SOX7通过靶向调控SHP-2/Wnt/β-catenin/ROS通路抑制结直肠癌细胞增殖、侵袭和迁移

目的研究SOX7调控SHP-2/Wnt/β-catenin/ROS通路从而影响结直肠癌细胞增殖、侵袭和迁移的分子机制。方法将20只裸鼠皮下移植瘤模型随机分为SOX7 NC组(n=5)、SOX mimic组(n=5)、SOX7 NC+PHPS1组(n=5)和SOX7 mimic+PHPS1组(n=5),观察肿瘤生长情况。通过脂质体法将人结直肠癌细胞系SW480细胞转染后,将细胞分为6组,分别为SOX7 NC组、SOX7 mimic组、SOX7 NC+H_(2)O_(2)组、SOX7 mimic+H_(2)O_(2)组、SOX7 NC+PHPS1组、SOX7 mimic+PHPS1组。通过Western blot实验检测各组SW480细胞SHP-2/Wnt/β-catenin/ROS通路相关蛋白的表达,通过细胞划痕实验和Transwell侵袭迁移实验检测SW480细胞的侵袭迁移能力,通过CCK-8检测SW480细胞的增殖。结果小鼠体内实验显示:SOX7 mimic组肿瘤体积明显小于SOX7 NC组(P<0.01),经过PHPS1干预的肿瘤体积明显增大,SOX7 mimic+PHPS1组肿瘤体积和SOX7 NC+PHPS1组的差异无统计学意义。体外实验发现:SOX7 mimic抑制了SW480细胞Wnt、β-catenin、NOX2、NOX4、PI3K、P-PI3K、AKT、P-AKT蛋白表达(P<0.01),促进了p-SHP-2蛋白表达(P<0.01);加入H_(2)O_(2)和SHP-2抑制剂后SOX7 mimic组和SOX7 NC组的Wnt、β-catenin、NOX2、NOX4、PI3K、P-PI3K、AKT、P-AKT的蛋白表达水平升高,但差异无统计学意义,SHP-2、p-SHP-2蛋白的表达水平降低,但差异无统计学意义;细胞划痕、Transwell侵袭迁移实验和CCK-8实验结果表明SOX7通过氧化应激和SHP-2通路抑制了SW480细胞的迁移、侵袭和增殖(P<0.01)。结论SOX7可通过靶向SHP-2/Wnt/β-catenin/ROS通路抑制结直肠癌增殖、侵袭和迁移。

基于Wnt/β-catenin通路探究迷迭香酸对结直肠癌上皮-间质转化的抑制作用

目的探讨迷迭香酸(rosmarinic acid,RA)对结直肠癌(colorectal cancer,CRC)SW480细胞恶性行为的影响及机制。方法通过收集2019年1月至2020年12月在如皋市人民医院接受手术治疗的初诊未经治疗的CRC患者的肿瘤组织以及正常人的结肠组织,用免疫组化和Western blotting方法检测β-catenin的表达,分析与临床分期、预后和免疫浸润的关系。CCK-8检测10、15、20μmol/L的RA对SW480细胞增殖的影响;流式细胞术检测细胞的凋亡情况;Transwell和划痕实验分别检测细胞的侵袭和迁移能力变化;Western blotting检测凋亡、上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)及Wnt/β-catenin通路的相关蛋白表达情况。CRC SW480细胞系悬液皮下接种制作移植瘤小鼠模型,150 mL/kg RA溶液灌胃,观察RA对移植瘤生长的影响,ELISA检测了血清炎症因子变化。结果正常结肠组织中β-catenin的表达很低,而CRC组织中β-catenin的表达明显增高。在CRC患者β-catenin高表达组中,肿瘤大于5 cm的患者数显著高于低表达组,而患者总生存期却显著小于低表达组(P<0.05)。各浓度RA组细胞增殖显著抑制,且呈浓度依赖性降低(P<0.05)。移植瘤小鼠模型中,RA处理组凋亡蛋白Bax和Bad表达较对照组显著增加,抗凋亡蛋白Bcl-2表达显著减少(P<0.05)。同时可见SW480细胞的侵袭和迁移能力显著被抑制(P<0.05),E-cadherin蛋白表达显著增加,Snail、N-cadherin和Vimentin表达显著减少(P<0.05),而且Axin和GSK-3β表达增加,β-catenin表达减少(P<0.05)。结论RA可能通过干预Wnt/β-catenin通路介导的EMT抑制SW480的生物学活性。

