前药5-FC联合胃泌素拮抗剂CI-988对转CD基因大肠癌SW480细胞的杀伤作用

目的:探讨联合应用前药5-氟胞嘧啶(5-fluorocytosine,5-FC)和胃泌素拮抗剂CI-988对转组织特异性胞嘧啶脱氨基酶(cytosine deaminase,CD)基因的大肠癌SW480细胞生长的影响。方法:将转CD基因大肠癌SW480细胞接种至4块24孔细胞培养板中,依次分为实验组1、2、3及对照组,分别以含有前药5-FC、胃泌素拮抗剂CI-988、5-FC联合CI-988及正常培养液进行培养。每天胰酶消化法计数各组4孔,共6d,绘制细胞生长曲线并计算生长抑制率。按上述分组方法另接种培养4组细胞,于培养72h行MTT法检测490nm处吸光度A值,计算细胞杀伤率。结果:应用5-FC联合CI-988处理的转CD基因大肠癌SW480细胞在6d后生长抑制率达97;于培养72h时,实验组1、3细胞杀伤率较对照组有显著性差异(P<0.01);实验组2与对照组无显著性差异(P>0.05);实验组3较实验组1、2有显著性差异(P<0.01)。结论:CD/5-FC系统和胃泌素拮抗剂CI-988对转基因大肠癌SW480细胞具有杀伤或抑制作用,联合应用胃泌素拮抗剂可以提高CD/5-FC自杀基因系统对大肠癌细胞的杀伤效应。

苦参碱抑制人大肠癌SW480细胞环氧化酶-2的表达

目的探讨苦参碱(MT)对人大肠癌SW480细胞环氧化酶(COX-2)表达的影响。方法采用MTT法检测MT对SW480细胞的增殖抑制作用,采用实时荧光定量RT-PCR和Western blotting等方法检测不同浓度(0.25～2.0mg/mL)苦参碱对细胞COX-2表达的影响。结果MT抑制SW480细胞增殖呈剂量和时间依赖性,其48hIC50=0.516mg/mL。倒置显微镜下以及细胞爬片HE染色可见实验组细胞出现典型的细胞凋亡形态改变:细胞皱缩,体积减小,胞浆凝聚,空泡化明显,形成"印戒"细胞。苦参碱可抑制SW480细胞的COX-2 mRNA、蛋白表达水平。结论MT在体外能抑制SW480细胞的增殖,其抑制作用具有明显的量效和时效关系。苦参碱具有抑制SW480细胞的COX-2基因转录、蛋白表达和功能活性等作用,在时间范围(8～72h)内,表现出时效关系。

APRIL在大肠癌组织中的表达及化疗药物对大肠癌SW480细胞APRIL表达的影响

背景与目的:增殖诱导配体(a proliferation-inducing ligand,APRIL)是最近发现的肿瘤坏死因子家族新成员,有促进肿瘤生成和增殖的能力。本实验通过研究APRIL在大肠癌组织中的表达,并对比氟尿嘧啶和顺铂对大肠癌细胞株SW480表达APRIL水平的影响,探讨抗癌药对APRIL在大肠癌组织中表达的影响。方法:采用免疫组化法和荧光定量PCR检测56例大肠癌患者癌组织和配对癌旁相对正常组织及大肠癌细胞株SW480上APRIL的表达。将不同终浓度的氟尿嘧啶和顺铂加入培养中的SW480细胞,用荧光定量PCR检测加入药物后24h、48h和72hSW480细胞表达APRIL mRNA的水平。结果:大肠癌组织表达APRIL的阳性率为76.8%,mRNA水平为0.71±0.08,高于癌旁相对正常组织的16.1%和0.16±0.05(P<0.001)。SW480细胞上有明显的APRIL表达,加入不同浓度的氟尿嘧啶后,SW480细胞APRIL的mRNA水平逐渐升高,至72h表达最高,25、50、100、200μg/mL4个药物浓度作用72h后细胞APRIL mRNA水平分别为0.85±0.10、0.81±0.09、0.83±0.11和0.90±0.12,与空白对照(0.57±0.06)相比差异有统计学意义(P<0.001);而加入不同浓度的顺铂后,细胞APRILmRNA水平与空白对照相比差异无统计学意义(P>0.05),仅在10、20μg/mL浓度作用72h后细胞的APRIL mRNA水平(分别为0.44±0.05,0.40±0.07)低于空白对照(P<0.05)。结论:APRIL在大肠癌的进展过程中可能起到一定程度的促进作用;氟尿嘧啶可能具有对抗APRIL功能的潜在作用。

