壳寡糖对大肠杆菌K88感染肉鸡生长性能、抗氧化能力及肠道屏障功能的影响

本试验旨在研究壳寡糖(Chitosan,COS)对大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)感染肉鸡生长性能、抗氧化能力及肠道屏障功能的影响。将288只1日龄体重均一、健康的罗斯308肉仔鸡随机分为4个处理,即对照组、ETEC感染组、ETEC+PS1组(ETEC+150 mg/kg壳寡糖)和ETEC+PS2组(ETEC+200 mg/kg壳寡糖),每个处理6个重复,每个重复12只鸡(公母各半)。于10日龄时给ETEC组、ETEC+PS1组和ETEC+PS2组肉鸡灌服1 mL E.coli菌悬液(1.0×10^(8) CFU/mL),对照组灌服1 mL无菌培养基。试验期42 d。结果显示:与对照组相比,ETEC组21~42日龄肉鸡平均日采食量有降低趋势(P=0.07),21、42日龄空肠谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力与丙二醛(MDA)含量下调(P<0.05),21日龄空肠绒毛高度与隐窝深度的比值(VH/CD)及42日龄空肠三叶因子(TFF-2)的mRNA水平上调(P<0.01)。日粮中添加壳寡糖可缓解因ETEC感染引起的GSH-Px下调,同时可上调空肠过氧化氢酶(CAT)活性及绒毛高度(VH)和VH/CD(P<0.05)。此外,壳寡糖可上调空肠钙粘蛋白(E-cadherin)、3型Na^(+)/H^(+)交换蛋白(NHE3)、闭合蛋白(Occludin)等基因的转录水平(P<0.05)。由以上结果可知,日粮中添加150、200 mg/kg壳寡糖可能通过增强肠道物理屏障和抗氧化功能进而缓解ETEC感染对肉鸡肠道的不利影响。

原儿茶酸对肠毒素大肠杆菌K88诱导的猪小肠上皮细胞程序性坏死和Toll样受体4信号通路的影响

本试验旨在研究原儿茶酸(PCA)对肠毒素大肠杆菌K88(ETEC K88)诱导的猪小肠上皮细胞(IPEC-1细胞)程序性坏死和Toll样受体4(TLR4)信号通路的影响。试验采用2×2因子设计,分为4个组:对照组、PCA组(40μmol/L PCA作用24 h)、ETEC K88组(50倍细胞数ETEC K88作用2 h)和PCA+ETEC K88(40μmol/L PCA作用24 h+50倍细胞数ETEC K88作用2 h)组,每组3个重复。结果显示:1)与对照组相比,ETEC K88组细胞活力显著降低(P<0.05),细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH)活性显著升高(P<0.05);与ETEC K88组相比,PCA+ETEC K88组细胞活力显著升高(P<0.05),细胞上清液LDH活性显著降低(P<0.05)。2)与对照组相比,ETEC K88刺激导致细胞形态损伤,超微结构破坏,表现为细胞膜破裂,细胞核皱缩,染色质外溢,线粒体出现肿胀并且空泡化;ETEC K88组细胞坏死率显著升高(P<0.05)。与ETEC K88组相比,添加PCA能够保护细胞形态,PCA+ETEC K88组细胞坏死率显著降低(P<0.05)。3)与对照组相比,ETEC K88组肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、TLR4、脂多糖结合蛋白(LBP)、髓样分化蛋白2(MD2)、白细胞介素受体相关激酶1(IRAK1)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)和髓样分化因子88(MyD 88)的mRNA相对表达显著升高(P<0.05);与ETEC K88组相比,PCA+ETEC K88组TNF-α、TLR4、LBP、MD2、IRAK1、TRAF6和MyD88的mRNA相对表达量显著降低(P<0.05)。4)与对照组相比,ETEC K88组肿瘤坏死因子受体1(TNFR1)、Fas相关死亡结构域(FADD)、混合系列蛋白激酶样结构域(MLKL)、高迁移率蛋白1(HMGB1)、动力相关蛋白1(Drp1)和磷酸甘油酸变位酶5(PGAM5)的mRNA相对表达量显著升高(P<0.05);与ETEC K88组相比,PCA+ETEC K88组TNFR1、FADD、HMGB1、Drp1和PGAM5的mRNA相对表达量显著降低(P<0.05)。由此可见,PCA可能通过抑制细胞程序性坏死和TLR4信号通路的激活,缓解ETEC K88诱导的IPEC-1细胞的炎症反应和损伤。