miR-3917通过调控Wnt/β-catenin信号通路抑制结肠癌细胞的增殖和迁移

目的探究miR-3917在结肠癌(Colorectal cancer,CRC)细胞增殖和迁移中的作用及相关信号通路机制。方法应用GEO_(2)R分析工具对miRNA表达数据集(GSE101502)进行比较分析,获取在CRC组织中差异表达的miRNA。在TCGA数据库的样本表达数据中验证目的miRNA的表达水平。进一步通过qPCR检测miR-3917在人正常结肠细胞系(CCD841 CoN)和CRC细胞系(HCT 116)中的表达水平。通过在HCT 116细胞中转染miR-3917的模拟物(miR-mimic)上调其表达,并利用qPCR检测验证。通过CCK-8实验和平板克隆形成实验检测细胞的增殖。通过划痕实验和Transwell迁移实验检测细胞的迁移。通过TargetScan对miR-3917的靶基因进行预测并利用DAVID数据库对其进行富集分析。通过Western blot检测β-catenin核蛋白的表达以评价Wnt/β-catenin信号通路的激活水平。结果共有21个差异表达的miRNA(Log2│Fold Change│>1,P<0.05),其中与正常组织相比较,CRC组织中上调的有2个,下调的有19个。miR-3917在CRC组织中的表达显著下降(P<0.05)。与CCD841 CoN细胞系相比,HCT 116细胞中miR-3917的表达显著降低(P<0.05)。在HCT 116细胞中转染miR-mimic可以显著上调miR-3917的表达(P<0.05)。与对照组相比,miR-mimic组中HCT 116细胞的增殖(CCK-8实验,P<0.05;平板克隆形成实验,P<0.05)和迁移(划痕实验,P<0.05;Transwell实验,P<0.05)能力显著下降。与对照组相比,miR-mimic组中HCT 116细胞Wnt/β-catenin信号通路被显著抑制(P<0.05)。结论miR-3917通过调控Wnt/β-catenin信号通路抑制CRC细胞的增殖和迁移能力,这为CRC的治疗提供了潜在新靶点。

IFITM1和Wnt/β-catenin信号通路在结肠癌发生发展中的作用

目的探究干扰素诱导跨膜蛋白1(IFITM1)在结肠癌中的表达以及其在结肠癌中发挥的作用。方法应用生物信息学分析IFITM1在结肠癌中的表达情况和预后情况,并分析IFITM1与β-连环蛋白的相关性。免疫组化观察IFITM1和β-catenin在结肠癌及癌旁组织中的表达情况。构建IFITM1过表达细胞模型,CCK-8实验检测细胞增殖能力的变化,双荧光素酶报告基因检测TCF/LEF转录因子的激活情况,Western blot检测Wnt/β-catenin信号通路上关键蛋白β-catenin、C-myc、CyclinD1的表达情况。结果在线数据库分析结果显示,IFITM1在结肠癌中高表达(P<0.05),且与患者的预后不良显著相关;IFITM1与β-catenin之间存在正相关关系。免疫组化染色结果显示,IFITM1和β-catenin在结肠癌组织中的表达显著高于癌旁组织,IFITM1的表达同肿瘤直径大小及组织浸润程度有关(P<0.05),与其他因素无关(P>0.05);β-catenin的表达与仅与肿瘤直径大小有关(P<0.05),与其余因素无关(P>0.05),且二者之间存在正向相关性。在结肠癌细胞HCT-15中过表达IFITM1后,OE-IFITM1组细胞的增殖能力显著高于OE-NC组(P<0.05),OE-NC组和MOCK组之间无差异(P>0.05)。双荧光素酶报告基因结果显示,OE-IFITM1组的启动子活性高于OE-NC组(P<0.05),OE-NC组与MOCK组之间无差异(P>0.05)。Western blot结果显示,OE-IFITM1组的β-catenin,CyclinD1,C-myc的表达量高于OE-NC组(P<0.05),OE-NC组和MOCK组之间蛋白表达无差异(P>0.05)。结论IFITM1在结肠癌组织中的表达显著高于癌旁组织,并可能通过Wnt/β-catenin信号通路促进细胞增殖。

