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燐光探针法研究不同变性剂对大肠杆菌碱性磷酸酶构象的影响 被引量:2
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作者 张海容 晋卫军 刘长松 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2002年第9期1067-1069,共3页
通过监测大肠杆菌碱性磷酸酶 (AP)的 10 9位色氨酸 (Trp 10 9)室温光 (RTP)的强度与寿命的变化 ,探讨了变性剂酸、盐酸胍及EDTA对AP构象变化的影响。结果表明 :光强度、光寿命与Trp 10 9所处的微环境刚性化程度有密切的关系。尤... 通过监测大肠杆菌碱性磷酸酶 (AP)的 10 9位色氨酸 (Trp 10 9)室温光 (RTP)的强度与寿命的变化 ,探讨了变性剂酸、盐酸胍及EDTA对AP构象变化的影响。结果表明 :光强度、光寿命与Trp 10 9所处的微环境刚性化程度有密切的关系。尤其是盐酸胍的加入 ,AP经历了典型的 3种变化状态 :从稳定折叠态到中间态 ,最后形成展开态。极少量的EDTA加入 ,导致蛋白质变性、光减弱和光寿命缩短。 展开更多
关键词 Lin光探针法 变性剂 大肠杆菌碱性磷酸酶 室温Lin光 蛋白质 构象 色氨酸
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大肠杆菌碱性磷酸酶突变体的构建及其结构与功能研究 被引量:2
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作者 王秋颖 李宁 向本琼 《北京师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期647-652,共6页
以大肠杆菌碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AP)高活性突变株(L138PG233S)为亲本,采用重叠延伸PCR的方法进行定点突变,成功获得了氨基酸替换突变体3个,并对它们的酶活性、特性、内源荧光发射峰等与亲本酶进行了比较分析.结果发现... 以大肠杆菌碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AP)高活性突变株(L138PG233S)为亲本,采用重叠延伸PCR的方法进行定点突变,成功获得了氨基酸替换突变体3个,并对它们的酶活性、特性、内源荧光发射峰等与亲本酶进行了比较分析.结果发现:与亲本酶相比,突变体酶的酶活性降低了18%-85%,Vmax值降低,Km增加,内源荧光发射峰λmax增大等.与亲本酶相同,Zn^2+,Mn^2+,Mg^2+仍是它们的激活剂,Na3PO4是它们的抑制剂;这些实验结果说明突变体酶活性的降低直接与其构象变化有关,被替换的氨基酸在维持碱性磷酸酶的结构和功能方面具有特定的作用. 展开更多
关键词 大肠杆菌碱性磷酸酶 重叠延伸PCR 突变体 特性分析 荧光光谱
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乙醇对大肠杆菌碱性磷酸酶活性与构象的影响 被引量:1
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作者 戴伟龙 井健 《北京师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期34-37,共4页
常用有机试剂乙醇作为效应物对大肠杆菌碱性磷酸酶(EAP)活性影响状态作用机制进行了研究.结果表明,EAP酶活性随着乙醇浓度增大而迅速下降,说明乙醇对EAP有明显的失活作用,IC50为13%.关于乙醇对EAP失活作用机制的研究表明,乙醇对EAP的失... 常用有机试剂乙醇作为效应物对大肠杆菌碱性磷酸酶(EAP)活性影响状态作用机制进行了研究.结果表明,EAP酶活性随着乙醇浓度增大而迅速下降,说明乙醇对EAP有明显的失活作用,IC50为13%.关于乙醇对EAP失活作用机制的研究表明,乙醇对EAP的失活作用是以非竞争性机制模式进行的.应用荧光光谱研究EAP经乙醇微扰后的分子构象变化,发现EAP的内源荧光强度随乙醇浓度增大而增强,说明酶蛋白分子中的荧光发色基团所处微环境已经发生变化,乙醇对EAP分子构象存在显著影响. 展开更多
关键词 大肠杆菌碱性磷酸酶 乙醇 酶促活性 构象
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大肠杆菌菌株ATCC 25922碱性磷酸酶的原核表达、纯化及其活性研究 被引量:5
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作者 高明春 李雪萌 +1 位作者 张润祥 王君伟 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期48-53,共6页
使用常规PCR法以大肠杆菌菌株ATCC 25922基因组为模板,克隆到该菌株的碱性磷酸酶成熟肽基因,并将其构建到原核表达载体pET-30a(+)的Bam HⅠ、XhoⅠ之间,获得重组表达载体pET-30a-EAP。并且我们将pET-30a-EAP转化到大肠杆菌RosettaTM... 使用常规PCR法以大肠杆菌菌株ATCC 25922基因组为模板,克隆到该菌株的碱性磷酸酶成熟肽基因,并将其构建到原核表达载体pET-30a(+)的Bam HⅠ、XhoⅠ之间,获得重组表达载体pET-30a-EAP。并且我们将pET-30a-EAP转化到大肠杆菌RosettaTM(DE3)pLysS中,经IPTG诱导表达后,获得大小为52ku的目的蛋白EAP。经试验证明该蛋白以可溶形式为主。进而,高效表达的重组碱性磷酸酶经亲和层析法纯化后被用于活性鉴定。pNPP的显色反应与去磷酸化试验证实来自ATCC 25922的重组碱性磷酸酶具有催化磷酸单酯水解活性,而且酶热稳定性高、有效工作温度范围大,与其他蛋白融合表达时仍保持酶活性。以上研究结果为大肠杆菌菌株ATCC 25922碱性磷酸酶的规模化生产及在免疫酶技术领域中的应用提供了重要的参考依据。 展开更多