5-Fu诱导人大肠癌SW480细胞株耐药与自噬活性的变化

目的:观察结直肠癌细胞产生5-Fu耐药过程中自噬水平的变化,探讨自噬活性变化在结直肠癌细胞耐药形成过程中的作用。方法:用浓度递增筛选法诱导耐受不同5-Fu浓度的耐药SW480细胞株,MDC染色和透射电镜观察SW480细胞内的自噬泡数量,CCK-8法检测细胞活力。结果:成功的诱导出三个水平的耐药细胞株;随着耐药浓度的升高,结直肠癌细胞的自噬水平逐渐增高,高水平耐药细胞株内自噬泡的数量较低水平耐药及正常SW480细胞显著增高(P<0.05),而5-Fu对其抑制率却相应的降低。结论:细胞自噬活性的增加参与了结直肠癌细胞对5-Fu的耐药过程。

三氧化二砷联合5-氟尿嘧啶对人大肠癌SW480细胞的抑制作用

目的:比较5-氟尿嘧啶(5-FU)单独以及联合三氧化二砷(As2O3)对人大肠癌SW480的细胞毒作用,为临床联合用药提供实验依据。方法:以MTT法观察不同浓度的As2O3、5-FU以及两者合用对大肠癌SW480细胞的细胞毒作用,比较药物对细胞增值的抑制效应。结果:与单用5-FU相比,As2O3与5-FU联用能显著抑制人大肠癌SW480细胞的增值作用。结论:As2O3与5-FU联合应用具有显著抑制人大肠癌SW480细胞的作用。

胃泌素对人大肠癌SW480细胞株增殖的调控作用

目的：探讨胃泌素对人大肠癌增殖的调控作用。方法：体外细胞培养观察与肽胃泌素（ＰＧ）对人大肠癌ＳＷ４８０细胞株的影响，采用ＭＴＴ比色分析法测活癌细胞数，流式细胞术测ＤＮＡ和蛋白质合成及细胞增殖周期（ＰＩ）。结果：ＰＧ组（浓度２５ｍｇ／Ｌ）活细胞数，ＤＮＡ和蛋白质合成明显高于对照组（Ｐ＜０．０１），Ｇ０／Ｇ１期细胞数明显低于对照组（Ｐ＜０．０１），Ｓ、Ｇ２Ｍ期细胞数及ＰＩ明显高于对照组（Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．００１）。结论：胃泌素具有促进大肠癌细胞分裂和增殖的作用，在受体后参与了大肠癌细胞周期的调控作用。

人突变p27基因转染对大肠癌SW480细胞黏附作用的影响

目的研究人突变p27基因p27mt对大肠癌细胞黏附作用的影响,探讨p27mt基因在大肠癌转移中的作用机制。方法用Ad-p27mt转染大肠癌细胞SW480,采用WesternBlot检测p27mt在SW480中的表达。分别采用细胞计数法,MTT法检测p27mt对大肠癌细胞同质黏附作用和异质黏附作用的影响。结果转染Ad-p27mtSW480细胞转染后,同质黏附作用高于对照,异质黏附作用低于对照。结论上调p27mt基因的表达,可使大肠癌细胞间的同质黏附作用增强,异质黏附作用降低。因此,p27mt基因具有抑制大肠癌细胞转移的功能,其机制是改变了细胞基质及细胞间的黏附能力。