松脂醇二葡萄糖苷激活Wnt/β-catenin信号通路保护成骨细胞

背景:松脂醇二葡萄糖苷可以促进骨形成与骨基质的合成,加速骨组织修复,但其对成骨细胞的影响和作用机制仍需进一步探索。目的:基于Wnt/β-catenin信号通路探讨松脂醇二葡萄糖苷对地塞米松干预成骨细胞的影响和作用机制。方法:设置不同浓度的地塞米松组和松脂醇二葡萄糖苷组对成骨细胞干预24 h,筛选最佳干预浓度;使用地塞米松、松脂醇二葡萄糖苷和Wnt/β-catenin抑制剂XAV-939对成骨细胞进行干预,设置对照组、地塞米松组、抑制剂组、松脂醇二葡萄糖苷组、松脂醇二葡萄糖苷+抑制剂组。CCK-8法检测细胞活性,检测各组细胞碱性磷酸酶和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3/7酶活性,Annexin V/PI染色与EdU法检测细胞凋亡与增殖情况,Real-Time qPCR检测Wnt3a、β-catenin、c-myc、骨钙素、Ⅰ型胶原蛋白的mRNA表达水平,Western Blot检测Wnt3a、β-catenin、c-myc、骨钙素、Ⅰ型胶原蛋白的蛋白表达水平。结果与结论:①地塞米松和松脂醇二葡萄糖苷干预成骨细胞24 h后,发现浓度为10μmol/L的地塞米松细胞抑制率为实验最佳干预浓度;松脂醇二葡萄糖苷浓度在100μmol/L时,细胞增殖最为明显;②与地塞米松组比较,松脂醇二葡萄糖苷组的碱性磷酸酶活性显著增强(P<0.05),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3/7酶活性显著降低(P<0.05);Annexin V/PI染色和EdU法细胞增殖检测结果表明,松脂醇二葡萄糖苷可抑制地塞米松干预后成骨细胞的凋亡,促进成骨细胞增殖;③与地塞米松组和抑制剂组比较,松脂醇二葡萄糖苷组和松脂醇二葡萄糖苷+抑制剂组中Wnt3a、β-catenin、c-myc、骨钙素、Ⅰ型胶原蛋白mRNA和蛋白表达水平均显著升高(P<0.05);④结果表明,松脂醇二葡萄糖苷可以抑制地塞米松干预后的成骨细胞凋亡,通过激活Wnt/β-catenin信号通路来保护成骨细胞活性,促进成骨细胞增殖,可能发挥延缓激素性股骨头坏死的作用。

乳香提取物调控Wnt/β-catenin信号通路抑制结直肠癌细胞侵袭转移的作用机制研究

目的研究乳香提取物对人结肠癌细胞HCT-116增殖和侵袭转移的影响及可能的作用机制。方法体外培养人结肠癌细胞珠HCT-116,使用不同浓度乳香提取物乙酰基-11-酮基-β-乳香酸(AKBA)分别作用于细胞相同时间后,以CCK-8实验、Transwell细胞侵袭实验、划痕实验检测其对细胞增殖和侵袭转移的影响,以Western blotting、荧光定量PCR等方法探究其对细胞侵袭转移相关蛋白、mRNA表达的影响。结果AKBA可抑制人结肠癌细胞HCT-116的增殖、迁移能力,且呈剂量依赖(P<0.05);AKBA可抑制C-Myc、β-catenin的蛋白和mRNA表达,且呈剂量依赖(P<0.05)。结论AKBA可以抑制人结肠癌细胞HCT-116的增殖和迁移,诱导细胞凋亡。这可能与其调控Wnt/β-catenin信号通路相关。

紫草素调控Wnt/β-catenin抑制腺瘤性结肠息肉突变结肠癌细胞生长

目的发现腺瘤性结肠息肉(APC)突变结肠癌的小分子抑制剂,为结肠癌靶向治疗提供先导化合物。方法构建稳定表达7*Tcf-GFP/SV40-Cherry(7TGC)双重荧光报告系统的APC突变结肠癌细胞系用于小分子抑制剂筛选。细胞活力测定、克隆形成、EdU和动物移植瘤实验检测小分子对体内外APC突变结肠癌的抑制作用,免疫印记和免疫共沉淀实验探究其分子机制。结果发现了4个抑制APC突变结肠癌细胞Wnt活性的小分子,其中紫草素显著抑制APC突变结肠癌的细胞活力和增殖能力并诱导细胞凋亡;移植瘤实验结果表明紫草素显著减缓体内瘤体生长;免疫印记和免疫共沉淀实验进一步发现紫草素可显著减少β-catenin的水平。结论紫草素可显著抑制APC突变结肠癌的Wnt活性和肿瘤生长。

