 1917,EcN)是一种非乳酸类益生菌。研究发现,EcN能长期稳定定殖于肠道,与肠上皮细胞及肠道其它微生物相互作用,发挥生物学效应。肠道屏障功能是维持肠道正常生理的重要机制,屏障功能的受损与多种疾病相关,寻求对肠道屏障功能有维持和修复作用的物质,是治疗诸多相关疾病的重点突破口。既往的研究发现,EcN对屏障功能有一定的保护作用,本文将从EcN对肠屏障功能的保护作用的产生机制方面进行系统文献综述。

大肠杆菌Nissle 1917菌株荚膜多糖合成基因kfiA的功能研究

[目的]分析益生菌EcN的荚膜多糖合成基因簇,寻找致病性大肠杆菌K5菌株的肝素前体多糖替代来源。[方法]通过基因敲除、基因回补、1H核磁共振(NMR)检测等技术手段,研究了kfiA基因在EcN荚膜多糖合成过程中的功能。[结果]利用λ-red重组系统成功构建了kfiA突变株,利用NMR检测发现kfiA缺失突变株的荚膜多糖特征峰消失,又通过染色体重组技术,把kfiA基因插入了EcN突变株的基因组中,核磁共振检测重新发现了荚膜多糖特征峰。[结论]kfiA基因是EcN菌株荚膜多糖合成途径的一个关键基因,参与了荚膜多糖合成。λ-red重组系统与染色体重组技术同样适用于EcN菌株,可为后续的菌株改造提供参考。

大肠杆菌属16S rDNA实时荧光定量PCR方法的建立及应用

根据GenBank大肠杆菌属16S rDNA基因序列设计并合成PCR引物及针对大肠杆菌属的特异Taqman探针,以大肠杆菌标准菌株的PCR扩增产物作为阳性模板制定标准曲线,建立大肠杆菌属实时荧光定量PCR检测方法。该法Mg2+最佳工作浓度5 mmol/L,探针最佳工作浓度0.12μmol/L,标准曲线相关系数为0.998,能够定量和特异性检测大肠杆菌而与肠道优势菌群的代表种葡萄球菌、双歧杆菌和芽孢杆菌呈阴性反应,检测大肠杆菌16S rDNA基因的灵敏度达40.8 copies/μL。应用建立的方法对20、26、324、1、47、56日龄樱桃谷鸭的气管、食道、十二指肠、空肠、回肠、盲肠和直肠进行检测结果表明(以每个细菌含1个16S rDNA基因拷贝数计),大肠杆菌属细菌总量,气管内为7.06×107～3.01×108个;食道内为1.73×108～3.23×108个;十二指肠内为2.29×108～2.39×109个;空肠内为1.28×108～1.69×109个;回肠内为1.86×108～1.90×1010个;盲肠内为6.01×108～1.38×109个;直肠内为1.07×108～4.67×1010个。樱桃谷鸭从食道到直肠的大肠杆菌属细菌的数量呈现上升趋势,盲肠和直肠分布量较多。

螯合金属多胺型棉纤维的制备及其对大肠杆菌抑菌活性的测定

目的研究稳定性螯合金属多胺型抗菌棉纤维。方法采用改进工艺路线和振荡烧瓶方法,制作螯合金属棉纤维并对其抑菌效果进行了测定。结果采用改进工艺路线碱化棉纤维与环氧氯丙烷反应,接枝环氧基团,接枝产物开环反应,进一步与多乙烯多胺以-C-N-键相连接,生成多胺型棉纤维。二乙烯三胺-Cu(Ⅱ)棉纤维的最低抑菌浓度为12mg/ml;三乙烯四胺-Cu(Ⅱ)棉纤维的最低抑菌浓度为14mg/ml;四乙烯五胺-Cu(Ⅱ)棉纤维的最低抑菌浓度为10mg/ml。三种抗菌棉纤维的抑菌作用速度都比较快,抑菌率与作用时间呈正比直线关系。作用20min,三种抗菌棉纤维抑菌率平均都达到90%以上;作用80min,抑菌率都达到100%。经蒸馏水清洗和75%酒精浸泡洗涤的三种抗菌棉纤维,对大肠杆菌均保持了良好的抑菌效果,有很好的耐热性和耐洗性。结论改进工艺合成制作的抗菌棉纤维达到新工艺要求,实现了抑菌效果好、具有良好的耐洗性的要求。