大肠杆菌K88噬菌体的分离鉴定及其生物学特性

分离鉴定裂解性产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)K88噬菌体,并研究其生物学特性及裂菌效力。用双层平板法从猪场污水中分离噬菌体,通过透射电镜和酶切基因组对获得的噬菌体进行鉴定;同时测定了噬菌体最佳感染复数、一步生长曲线、酸碱稳定性、热稳定性等噬菌体的生物学特性及其体外裂菌效力。结果表明分离获得了一株产肠毒素性大肠杆菌K88强裂解性噬菌体,命名为PK88-4;其噬菌斑清晰透亮,周围无晕环;电镜显示:其头部呈正多面体对称,有可伸缩性尾部;核酸类型为双链DNA(基因组大小约60 kb);该噬菌体能耐受60℃左右高温、在pH值为5～10内效价稳定;最佳感染复数为0.01;潜伏期为10 min,暴发期为40 min,裂解量为40;在5 h内对培养液中的大肠杆菌杀灭率将近100%。PK88-4是一株强裂解性肌尾科大肠杆菌K88噬菌体,具有裂解周期短、杀菌能力强等特点,为畜牧业防治产肠毒素性大肠杆菌K88感染提供了新的思路。

产肠毒素大肠杆菌K88诱导仔猪炎症反应的分子机制

为探讨产肠毒素大肠杆菌(ETEC)K88感染仔猪发生炎症反应的分子机制,试验用ETEC K88灌服断奶仔猪,ELISA法检测攻毒后仔猪血清中白细胞介素8(IL-8)含量,实时荧光定量PCR方法检测淋巴结中Toll样受体2(TLR2)、Toll样受体4(TLR4)及其信号通路相关基因(髓样分化因子88(MyD88)、Toll相互作用蛋白(Tollip)、B细胞淋巴瘤因子3(Bcl3))的mRNA相对表达水平。结果发现,仔猪攻毒ETEC K88后6和24h血清IL-8含量和淋巴结TLR2/4的表达水平均极显著或显著高于对照组(P<0.01;P<0.05),且感染后24h显著低于感染后6h(P<0.05);仔猪感染ETEC K88后24h淋巴结中MyD88、Tollip和Bcl3的表达水平均极显著高于对照组(P<0.01),但是感染后6h时与对照组相比均无显著差异(P>0.05)。综上所述,ETEC K88感染仔猪可能是通过TLR2/4-MyD88信号通路产生炎症因子IL-8,促使仔猪出现炎症反应,且该炎症反应可能受Tollip和Bcl3蛋白的调控而被减弱。

表达猪乳铁蛋白的戊糖乳杆菌对感染大肠杆菌K88小鼠的保护作用

为研究猪抗大肠杆菌(E.coli)K88的口服疫苗,本研究构建了表达猪乳铁蛋白的重组戊糖乳杆菌(pPG2-pLF/L.pentosus),并将其连续10 d灌喂小鼠后,采用E.coliK88口服攻毒。攻毒后7d,取小肠样本通过扫描电镜检测,并对盲肠内容物进行菌落分离计数,取血液样本,检测IgG、sIgA、IL-2、IL-4和INF-α指标评价其免疫效果。结果显示:灌服pPG2-p LF/L.pentosus组小鼠肠绒毛高度与健康对照组无显著变化,其IgG、sIgA、IL-2和INF-α水平显著提高;小鼠肠道中E.coli总数显著低于攻毒对照组,而且攻毒后小鼠的死亡率显著降低(p<0.05)。这些数据表明,饲喂pPG2-pLF/L.pentosus可以抵抗E.coli K88对小鼠的致病力,减轻病原菌攻毒对小鼠肠道组织的功能损伤,降低肠道内致病菌数量,提高小鼠免疫机能。