褪黑素通过调控miR-532-3p/β-catenin通路增强结直肠癌细胞对5-氟尿嘧啶的敏感性

目的 探讨褪黑素(melatonin,MLT)增强结直肠癌(colorectal cancer,CRC)对5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)敏感性的作用及其分子机制。方法 采用不同浓度(0、0.125、0.25、0.5、1.0或2.0 mmol/L)的MLT和不同浓度(0、1.25、2.5、5、10、20或40μmol/L)的5-FU处理CRC细胞株SW480和HCT116 48 h。根据对细胞活性的抑制率,选择MLT浓度1 mmol/L进行后续实验。将SW480和HCT116细胞分为二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)组、MLT组和5-FU组,分别用DMSO、1 mmol/L MLT和15μmol/L 5-FU处理48 h。转染50 nmol/L miR-532-3p模拟物、miR-532-3p抑制物及其阴性对照于SW480和HCT116细胞,分别为miR-532-3p模拟物组、miR-532-3p抑制物组、模拟物对照组和抑制物对照组。采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)法检测细胞活性。采用transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭能力。采用流式细胞术检测细胞凋亡。采用实时定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测miR-532-3p的表达。采用Western blot法检测β-catenin蛋白的表达。结果 1 mmol/L MLT处理细胞48 h抑制SW480和HCT116细胞增殖、迁移和侵袭的能力,并促进细胞凋亡(均P<0.01)。采用不同浓度的(0、1.25、2.5、5、10、20或40μmol/L)5-FU处理,与单独5-FU处理比较,1 mmol/L MLT与5-FU共同处理的SW480和HCT116细胞的细胞活性被抑制程度均增强(均P<0.05)。根据SW480和HCT116细胞中5-FU的半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)值,选择15μmol/L 5-FU进行后续实验。RT-qPCR检测显示,miR-532-3p在SW480和HCT116细胞中低表达。采用1 mmol/L MLT处理SW480和HCT116细胞48 h后,miR-532-3p的表达均升高(均P<0.01)。经1 mmol/L MLT和不同浓度(0、1.25、2.5、5、10、20或40μmol/L)的5-FU共同处理48 h后,miR-532-3p抑制物组SW480和HCT116细胞较抑制物对照组的细胞活性被抑制程度均下降(均P<0.05),5-FU的IC50值也均升高(均P<0.01)。采用1 mmol/L MLT处理SW480和HCT116细胞48 h后,miR-532-3p抑制物组较抑制物对照组细胞凋亡率均降低(均P<0.01)。Western blot结果显示,与DMSO组比较,MLT组SW480和HCT116细胞中β-catenin的表达均降低(均P<0.01)。采用1 mmol/L MLT处理SW480和HCT116细胞48 h后,miR-532-3p抑制物组较抑制物对照组β-catenin的表达均升高(均P<0.01)。结论 MLT通过调控miR-532-3p/β-catenin通路增强CRC细胞对5-FU的敏感性,抑制肿瘤生长。

ABCA8通过调控Wnt/β-catenin通路抑制结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:研究ATP结合盒亚家族A成员8(ABCA8)对结直肠癌(CRC)细胞增殖、迁移与侵袭的影响,并阐明其作用机制。方法:采用生物信息学分析ABCA8在CRC组织中的表达情况;采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测临床CRC癌组织和CRC细胞系中ABCA8 mRNA表达水平。采用ABCA8基因过表达慢病毒感染SW480细胞,再将细胞分为对照(Blank)组、空载(Vector)组、ABCA8过表达(Oe-ABCA8)组、Vector+HLY78组和Oe-ABCA8+HLY78组,其中Wnt/β-catenin信号通路激动剂HLY78干预浓度为10μmol/L。CCK-8法检测各组细胞增殖活性;Transwell实验检测各组细胞迁移与侵袭细胞数量;Western blot法检测各组细胞中ABCA8、β-catenin、c-Myc和金属基质蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达水平。结果:ABCA8在CRC癌组织和CRC细胞系SW480、SW620、 HCT116和HT-29中均呈低表达水平。与Blank组比较,Oe-ABCA8组SW480细胞增殖活性显著降低(P<0.05),迁移与侵袭细胞数量显著减少(P<0.05),细胞中ABCA8表达显著升高(P<0.05),β-catenin、c-Myc和MMP-9蛋白表达水平均显著降低(P<0.05),而Vector组各指标无显著性差异(P>0.05)。与Vector组比较,Vector+HLY78组SW480细胞增殖活性显著升高(P<0.05),迁移与侵袭细胞数量显著增多(P<0.05),细胞中β-catenin、c-Myc和MMP-9蛋白表达水平均显著升高(P<0.05)。与Oe-ABCA8组比较,Oe-ABCA8+HLY78组SW480细胞增殖活性显著升高(P<0.05),迁移与侵袭细胞数量显著增多(P<0.05),细胞中β-catenin、c-Myc和MMP-9蛋白表达水平均显著升高(P<0.05)。结论:ABCA8在CRC组织和细胞系中低表达,过表达ABCA8可抑制CRC细胞系SW480的增殖、迁移与侵袭,其作用机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号传导有关。