胃泌素受体拮抗剂丙谷胺对人大肠癌SW480细胞株作用及机理

目的:探讨胃泌素受体拮抗剂丙谷胺(PGL)对人大肠癌SW480细胞株活细胞数、DNA和蛋白质合成及细胞增殖周期的影响,为大肠癌病人应用丙谷胺治疗提供实验依据。方法:用MTT比色分析法测活细胞数,流式细胞术测DNA、蛋白质和细胞增殖周期。结果:PGL组活细胞数、DNA和蛋白质合成、细胞周期分布和增殖指数(PI)与对照组比无显著性(P均>0.05)。PG(5肽胃泌素)组活性细胞数明显高于对照组(P<0.01)。PGL+PG组活细胞数、DNA和蛋白质合成、S、G_2M期细胞数及PI均明显低于PG组(P均<0.01),G_0/G_1期细胞数明显高于PG组(P<0.01),而与对照组比均无显著性(P均>0.05)。结论,PG对大肠癌SW480细胞株生长无明显影响,但可抑制胃泌素对大肠癌细胞的促增殖作用,其作用机理为抑制胃泌挛对癌细胞的DNA和蛋白质的合成,从而抑制癌细胞从G_0/G_1期过渡到S、G_2M期。

CD133^+脐血干细胞对大肠癌SW480细胞生长、黏附及迁移的影响

背景与目的:转移是恶性肿瘤的最重要的生物学特性,是临床上癌症患者死亡的最主要原因,近年实验显示CD133+造血干细胞对鼠源性肿瘤细胞株具有促转移作用,但在人癌实验层次未见报道。本实验旨在体外探讨CD133+脐血干细胞对人大肠癌细胞株SW480增殖、迁移及黏附的影响。方法:采用密度梯度离心及免疫磁珠分选法分离并培养人CD133+脐血干细胞,将CD133+脐血干细胞与SW480共同趋化培养,用MTT法检测肿瘤细胞的增殖及黏附能力,用Transwell小室法检测肿瘤细胞的迁移能力。结果:CD133+人脐血干细胞能显著促进SW480细胞的生长(P<0.05),能促进肿瘤细胞的形态学改变,即肿瘤细胞的核深染,异型明显,细胞呈多角形,能显著促进SW480细胞的黏附及迁移能力(实验组A490为0.11±0.01,对照组A490为0.05±0.01,P<0.05)。结论:CD133+脐血干细胞可显著促进大肠癌细胞的增殖及侵袭能力,宿主造血干细胞可能对肿瘤转移形成具有重要影响。

阿霉素对大肠癌SW480细胞周期及周期相关蛋白表达的影响

目的探讨阿霉素对大肠癌SW480细胞周期及周期相关蛋白表达的影响。方法体外培养SW480细胞,随机分为A(空白对照组)、B、C、D、E组,阿霉素浓度分别为0、2.5、5、10、20μg/mL。采用MTT法测定各组细胞培养12、24、48、72 h后的细胞生长抑制率;流式细胞术分析各组细胞培养48 h后细胞周期;Western blot法测定各组细胞培养48 h后SW480细胞周期相关蛋白Cyclin B1、Cyclin A表达水平。结果阿霉素抑制SW480细胞增殖具有浓度和时间依赖性。不同浓度阿霉素作用于SW480细胞48 h后,D、E组G0/G1期细胞百分率低于A、B、C组,SubG1期细胞百分率、凋亡指数(AI)高于A、B、C组,P均<0.05;与A组比较,B、C组Cyclin B1表达量增高(P均<0.05),D、E组表达量下降(P均<0.05);随着阿霉素浓度增加,Cyclin A的表达量逐渐降低(P<0.05)。结论阿霉素可将SW480细胞周期阻滞于G0/G1期,影响细胞周期及Cyclin B1、Cyclin A的表达。