质粒在大肠杆菌和吸水链霉菌井冈5008之间的属间接合转移

利用一个链霉菌──大肠杆菌双功能柯斯载体pHZ132建立了吸水链霉菌井冈变种5008（以下简称井冈5008）的属间接合转移系统．将携带pHZ132的大肠杆菌细胞LE392和携带RP4衍生质粒pRK2073的大肠杆菌细胞ED8768与萌发后的井冈5008孢子混合起来进行三亲本杂交，在接合性质粒RP4转移功能的诱导下，pHZ132即可从大肠杆菌细胞LE392转移到井冈5008孢子中去．所用培养基是利用2CM：LA=4：1（体积比）的混合培养基，井冈5008最佳孢子萌发时间为3.5～4小时．

野牡丹属植物对大肠杆菌的抑菌效果

以多花野牡丹(Melastoma.affine)为试验材料,以无菌水为提取剂,通过纸片扩散法对多花野牡丹水提取物进行大肠杆菌的抑菌试验。采用水浴时间、水浴温度、料液比3因素3水平正交试验筛选野牡丹属(Melastoma)植物叶抑菌物质的最佳提取条件,结果表明:提取温度60℃,浸提时间2 h,料液比1∶30为最佳提取条件;并采用最佳提取条件对部分野牡丹属植物叶水提取物的抑菌能力进行比较,结果表明:野牡丹属植物叶的水提取物抑菌能力大小为:毛菍(M.sanguineum)>枝毛野牡丹(M.dendrisetosum)>细叶野牡丹(M.intermedium)>多花野牡丹。

大肠杆菌Nissle 1917的多组学分析及其产微菌素的功能验证

【目的】探究益生大肠杆菌Nissle 1917(Escherichia coli Nissle 1917,EcN)与模式菌株的代谢及转录差异,为构建工程菌株EcN提供参考,进一步推动食品安全菌株EcN的应用。【方法】软件分析比较EcN和模式菌株BL21(DE3)、W3110的基因组、转录组差异,并通过质粒构建表达验证;在BL21(DE3)中质粒表达EcN来源的微菌素(microcin)并进行抑菌效果验证。【结果】共挖掘出904个差异编码基因。同时以不同碳源为底物分析验证了不同菌株在碳源吸收利用方面的差异,以启动子Pflic在不同菌株中的表达情况验证了转录调控上的差异;最终构建的微菌素重组菌株在培养12 h时,抑菌率提高了30.3%。【结论】研究一定程度上阐明了EcN的代谢特性及其与模式菌株的转录差异,并为微菌素作为窄谱治疗药物来抑制肠道病原体和减少肠细菌水华的研究提供了思路。

福建地区猪大肠杆菌病防治

大肠杆菌(Escherichia coli),又称大肠埃希氏菌,属肠杆菌科(Ecnterobacteriaceae)埃希氏菌属(Escherichia),是一种需氧或兼性厌氧的革兰氏阴性直杆菌,无芽孢,直径约1微米,两端钝圆,长短不一,大多数菌株没有荚膜,通过周身鞭毛运动。大肠杆菌能生长在多种选择性培养基上,当pH值为7.2~7.4,温度为37℃时最适合生长,能在固体培养基上培养24小时后形成表面粗糙或平滑的大菌落。