健脾通络方通过Wnt/β-catenin信号通路调控结直肠癌细胞增殖、凋亡和迁移的机制研究

目的探究健脾通络方(JPTLR)通过Wnt/β-catenin信号通路调控结直肠癌(CRC)细胞增殖、凋亡和迁移的机制。方法分别给予人CRC细胞HCT116不同质量浓度的JPTLR(0、6.25、12.50、25.00、50.00、100.00、150.00、200.00 mg/mL)、5-氟尿嘧啶(5-FU)及两者联合进行干预,采用CCK-8法、AnnexinⅤ-FITC和碘化丙啶(PI)双染色法、细胞划痕实验检测各组细胞的增殖、凋亡和迁移能力。采用实时荧光定量PCR法及蛋白质印迹法检测JPTLR对Wnt/β-catenin信号通路及凋亡相关因子表达的影响。结果JPTLR具有抑制HCT116细胞增殖的作用,且这一作用具有时间及浓度依赖性。与空白对照组相比,JPTLR组的细胞凋亡率均显著升高,细胞划痕愈合率均显著降低,细胞中Wnt3a、β-catenin和Bcl-2的mRNA及蛋白表达水平均显著降低,而Bax、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的mRNA及蛋白表达水平均显著升高,差异均有统计学意义(P均<0.01);JPTLR+5-FU组的细胞凋亡率最高,细胞划痕愈合率最低,细胞中Wnt3a、β-catenin和Bcl-2的mRNA及蛋白表达水平最低,而Bax、Caspase-3的mRNA及蛋白表达水平最高。结论JPTLR能够通过下调Wnt/β-catenin信号通路表达减弱CRC细胞的增殖、迁移和抗凋亡能力。本研究从促进肿瘤细胞凋亡的角度阐明了JPTLR的抗肿瘤作用机制,为JPTLR的临床应用转化提供了实验依据。

压应力激活SOST/Wnt/β-catenin 通路诱导软骨终板细胞退变

背景:在许多可以导致椎间盘退变的因素中(衰老、营养匮乏、机械因素等),力学负荷被认为是极其重要的因素,但其机制尚不清楚。目的:探讨硬骨素和Wnt/β-catenin信号通路在压应力诱导终板软骨退变中的作用。方法:提取4周龄雄性SD大鼠软骨终板细胞,体外利用力学加载仪器对终板软骨细胞施加压应力,于压缩细胞1,3,5,7 d,采用CCK-8法测定细胞活力;Western blot、RT-qPCR及细胞免疫荧光等检查终板软骨细胞内软骨标记物(聚集蛋白聚糖、Ⅱ型胶原)、钙化相关因子(Runx2、骨钙素)、细胞外基质降解酶及信号通路基因(硬骨素、β-catenin)等表达。结果与结论:①压应力作用下,终板软骨细胞活力会随着压应力时间、强度增加而降低;②终板软骨细胞的软骨标记物(聚集蛋白聚糖、Ⅱ型胶原)表达下降,而钙化相关因子(Runx2、骨钙素)表达上升;③压应力能促进终板软骨细胞的细胞外基质降解,基质金属蛋白酶3、基质金属蛋白酶13表达量增加;④细胞内Wnt/β-catenin信号通路表达出现异常,其特异性抑制因子硬骨素伴随着β-catenin的异常积累而表达下降。结果说明:在压应力作用下,终板软骨细胞内硬骨素的表达下降,导致Wnt/β-catenin信号通路激活,促进软骨终板的钙化、退变与细胞外基质的降解,进而促进椎间盘退变。

miR-210通过Wnt/β-catenin促进结直肠癌对顺铂的药物敏感性研究

目的 探讨miR-210对结直肠癌细胞增殖及顺铂(DDP)药物敏感性及其机制影响。方法 RT-qPCR检测人正常结肠上皮细胞(HCoEpiC)、结直肠癌细胞(HCT-116、HT-29、SW620)及顺铂耐药细胞株(HCT-116/DDP)中miR-210的表达;使用CCK-8和Annexin V-FITC/PI法检测miR-210过表达或干扰后,HCT-116细胞增殖及凋亡情况。将HCT-116/DDP细胞随机分成Control组、miR-210 mimics组、miR-210 inhibitor组,在DDP(80μmol/L)或对照作用24 h后,CCK-8检测HCT-116/DDP细胞活力;Annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡,Western blot检测细胞凋亡相关指标(Bad、Bcl-2、Cleaved Caspase-3)、耐药相关指标(ABCG2、MRP2、P-gp)及Wnt/β-Catenin通路中重要蛋白的表达。结果 与HCoEpiC细胞相比,结直肠癌细胞(HCT-116、HT-29、SW620)中miR-210的表达显著降低,而HCT-116/DDP细胞中miR-210的表达比HCT-116细胞中进一步降低。miR-210 mimics能够显著抑制结直肠癌细胞及其顺铂耐药株的细胞活力,促进细胞凋亡,而inhibitor作用相反。在HCT-116/DDP细胞中,与DDP组比较,DDP+mimics联合组能够显著抑制细胞活力,促进细胞凋亡,促进Bad、Cleaved Caspase-3的表达,抑制Bcl-2的表达,抑制耐药相关蛋白(p-gp、MRP2、ABCG2)的表达,抑制Wnt3a、β-Catenin的表达;miR-210 inhibitor则得到相反的结果。结论 miR-210可能通过调控Wnt/β-catenin通路,影响耐药相关蛋白(p-gp、ABCG2、MRP2)的表达,最终促进HCT-116/DDP耐药细胞对顺铂的药物敏感性。