动物病原大肠杆菌K88的绿色荧光蛋白基因标记及其稳定性研究

成功地将gfp/luxAB双标记基因整合到K88染色体上,得到绿色荧光蛋白基因标记的大肠杆菌K88∶gfp/lux,其菌体和菌落形态与原始菌株K88完全一致,引入的新质粒不影响菌株的基本形态。从含gfp基因的质粒DNA和K88∶gfp/lux基因组DNA上均可扩增出大小约700 bp的gfp基因片段。大肠杆菌特异性基因检测结果表明,从大肠杆菌K88和K88∶gfp/lux基因组DNA上均扩增出大小约260 bp的大肠杆菌特异性基因片段,说明gfp基因标记后的菌株均为大肠杆菌。在相同的培养条件下,K88∶gfp/lux和K88的生长曲线的变化趋势基本相同。通过检测肠毒性基因(estA)发现,从大肠杆菌K88和K88∶gfp/lux基因组DNA上均扩增出大小约158 bp的肠毒性基因片段,说明gfp基因标记后的菌株在肠毒性方面未发生变化。在无选择压力条件下将K88∶gfp/lux菌株每隔12 h连续转接10次后,所有菌落均保持着均匀并且强烈的绿色荧光,说明标记基因在K88∶gfp/lux中的表达稳定性很高。K88∶gfp/lux和K88在中性偏酸性的环境中生长较好,当初始pH值偏碱性时,生长较差。

载锌蒙脱石对大肠杆菌K88抗菌效果的影响

通过阳离子交换反应合成了载锌蒙脱石(Zn*Ca-MMT&Zn*Na-MMT),X射线衍射分析显示,载锌反应前后,蒙脱石的(001)面网间距增大,表明锌是以水合阳离子形式进入蒙脱石晶格层间位置。体外抗菌试验表明,蒙脱石(Ca-MMT&Na-MMT)未显抗菌活性,而Zn*Ca-MMT和Zn*Na-MMT对大肠杆菌K88均有很强的抑制和杀灭作用,且后者的杀菌效果优于前者。

大肠杆菌K88ac菌毛操纵子fae全基因的克隆、表达及生物学活性初步研究

目的:在体外克隆和表达猪肠产毒性大肠杆菌(ETEC)K88ac菌毛操纵子fae结构基因,并检测重组菌毛的相关生物学活性。方法:利用长PCR技术以猪ETECK88ac株C83902基因组DNA为模板扩增编码K88菌毛操纵子fae基因,克隆入表达质粒载体pBR322,构建和筛选重组质粒pBR322-fae,转化至不含任何菌毛的大肠杆菌EP株;电镜观察重组菌表面菌毛表达情况;用热抽提法提纯表达的重组菌毛;用纯化菌毛免疫小鼠制备高效价抗血清;用SDS-PAGE和Westernblot检测重组菌毛的抗原性,用细胞黏附和黏附抑制试验检测其生物学活性。结果和结论:在电镜下观察到重组菌表面大量表达K88ac菌毛,该重组菌与兔抗K88ac菌毛单因子阳性血清、鼠抗K88ac菌毛单克隆抗体均产生凝集反应;纯化菌毛经SDS-PAGE,结构单位菌毛呈单一的相对分子质量约26×103的蛋白条带;纯化菌毛免疫小鼠后可制备出高效价的鼠抗血清,玻板凝集试验和Westernblot结果表明体外表达的K88ac菌毛具有与K88ac野生菌毛相同的抗原性;猪小肠上皮细胞系黏附和黏附抑制实验结果表明重组EP菌和野生菌株一样具有较强的黏附猪小肠上皮细胞系的能力,而且提纯重组菌毛制备出的鼠抗血清能有效抑制上述重组菌或野生菌株对猪小肠上皮细胞系的黏附结合。