基因工程构建表达融合蛋白GST-FCoAT的益生大肠杆菌EcN-Frc

目的:将产甲酸草酸杆菌代谢草酸基因Frc克隆至表达载体PGEX-4T-2,转化大肠杆菌EcN,稳定表达甲酰辅酶A转移酶。方法:采用PCR方法从产甲酸草酸杆菌基因组中获得Frc基因,插入到载体PGEX-4T-2,转化EcN,IPTG诱导表达GST-FCoAT融合蛋白,产物行western-blot鉴定分析。结果:EcN-Frc可稳定表达可溶性融合蛋白GST-FCoAT。结论:改造后的EcN能诱导表达甲酰辅酶A转移酶,将为下一步体内外代谢草酸实验和临床治疗高草酸尿和防治草酸结石的益生菌制剂的研究奠定基础。

产毒性和致病性大肠杆菌中小肠结肠炎耶尔森菌强毒力岛的检测

目的 了解小肠结肠炎耶尔森菌强毒力岛在产毒性和致病性大肠杆菌中的分布,探讨毒力岛在大肠杆菌中的结构和功能。方法 对毒力岛的关键基因irp2、fyua和asn-intB进行PCR扩增和DNA测序,并对irp2和fyua进行原位杂交。结果 在检测的93株肠产毒性大肠杆菌和10株肠致病性大肠杆菌基因irp2的检出率分别为32.25％（30/93）和30％（3/10）,fyua的阳性率为21.51％（20/93）和30％（3/10）,而且这些阳性菌株中的毒力岛大部分连接到天门冬氨酸tRNA（asn tRNA）位点。结论 小肠结肠炎耶尔森菌强毒力岛在产毒性和致病性大肠杆菌中较高的阳性率,对于大肠杆菌毒力的变化和毒力的调控以及细菌毒力的进化可能具有重要意义。

辽西地区禽大肠杆菌耐药性分析

禽大肠菌病是由埃希氏菌属中的大肠埃希氏菌的某些血清型引起各种禽的肠道或肠道外感染的一种传染病.本病可导致胚胎和幼雏死亡.禽大肠杆菌病在国内外均有报导,随着养禽业的迅猛发展,本病的发病率与死亡率也大为增加,鸡群中普遍流行,给养禽业带来巨大的损失.由于抗菌药物的广泛使用,使禽大肠杆菌的耐药菌株大量出现给此病的临床治疗带来了困难.我们从辽西分离到56株禽大肠杆菌,并进行了耐药性的测试和分析,希望能为辽西地区甚至是辽宁省的禽大肠杆菌病临床合理用药提供参考.

SARS病毒S1蛋白N端片段在大肠杆菌中的表达、纯化与鉴定

目的 :获得纯化的重组SARS病毒S1蛋白N端部分 ,研究其与机体产生针对SARS病毒免疫应答的规律和机制。方法 :将编码SARS病毒S1蛋白N端 334个氨基酸残基的基因进行克隆 ,并在原核表达系统中表达 ,获得了纯化的重组蛋白。利用SARS患者恢复期已知的SARS抗体阳性血清 ,鉴定纯化的重组S1蛋白片段。结果 :克隆表达的重组蛋白基因序列与公布的SARS病毒S1蛋白N端的基因序列相同 ,所表达的重组蛋白相对分子质量约为 6 4 0 0 0。 3份SARS患者恢复期的血清均与重组蛋白反应 ,在相对分子质量 6 4 0 0 0处形成特异性的反应条带 ,而来自SARS流行前的正常人对照血清则不能与重组蛋白反应。结论 :获得的重组蛋白与SARS病毒抗体呈现特异性的反应 ,为进一步研究SARS病毒感染免疫应答机制和制备SARS病毒的重组疫苗奠定基础。

东莞市屠宰场环境及屠宰猪体内致病性大肠杆菌的分离与鉴定

大肠杆菌（E.coli）为埃希菌属（Escherichia）代表菌。为人和动物肠道中的常在菌,在其被发现的很长一段时间内,认为是非致病菌。直到20世纪中叶才认识到一些特殊血清型的大肠杆菌对人和动物有致病性,统称为致病性大肠杆菌。根据不同的生物学特性,将致病性大肠杆菌分为5类：肠致病性大肠杆菌（ETEC）、肠产毒性大肠杆菌（ETEC）、肠侵袭性大肠杆菌（EIEC）、