结直肠癌进展与抑制的十字路口:间充质干细胞治疗干预效果及难题

背景:结直肠癌早期的治疗方法包括内镜和手术切除,但是术后并发症多,晚期多采用化疗方法,然而化疗会引起胃肠功能紊乱、骨髓抑制、肝肾功能损伤等不良反应,导致大多数患者不主动、不配合治疗。目的:综述间充质干细胞治疗结直肠癌的作用机制、最新治疗进展及目前存在的问题,为将来临床应用提供依据。方法:计算机检索Pub Med数据库、中国知网、万方数据库收录的相关文献。英文检索词为“mesenchymal stem cells,colorectal cancer,cancer stem cell,tumor microenvironment”,中文检索词为“间充质干细胞,结直肠癌,癌症干细胞,肿瘤微环境”,最终纳入119篇文献进行分析。结果与结论:(1)间充质干细胞对于结直肠癌具有促进和抑制的双面作用;(2)间充质干细胞的肿瘤归巢特性使其能够准确迁移到肿瘤位置并释放药物,基于这一特性,增加了治疗结直肠癌的安全性和有效性;(3)间充质干细胞衍生的外泌体作为良好的药物载体,在结直肠癌靶向治疗中显示出良好的应用前景;(4)使用病毒载体、非病毒载体或其他转染工具将具有成熟抗肿瘤作用的药物加载到间充质干细胞中,共同治疗结直肠癌;(5)间充质干细胞与化疗药物联合使用可以提高化疗药物疗效并降低化疗药物不良反应;(6)间充质干细胞促进结直肠癌的发展机制主要与结直肠癌细胞中的信号转导、趋化因子的表达状态及间充质干细胞向癌症相关成纤维细胞转化有关;(7)间充质干细胞可能具有驱动癌症干细胞的特性,促进肿瘤起始并提高肿瘤侵袭性;(8)间充质干细胞治疗结直肠癌还存在着不可避免的问题:缺乏标准化治疗方案及疗效评价方法、治疗成本高昂、间充质干细胞的保存与运输问题、间充质干细胞与化疗药物共同使用的比例等。

大肠癌及大肠腺瘤中β-catenin、Cox-2和MMP-7的表达及临床意义

目的检测β-链接素(β-catenin)、环氧合酶-2(Cox-2)和基质金属蛋白酶-7(MMP-7)在大肠癌(CRC)、大肠腺瘤及正常大肠组织中的表达水平,并分析探讨三者的相互关系。方法采用免疫组化技术检测60例大肠腺癌组织、30例大肠腺瘤和15例正常大肠组织中β-catenin、Cox-2和MMP-7的表达水平,记录β-catenin、Cox-2和MMP-7在三者中的表达差异,结合临床病理资料对三者进行综合分析,并探讨三者的关系。结果大肠癌中β-catenin膜表达缺失率、β-catenin异位表达率、Cox-2细胞质阳性表达率分别为71.7%、90.0%和81.7%,MMP-7细胞质阳性表达率为83.3%,其中38.3%为强阳性表达。大肠癌组和大肠腺瘤组比较其β-catenin膜表达缺失、Cox-2和MMP-7表达阳性者均较高,有显著差异(P<0.05),而β-catenin异位表达无显著差异(P>0.05);大肠癌组和正常大肠粘膜组比较其β-catenin膜表达缺失、β-catenin异位表达、Cox-2和MMP-7阳性表达均较高,有显著差异(P<0.05)。大肠腺瘤组与正常组比较其β-catenin异位表达和MMP-7表达较高(P<0.05)。大肠癌中β-catenin的异常表达、Cox-2及MMP-7的表达与患者的性别、年龄、肿瘤大小及部位均无关;大肠癌中β-catenin在细胞膜的表达缺失程度及Cox-2的表达与大肠癌的分化程度、Dukes分期、浸润深度及淋巴结转移程度呈正相关关系;大肠癌中MMP-7的表达与大肠癌的Dukes分期、浸润深度及淋巴结转移程度呈正相关;大肠癌中β-catenin的异位表达只与大肠癌的Dukes分期呈正相关关系。大肠癌中β-catenin异常表达分别与Cox-2阳性表达及MMP-7阳性表达之间呈正相关关系(rs=0.416,P=0.001;rs=0.447,P<0.001);Cox-2阳性表达与MMP-7阳性表达之间亦呈正相关关系(rs=0.366,P=0.004)。结论大肠癌中存在β-catenin的异常表达,β-catenin的异常表达、Cox-2及MMP-7的表达与大肠癌的侵袭转移和预后密切相关,并且三者之间存在一定的相关性。三者联合测定可以作为判定大肠癌预后的有效指标。*