“莪黄灌肠液”对人大肠癌SW480细胞HIF-1α通路uPA、uPAR基因表达的影响

目的:通过莪黄灌肠液对SW480细胞HIF-1α通路uPA、uPAR基因表达的影响,探讨莪黄灌肠液对SW480细胞侵袭与迁移的影响。方法:根据随机数学分组的原则,将50只健康SD雄性大鼠分成随机5组并逐个编号,体重控制在(200±20)g。通过预实验得出的药物分组量分别灌胃给药:莪黄灌肠液(莪黄汤)每毫升药液中含生药2 g,莪黄灌肠液(莪黄汤)组由低、中、高(6.075 g/kg,12.15 g/kg,24.3 g/kg)剂量组(灌胃剂量2 ml)组成,空白组为生理盐水组(灌胃剂量2 ml,pH 7.2),阳性对照组由腹腔注射氟尿嘧啶0.025 g/(kg·d),调整注射剂量1 ml构成。标准化灌胃1周,无菌条件下提取各组含药血清。在体外使用含药血清体培养SW480细胞,划痕实验观察莪黄灌肠液含药血清在体外对SW480细胞迁移能力的影响;Transwell实验检测肿瘤细胞侵袭能力;Western-blot实验检测各组细胞中HIF-1α、uPA、uPAR蛋白表达。结果:预实验提示莪黄灌肠液对大鼠无明显副作用。SW480细胞具有明显的迁移及侵袭能力。各组莪黄灌肠液含药血清能抑制SW480细胞的侵袭与迁移特性,其中莪黄灌肠液各组(24.3 g/kg,12.15 g/kg,6.075 g/kg)和氟尿嘧啶组较空白组均能够有效抑制肿瘤细胞的侵袭与迁移作用,且氟尿嘧啶组作用最强,中药24.3 g/kg组表现出的抑制侵袭作用较12.15 g/kg,6.075 g/kg组均强(P<0.05)。莪黄灌肠液含药血清作用于肿瘤细胞24 h后,其细胞内HIF-1α、uPA、uPAR蛋白含量均有明显的下降,HIF-1α、uPA、uPAR蛋白表现出浓度依赖性(P<0.05)。结论:"莪黄灌肠液"可能通过作用于HIF-1α通路抑制SW480细胞的侵袭与转移。

异莲心碱通过PI3K/Akt/mTOR信号通路影响结肠癌SW480细胞增殖、凋亡和自噬

目的:探讨异莲心碱(Iso)通过PI3K/Akt/mTOR信号通路对结肠癌SW480细胞增殖、凋亡和自噬的影响。方法:用10、20和40μmol/L的Iso处理结肠癌SW480细胞,CCK-8法、流式细胞术和WB法分别检测Iso对细胞增殖活力、凋亡和自噬相关蛋白LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、p62表达的影响。然后,用20μmol/L的Iso和25μmol/L的PI3K激活剂740 Y-P分别处理SW480细胞,将细胞分为对照组、740 Y-P组、Iso组和Iso+740 Y-P组,流式细胞术、WB法检测Iso和740 Y-P对各组细胞凋亡及细胞中LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、p62、PI3K、p-PI3K、mTOR和p-mTOR蛋白表达的影响。结果:10、20和40μmol/L的Iso处理后,SW480细胞增殖活力均显著下降(均P<0.05),细胞凋亡率均显著升高(均P<0.05),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达均显著上调(均P<0.05),p26蛋白表达显著下调(P<0.05)。Iso和740 Y-P处理后,与对照组相比,740 Y-P组细胞凋亡率、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达均显著下降(均P<0.05),p26、p-PI3K/PI3K和p-mTOR/mTOR表达均显著升高(均P<0.05);Iso组细胞凋亡率、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达升高(均P<0.05),p26、p-PI3K/PI3K和p-mTOR/mTOR表达均显著下降(均P<0.05);与740 Y-P组相比,Iso+740 Y-P组细胞凋亡率、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达升高(P<0.05),p26、p-PI3K/PI3K和p-mTOR/mTOR表达均显著下降(均P<0.05);与Iso组相比,Iso+740 Y-P组细胞凋亡率、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达下降(均P<0.05),p26、p-PI3K/PI3K和p-mTOR/mTOR表达均显著升高(均P<0.05)。结论:Iso通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制结肠癌SW480细胞增殖并诱导细胞凋亡和自噬。