猪肠毒素源性大肠杆菌K88ac粘附抗原的核苷酸序列分析

本文对国内流行的猪肠毒素源性大肠杆菌K88ac抗原的结构基因的核苷酸序列进行了测定。该基因由849对核苷酸组成,编码了283个氨基酸的蛋白亚单位及21个氨基酸的信号肽。与国外报道的K88ac序列的不同是我们发现一个碱基的点突变,导致在抗原决定簇内一个氨基酸的改变。从核苷酸序列推导出的氨基酸序列与另两种亚型进行了比较。

饲用凝结芽孢杆菌对感染产肠毒素大肠杆菌K88断奶仔猪生长性能和肠道健康的影响

本文旨在研究饲用凝结芽孢杆菌对感染产肠毒素大肠杆菌(ETEC)K88断奶仔猪生长性能和肠道菌群、形态及细胞因子表达的影响。试验选用32头25日龄断奶的健康“杜×长×大”商品公猪,按照初始体重一致原则分成4个组,每组8个重复,单笼饲养。ETEC K88感染前7 d,2个组饲喂基础饲粮(BD组),另外2个组饲喂在基础饲粮中添加1.0×10^(7) CFU/g凝结芽孢杆菌的饲粮(PD组)。第8天起,开展2×2双因素试验,4个组设计如下:1)NCH+BD组,口服生理盐水、饲喂基础饲粮;2)NCH+PD组,口服生理盐水、饲喂添加凝结芽孢杆菌饲粮;3)CH+BD组,口服ETEC K88、饲喂基础饲粮;4)CH+PD组,口服ETEC K88、饲喂添加凝结芽孢杆菌饲粮。试验猪口服5 mL ETEC K88(活菌数1.0×10^(9) CFU/mL)或5 mL 0.9%生理盐水,持续3 d。试验用凝结芽孢杆菌是经体外牛津杯法确定的1株对ETEC K88具有良好抑菌效果的菌株,添加量1.0×10^(7) CFU/g。试验第11天,取仔猪空肠、回肠、盲肠及食糜样本,测定肠道菌群、形态及细胞因子表达量。结果表明:1)ETEC K88感染处理显著降低断奶仔猪平均日增重和平均日采食量、空肠和盲肠食糜中乳酸杆菌数量、空肠和回肠绒毛高度以及空肠黏膜白细胞介素-10(IL-10)mRNA表达量(P<0.05);同时,显著提高断奶仔猪料重比和腹泻指数、空肠和盲肠食糜中大肠杆菌数量、空肠和回肠隐窝深度以及空肠黏膜白细胞介素-6(IL-6)mRNA表达量(P<0.05)。2)饲用凝结芽孢杆菌处理显著提高断奶仔猪平均日增重和平均日采食量、空肠和盲肠食糜中乳酸杆菌数量、空肠和回肠绒毛高度以及空肠黏膜IL-10 mRNA表达量(P<0.05);同时,显著降低断奶仔猪料重比和腹泻指数、空肠和盲肠食糜中大肠杆菌数量、空肠和回肠隐窝深度以及空肠黏膜IL-6 mRNA表达量(P<0.05)。3)除腹泻指数外,ETEC K88感染处理与饲用凝结芽孢杆菌处理之间对其他指标均无显著互作效应(P>0.05)。结果提示,无论是否ETEC K88感染处理,饲用凝结芽孢杆菌均可通过平衡肠道菌群、维持肠道正常形态和缓解肠道炎症反应,改善断奶仔猪生长性能。