非甾类抗炎药通过β-catenin/TCF4-survivin通路诱导结肠癌细胞凋亡

背景与目的Wnt信号传导通路异常导致的细胞增殖加快和凋亡抵抗,在结肠癌发生发展中发挥重要作用。本研究探讨Wnt信号传导通路在结肠癌细胞中拮抗凋亡的作用机制。方法将survivin的启动子区克隆到荧光素酶报告基因表达系统,与pRL-SV40共转染HCT116细胞,利用双荧光检测系统检测启动子区活性;以非甾类抗炎药物indomethacin刺激HCT116细胞,细胞PI染色后,利用流式细胞仪检测细胞的凋亡状态;Westernblot检测蛋白表达。结果Survivin作为β-catenin的靶基因受到Wnt通路的调节;Indomethacin通过β-catenin/TCF4信号通路在转录水平抑制survivin的表达;Survivin过表达可以部分逆转Indomethacin诱导的HCT116细胞凋亡。结论β-catenin/TCF4-survivin通路作为拮抗细胞凋亡的重要途径,在结肠癌的治疗方面具有重要的应用前景。

TNF-α通过Wnt/β-catenin信号通路促进结肠癌细胞的增殖

目的探讨TNF-α对结肠癌细胞增殖的影响,并初步探讨其分子机制。方法用生长曲线实验和MTT法检测TNF-α(10nmol/L)对结肠癌细胞HT-29增殖的影响;流式细胞仪检测TNF-α对结肠癌细胞周期的影响;Western blot检测TNF-α对β-catenin、c-myc及cyclinD1的影响;观察XAV939阻断Wnt/β-catenin信号通路对TNF-α促进结肠癌细胞增殖及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的影响。结果 TNF-α(10nmol/L)组结肠癌细胞HT-29增殖明显增快(P均<0.05),G0/G1期细胞明显减少(P<0.05),S期细胞明显增多(P<0.05),G2/M期细胞比例没有统计学差异(P>0.05)。TNF-α可促进结肠癌细胞中β-catenin、c-myc及cyclinD1蛋白的表达(P均<0.05);XAV939减弱了TNF-α对结肠癌细胞增殖的作用(P均<0.05),而且β-catenin、c-myc及cyclinD1的蛋白表达降低(P均<0.05)。结论 TNF-α可能通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进结肠癌细胞的增殖,从而参与结肠癌的发生发展。

结直肠癌中δ-catenin的表达与癌细胞增殖状态的相关性

目的探讨在结直肠癌中δ-catenin表达的意义及其与结直肠癌细胞增殖活性的相关性。方法利用免疫组织化学Elivision^(TM)plus法检测结直肠癌组织芯片中120例结直肠癌组织中δ-catenin和Ki-67的表达情况,利用Western blot法检测30例正常结直肠组织和结直肠癌组织中δ-catenin的表达水平。结果结直肠癌组织中δ-catenin的阳性表达率为65.83%(79/120),显著高于正常结直肠组织(P<0.05)TNMⅢ/Ⅵ期的结直肠癌组织中δ-catenin的阳性表达率为78.05%(32/41),明显高于Ⅰ/Ⅱ期结直肠癌组织中的阳性表达率59.49%(47/79)(χ~2=4.132,P=0.042);低分化的结直肠癌组织中δ-catenin阳性表达率为82.14%(23/28),明显高于高、中分化结直肠癌组织中的阳性表达率60.87%(56/92)(χ~2=4.319,P=0.038);δ-catenin在有淋巴结转移的结直肠癌中的表达率为77.05%(47/61),明显高于无淋巴结转移的结直肠癌中的阳性表达率54.24%(32/59)(χ~2=6.939,P=O.008)结直肠癌组织中δ-catenin高表达同结直肠癌细胞的高增殖活性(用Ki-67标记)呈显著正相关(r=0.334,P<0.01)。结论δ-catenin高表达很可能参与了结直肠癌的发生、发展过程。