槲皮素提高人结直肠癌细胞SW480和SW620对顺铂的敏感性

目的本研究旨在探究槲皮素对顺铂耐药人结直肠癌(colorectal cancer,CRC)细胞SW480和SW620的抑制作用及其可能的机制。方法培养SW480和SW620细胞的顺铂耐药亚型,并用MTT法测定槲皮素对细胞增殖和化疗敏感性的影响。流式细胞术用于检测细胞凋亡,蛋白质印迹法用于检测相关蛋白质的表达。结果MTT实验显示,80μmol/L和160μmol/L浓度的槲皮素显著抑制了SW480和SW620细胞的增殖。流式细胞术结果表明,顺铂联合槲皮素组的细胞凋亡率明显高于其他3组。蛋白质印迹法结果显示,顺铂联合槲皮素组的裂解型半胱天冬酶-3(cleaved-caspase-3)和半胱天冬酶-9(caspase-9)表达显著增加。化疗药物敏感性检测结果表明,耐药细胞的IC_(50)升高,而在槲皮素给药后显著下降(P均<0.05)。结论本研究明确了槲皮素能够提高人CRC细胞对顺铂的敏感性。这种效应可能与其影响细胞增殖、凋亡和自噬等方面的作用机制有关。

TPARM对人结直肠癌细胞株SW480增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响

目的 探讨四肽重复结构域(TTC)12,也被称为TPARM,其表达对人结肠癌细胞SW480增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响。方法 将人结肠癌SW480细胞株分为3组:NC组、TPARM-siRNA组和Scr-siRNA组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)法和Western印迹法检测各组TPARM mRNA和蛋白表达。细胞计数试剂盒(CCK)8法、平板克隆法测定各组TPARM表达对SW480细胞增殖的影响。Western印迹法检测TPARM表达对各组周期相关蛋白及凋亡相关蛋白的表达。流式细胞术检测各组TPARM表达对SW480细胞凋亡的影响。Transwell小室侵袭实验和划痕实验观察TPARM表达对SW480细胞侵袭、迁移能力的影响。结果 与NC组、Scr-siRNA组比较,转染TPARM-siRNA后,SW480细胞中TPARM mRNA及蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。分别与NC组和Scr-siRNA组比较,TPARM-siRNA转染组SW480细胞增殖明显减少(P<0.05),周期蛋白依赖性激酶(CDK)2、CDK4、CDK6的蛋白表达明显下降(P<0.05);SW480细胞凋亡水平明显增加(P<0.05),髓细胞白血病序列(Mcl)-1、B淋巴细胞瘤(Bcl)-xl及Bcl-2的蛋白表达水平明显下降,Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达明显升高(P<0.05);SW480细胞的侵袭和迁移能力被抑制。结论 TPARM可能通过使结直肠癌细胞增殖增加和凋亡减少及促进结肠癌细胞的侵袭和迁移能力,从而在结直肠癌发生发展中发挥作用。

贝母素乙通过下调CDK2/CDK4/CDK6和cyclin D1表达抑制人结肠腺癌SW480细胞活力

目的:探究贝母素乙(peiminine)对人结肠腺癌细胞(SW480)活力、迁移和侵袭的抑制作用并探讨其抑制SW480增殖的作用机制。方法:用不同剂量的贝母素乙处理人结肠腺癌细胞SW480和人正常结肠上皮细胞CCD-841CoN,通过CCK-8实验确定贝母素乙抑制SW480活力的最适剂量和最佳作用时间;划痕和Transwell实验检测贝母素乙对SW480迁移与侵袭能力的影响;流式细胞术和Western blot检测贝母素乙对SW480细胞周期及细胞周期相关蛋白表达的影响;构建SW480移植瘤裸鼠模型,在体内分析贝母素乙对SW480活力及细胞周期相关蛋白表达的影响。结果:与对照组相比,当贝母素乙作用浓度为110 mg/L时能够显著抑制SW480细胞活力、迁移和侵袭能力(P<0.01),并诱导SW480细胞周期G1期阻滞,周期相关蛋白细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)、CDK4、CDK6、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、p-Rb/Rb、E2F1、E2F3和E2F4的表达水平受到显著抑制(P<0.05);在体内,贝母素乙抑制SW480移植瘤的活力、延长荷瘤裸鼠的生存周期,影响肿瘤组织中CDK2、CDK4、CDK6和cyclin D1的表达。结论:贝母素乙通过下调CDK2、CDK4、CDK6和cyclin D1的表达,引起SW480细胞的G1期阻滞,进而抑制人结肠腺癌细胞SW480增殖。