饲粮添加迷迭香酸对产肠毒素大肠杆菌K88攻毒断奶仔猪结肠菌群组成、屏障功能及炎症反应的影响

本研究旨在探究饲粮添加迷迭香酸(RA)对产肠毒素大肠杆菌K88(ETEC K88)攻毒断奶仔猪结肠菌群组成、屏障功能及炎症反应的影响。选取18头体重为(6.91±1.02) kg的健康21日龄断奶仔猪,随机分为对照组(CON组)、攻毒组(K88组)和迷迭香酸组(RA组),每组6头仔猪。CON组和K88组每天饲喂基础饲粮,RA组每天饲喂含RA的试验饲粮(在基础饲粮基础上添加500 mg/kg RA)。试验第19~20天,K88组、RA组仔猪每天灌喂4 mL浓度为109CFU/mL的ETEC K88重悬液攻毒,对照组仔猪则每天灌喂同等剂量的无菌生理盐水。所有仔猪在试验第22天屠宰取样。结果显示:1)与CON组相比,K88组断奶仔猪腹泻指数显著增加(P<0.05);与K88组相比,RA组断奶仔猪腹泻率极显著降低(P<0.01)。2)与K88组相比,RA组断奶仔猪结肠隐窝深度和黏膜厚度极显著降低(P<0.01)。3)与CON组相比,K88组断奶仔猪结肠菌群Chao1和ACE指数显著降低(P<0.05)。4)在门水平上,与K88组相比,RA组断奶仔猪结肠菌群中拟杆菌门(Bacteroidetes)的相对丰度极显著降低(P<0.01),变形菌门(Proteobacteria)的相对丰度显著降低(P<0.05),放线菌门(Actinobacteria)的相对丰度显著增加(P<0.05);在属水平上,与K88组相比,RA组断奶仔猪结肠菌群中克里斯滕森菌科R-7群(Christensenellaceae_R-7_group)的相对丰度极显著增加(P<0.01),布劳特氏菌属(Blautia)、粪球菌属3(Coprococcus_3)、双歧杆菌属(Bifidobacterium)的相对丰度显著增加(P<0.05),而脱硫弧菌属(Desulffovibrio)、埃希氏菌-志贺氏菌属(Escherichia-Shigella)的相对丰度显著降低(P<0.05)。5)与K88组相比,RA组断奶仔猪结肠食糜中乙酸、丁酸和总短链脂肪酸含量均显著增加(P<0.05)。6)与K88组相比,RA组断奶仔猪结肠黏膜中闭锁蛋白(Occludin)、闭锁小带蛋白-1(ZO-1)的mRNA相对表达量极显著增加(P<0.01)。7)与K88组相比,RA组断奶仔猪结肠黏膜中白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量极显著降低(P<0.01),IL-10含量极显著增加(P<0.01),并且结肠黏膜中Toll样受体(TLR)-2(P<0.01)、TLR-4(P<0.01)、TLR-5(P<0.05)、核因子-κB(NF-κB)(P<0.01)的mRNA相对表达量显著或极显著降低。综上可知,饲粮添加RA可以改善ETEC K88攻毒断奶仔猪的结肠形态结构,调节结肠菌群组成,提高结肠食糜中细菌代谢产物短链脂肪酸的含量,有利于维持结肠屏障功能,缓解ETEC K88攻毒引起的结肠炎症反应,缓解断奶仔猪腹泻,维持肠道健康。

非预增菌可视化快速检测食品中肠毒素大肠杆菌K88的研究

本研究运用肠毒素大肠杆菌K88(E.coli K88)特异的适配体结合纳米金和银增强技术,建立了E.coli K88一种可视化快速检测技术,实现约2 h检测E.coli K88达10 CFU/反应的灵敏度。通过人工模拟E.coli K88污染25 g蔬菜、牛奶或猪肉等食品原料,采用该可视化快速检测技术进行非预增菌直接检测,结果显示检测灵敏度达100 CFU/m L(或g),检测需时约2 h,在1.0×102~1.0×105CFU/m L(或g)的E.coli K88污染浓度范围内,样品A630nm吸光值与目标菌污染浓度对数值呈线性关系,相关系数R20.97以上。研究结果表明,E.coli K88可视化检测方法可用于食品样品E.coli K88污染非预增菌的快速、灵敏检测分析。