关键词 大肠杆菌碱性磷酸酶 ATCC25922 表达纯化 活性鉴定
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磷光探针研究溶剂对碱性磷酸酶结构揉性变化的影响 被引量:2
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作者 张海容 晋卫军 +2 位作者 董川 牛承岗 刘长松 《福州大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 1999年第S1期129-130,共2页
在10 ~55 ℃之间, 通过大肠杆菌碱性酸酶磷光性质随温度的变化测定了与k 相关的活化能参数. 不同溶剂存在下, 动力学方法提供了蛋白质达到展开态之前的活化过渡态的标准熵和标准焓变. 结果表明: 溶剂在测定蛋白质构象揉性时... 在10 ~55 ℃之间, 通过大肠杆菌碱性酸酶磷光性质随温度的变化测定了与k 相关的活化能参数. 不同溶剂存在下, 动力学方法提供了蛋白质达到展开态之前的活化过渡态的标准熵和标准焓变. 结果表明: 溶剂在测定蛋白质构象揉性时起着十分重要的作用. 展开更多
关键词 大肠杆菌碱性磷酸酶 磷光探针 溶剂 结构揉性
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Effect of E. coli coli on Anti-disease Activities of Scailops: Argopecten irradians
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作者 胡晓珂 JiangXiaolu +1 位作者 LiuShiliang MaiKangsen 《High Technology Letters》 EI CAS 2003年第1期11-16,共6页
The effect of acute E. coli challenge on the anti-disease activity of scallops Argopecten irra-dians is examined. The treatments of scallop from which hemolymph samples were taken for study included (1) control scallo... The effect of acute E. coli challenge on the anti-disease activity of scallops Argopecten irra-dians is examined. The treatments of scallop from which hemolymph samples were taken for study included (1) control scallops, (2) sham-injected scallops, (3) PSW-injected scallops and (4) E. coli-injected scallops. From the beginning, the anti-disease activities of scallops are deter -mined at 12 hr and 24 hr.The concentrations of circulating hemocytes, the total serum protein concentrations and the activities of alkaline phosphatase, acid phosphatase and superoxide dismutase in the scallops Argopecten irradians are determined.Injection with E. coli results in a significant elevation in the concentration of circulating hemocytes and in the alkaline phosphatase activity and a significant decline in the total serum protein concentration and in the superoxide dismutase activity at 24 hr postchallenge. It shows that metabolism of bay scallop is expedited to adopt the challenge. 展开更多
关键词 Argopecten irradians E. coli HEMOCYTES HEMOLYMPH alkaline phosphatase acid phosphatase superoxide diamutase MOLLUSK
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