Wnt/β-catenin信号通路相关因子与结肠癌患者预后的关系

目的研究Wnt/β-catenin信号通路相关因子与结肠癌患者预后的关系,为结肠癌的分子分期提供理论基础。方法选取620例结肠癌患者临床资料及病理蜡块,挑选Wnt/β-catenin信号通路中有争论的相关因子Wnt1、β-catenin、TCF4及增殖、转移相关靶基因MMP7、CD44v7、Survivin、c-Myc、Cyclin D1、PPARγ,应用组织芯片及免疫组化技术研究Wnt/β-catenin信号通路相关因子在结肠正常组织及癌组织中的表达,应用Cox单因素及多因素分析探讨它们在结肠癌组织中的表达与结肠癌患者预后的关系。结果 Cox单因素及多因素分析结果示结肠癌组织中MMP7、Survivin表达是影响结肠癌患者肿瘤死亡的危险因素,阳性患者预后差(P<0.05)。结论结肠癌组织中MMP7、Survivin表达是影响结肠癌患者肿瘤死亡的危险因素。

肠三叶因子与Wnt/β-Catenin信号通路在结直肠癌中的表达及其与患者预后的关系

目的研究肠三叶因子(ITF/TFF3)与Wnt/β-Catenin信号转导通路相关基因在结直肠癌中的表达情况及其与患者临床病理及预后的关系。方法采用SP免疫组织化学染色法检测68例结直肠癌、21例结直肠腺瘤及11例正常结直肠黏膜组织中TFF3、Wnt1a、β-Catenin的表达变化;分析TFF3、Wnt1a、β-Catenin与结直肠癌患者临床病理指标的关系;应用Cox单因素及多因素回归分析探讨它们在结肠癌组织中的表达与结肠癌患者预后的关系。结果 1TFF3、Wnt1a、β-Catenin在结直肠癌和腺瘤组织中均有表达,Wnt1a、β-Catenin在正常结直肠黏膜组织中则均呈阴性或弱阳性表达,而TFF3呈阳性表达,各标记物在不同结直肠黏膜组织中的表达差异显著(P均<0.05);2Wnt1a、β-Catenin的表达均与患者的TNM分期相关,TNM分期越高的患者Wnt1a、β-Catenin的表达越强;β-Catenin与TFF3的表达则均与患者的淋巴结转移情况相关,伴有淋巴结转移的患者二标记物的阳性率高;Wnt1a、TFF3的表达还与患者的肝转移情况相关,伴有远处转移的患者Wnt1a、TFF3的阳性率高;3Wnt1a、β-Catenin在结直肠癌的表达呈正相关(r=0.308)。β-Catenin在Wnt1a阳性组中的表达(阳性率92.6%)明显高于在Wnt1a阴性组中的表达(阳性率65.9%)(P=0.010);4Cox单因素法分析TFF3、Wnt1a、β-Catenin的表达对患者肿瘤死亡的影响,结果显示,TFF3、Wnt1a可影响患者的肿瘤死亡(P均<0.05),阳性患者生存时间短,而β-Catenin的表达对结肠癌患者肿瘤死亡无影响(P>0.05)。结论 TFF3与Wnt/β-Catenin信号转导通路与结直肠癌的发生发展及预后相关,可作为较为理想的肿瘤标志物辅助判断患者预后并指导临床治疗。

β-catenin,cyclin D1和c-myc在大肠癌组织中的表达

目的:探讨β-catenin(β-连环素)在大肠癌的表达及其与癌基因cyclinD1和C-myc的关系。 方法:应用免疫组化Powervision^(TM)二步法,检测25名正常人大肠黏膜,42例大肠腺瘤和58例大肠癌组织β-catenin,cyclinD1和C-myc的表达情况。 结果:正常大肠黏膜β-catenin胞膜阳性表达,cyclinD1和C-myc阴性。大肠腺瘤和大肠癌组织β-catenin呈胞质和/或胞核异位表达,大肠癌异位表达率为65.5％,显著高于大肠腺瘤(42.9％,P<0.05)。大肠癌cyclinD1和C-myc阳性率分别为74.1％、70.7％,均显著高于大肠腺瘤(45.2％,33.3％;P均<0.01)。大肠癌中β-catenin与cyclinD1和C-myc表达呈明显正相关(r=0.32,0.57;P<0.05,P<0.01)。 结论:β-catenin异位表达可能是原癌基因cyclinD1和C-myc激活的原因之一,并在大肠癌发生过程中可能起重要作用。