甜菜碱对大肠杆菌K88的抑菌效果研究

研究旨在测定无水甜菜碱及甜菜碱盐酸盐对大肠杆菌K88的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),比较不同浓度、不同时间条件下甜菜碱及甜菜碱盐酸盐对大肠杆菌K88的抑菌效果。运用大肠杆菌K88进行体外抑菌试验,进行研究分析,结果表明:无水甜菜碱对大肠杆菌K88无明显的抑菌作用,甜菜碱盐酸盐对大肠杆菌K88有明显抑菌作用,最小抑菌浓度(MIC)为6.25 mg/ml,最小杀菌浓度(MBC)为8.125 mg/ml,且随着甜菜碱盐酸盐浓度提高或培养时间延长,抑菌率提高。试验结果提示,甜菜碱盐酸盐的抑菌作用可能与其呈强酸性有关。

解淀粉芽孢杆菌SC06与肠毒性大肠杆菌K88对IPEC-1细胞转运载体、紧密连接、凋亡和免疫相关基因表达的影响

本试验以IPEC-1细胞为材料,探究解淀粉芽孢杆菌SC06(以下简称SC06)与肠毒性大肠杆菌K88(以下简称K88)对肠上皮屏障功能相关基因表达的影响。将IPEC-1细胞分为4个组并作不同处理:CK组为空白对照,不作处理; SC06组和SC06+K88组用含有108CFU/mL SC06的DM EM/F12培养基先预处理6 h,之后K88组和SC06+K88组加入含有108CFU/mL K88的DM EM/F12培养基处理3 h;乳酸脱氢酶(LDH)活性测定另设以含1%Trinton X-100的DM EM/F12培养基处理的Trinton组为阳性对照。各组细胞均培养9 h。结果表明:1)与CK组相比,K88和SC06单独处理均显著降低了葡萄糖转运载体2 (GLUT2)和小肽转运载体1(PepT1)基因的相对表达量(P<0.05),SC06单独处理显著增加了丙氨酸/丝氨酸/半胱氨酸/苏氨酸转运载体2(ASCT2)和兴奋性氨基酸转运载体1(EAAC1)基因的相对表达量(P<0.05);与K88单独处理相比,SC06预处理显著抑制了K88诱导的LDH活性和EAAC1基因相对表达量的增加(P<0.05)。2)与CK组相比,K88单独处理显著上调了闭锁小带蛋白-1(ZO-1)、闭合蛋白(occludin)基因的表达(P <0.05),显著下调了密封蛋白(claudin)-3、claudin-4和黏蛋白-1(MUC1)基因的表达(P <0.05); SC06单独处理显著上调了ZO-1、claudin-4基因的表达(P <0.05); K88和SC06单独处理均显著促进了天冬氨酸蛋白水解酶-3(caspase-3)、凋亡相关因子(Fas)及B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)基因的表达(P<0.05),显著抑制了天冬氨酸蛋白水解酶-9(caspase-9)与Bcl-2相关X蛋白(Bax)基因的表达(P<0.05),且K88单独处理还显著降低了天冬氨酸蛋白水解酶-8(caspase-8)基因的表达(P<0.05)。与K88单独处理相比,SC06预处理显著阻止了由K88诱导的ZO-1、caspase-3和Bcl-2基因相对表达量的增加(P<0.05)及claudin-3、claudin-4、MUC1、caspase-9和Bax基因相对表达量的降低(P <0.05)。3)与CK组相比,K88单独处理显著上调了肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)及转化生长因子β(TGF-β)基因的表达(P<0.05),并显著上调了核转录因子-κB-p50(NF-κB-p50)、肿瘤坏死因子受体相关因子-6(TRAF-6)、髓样分化因子88(MyD88)、核苷酸结合寡聚域1(NOD-1)及Toll样受体-4(TLR4)基因的表达(P <0. 05); SC06单独处理显著降低了IL-6、NOD1与Toll样受体-6(TLR6)基因的表达(P<0.05),显著上调了TG F-β和MyD88基因的表达(P<0.05)。与K88单独处理相比,SC06预处理显著抑制了由K88导致的MyD88、NOD-1及TLR4基因相对表达量的增加(P<0.05)。综上所述,K88诱导IPEC-1细胞发生炎症反应,破坏肠上皮细胞的完整性,SC06在一定程度上有缓解作用。

腐殖酸钠对肠产毒素性大肠杆菌K88感染小鼠肠道损伤的保护作用

本研究旨在探究腐殖酸钠(HNa)对肠产毒素性大肠杆菌K88(ETEC K88)感染小鼠肠道损伤的保护作用。选取健康的无特定病原体(SPF)级雌性昆明小鼠30只,随机分为3组,对照组、模型组(ETEC组)、HNa干预组(ETEC+HNa组),每组10只。对照组和ETEC组小鼠每天灌胃0.2 mL生理盐水,ETEC+HNa组小鼠每天灌胃0.2 mL 5%HNa;试验第8天,ETEC和ETEC+HNa组小鼠灌胃0.2 mL 5×10^(10)CFU/mL ETEC K88。试验期10 d。采用苏木精-伊红(HE)染色法观察空肠病理变化,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清炎症因子含量,采用实时荧光定量PCR(qPCR)法检测肠道屏障相关蛋白的mRNA表达,采用蛋白免疫印迹(Western blot)法检测空肠紧密连接、黏附连接、肠道组织炎性小体和细胞凋亡相关蛋白的表达。结果表明:1)与对照组和ETEC+HNa组,ETEC组小鼠体重及空肠绒毛高度、绒毛高度/隐窝深度显著降低(P<0.05)。2)与对照组和ETEC+HNa组相比,ETEC组小鼠血液白细胞、单核细胞、粒细胞数量及血清白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、二胺氧化酶(DAO)、D-乳酸(D-Lac)含量显著升高(P<0.05),血清白细胞介素-4(IL-4)和白细胞介素-10(IL-10)含量显著降低(P<0.05)。3)与对照组和ETEC+HNa组相比,ETEC组空肠闭合蛋白(Occludin)、封闭蛋白-1(Claudin-1)、上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)和黏蛋白-2(MUC-2)的mRNA相对表达量显著降低(P<0.05),空肠Claudin-1、ZO-1、E-cadherin和MUC-2的蛋白表达量也显著降低(P<0.05)。4)与对照组和ETEC+HNa组相比,ETEC组空肠核因子-κB(NF-κB)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、半胱天冬蛋白酶-1(Caspase-1)、白细胞介素-1β(IL-1β)和B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(Bax)的蛋白表达量显著升高(P<0.05),空肠B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)的蛋白表达量显著降低(P<0.05)。5)与对照组相比,ETEC组粪便大肠杆菌数量显著增加(P<0.05),粪便乳酸菌数量则显著降低(P<0.05)。与ETEC组相比,ETEC+HNa组粪便大肠杆菌显著降低(P<0.05)。由此可见,HNa可以通过抑制肠道组织炎性小体激活、肠道上皮细胞凋亡以及上调肠道屏障相关蛋白的表达缓解ETEC K88感染引起的肠道损伤。

新生猪腹泻大肠杆菌K88K99双价基因工程疫苗

中国农科院哈尔滨兽医研究所的科研人员利用现代基因工程技术手段，人工构建出非产肠毒素性且具有K88K89两种保护性抗原的大肠杆菌菌株，通过接种于适宜培养基发酵高密度培养，成功试制出了新生猪腹泻大肠杆菌K88K99双价基因工程疫苗。该疫苗供母猪被动免疫一次即可，妊娠母猪在分娩前10～20天经耳根深部皮下接种1毫升，