NEDD4L增强IGF2BP2的泛素化对结直肠癌细胞SW620增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响

目的:探讨NEDD4L对人转移性结直肠癌细胞SW620迁移和侵袭的影响及其可能的作用机制。方法:生物信息学分析筛选IGF2BP2/NEDD4L泛素化作用轴并构建NEDD4L过表达的SW620细胞株,实时荧光定量(RT-qPCR)检测NEDD4L mRNA表达水平;CCK-8法和流式细胞术检测细胞增殖和凋亡;细胞划痕和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭,CHX和MG132处理SW620细胞,Western blot检测IGF2BP2蛋白的表达。同时构建Flag-IGF2BP2、His-NEDD4L、HA-Ub重组质粒并在293T细胞中采用免疫共沉淀检测NEDD4L对IGF2BP2的泛素化水平的影响。结果:SW620细胞中成功实现NEDD4L过表达,并且导致细胞增殖能力显著降低(P<0.05),凋亡能力显著上升(P<0.01);同时抑制细胞周期进程(P<0.05)。细胞迁移率显著降低(P<0.01),细胞侵袭数量显著降低(P<0.01);Western blot结果显示,过表达NEDD4L能够显著降低IGF2BP2、YAP、VEGFA的蛋白表达水平,Co-IP结果显示NEDD4L增强IGF2BP2与Ub的结合能力。结论:NEDD4L在结直肠癌细胞中通过增强IGF2BP2的泛素化,进而降低YAP、VEGFA的蛋白表达来实现抑癌功能。

低密度脂蛋白受体相关蛋白11在结直肠癌组织中的表达及其对SW480细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨低密度脂蛋白受体相关蛋白11(LRP11)在结直肠癌(CRC)组织中的表达及其对结肠癌SW480细胞增殖与凋亡的影响。方法:利用生物信息学方法分析TCGA数据库中LRP11在CRC组织中的表达水平。用慢病毒感染技术分别将sh-LRP11及sh-NC质粒转染至SW480细胞,采用qPCR、WB法检测感染后各组细胞中LRP11的mRNA和蛋白的表达,CCK-8法、流式细胞术分别检测细胞的增殖活力、凋亡率及细胞周期分布情况,WB法检测SW480细胞中cyclin D1、BAX、Bcl-2、β-catenin、活化β-catenin等蛋白的表达水平。结果:TCGA数据库数据分析显示,LRP11 mRNA在CRC组织中的表达水平显著高于正常组织(P<0.05)。与sh-NC组比较,sh-LRP11组SW480细胞的增殖活力明显降低、细胞凋亡率显著升高(均P<0.01),细胞中BAX表达显著升高、Bcl-2表达显著降低(均P<0.01);G0/G1期细胞增多、S期细胞明显减少(均P<0.01),cyclin D1的蛋白表达显著降低(P<0.01);Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin和活化β-catenin的蛋白表达均显著下降(均P<0.01)。结论:LRP11 mRNA在CRC组织中呈高表达,干扰LRP11表达可抑制结肠癌SW480细胞增殖并促进其凋亡,为CRC提供了一种潜在的治疗靶点。

PMS2通过ERK/ERCC1通路对结肠癌SW480细胞生物学行为的影响

目的:探讨减数分裂后分离蛋白2(PMS2)表达对结肠癌SW480细胞生物学行为的影响,阐明PMS2与切除修复交叉互补组1(ERCC1)和细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号转导通路的关系。方法:将PMS2 siRNA质粒和PMS2过表达质粒分别转染入结肠癌SW480细胞(分别为PMS2敲减组和PMS2过表达组),同时设PMS2敲减对照组(siRNA-NC组)和PMS2过表达对照组(PMS2 control组)。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组细胞中PMS2 mRNA表达水平,Western blotting法检测各组细胞中PMS2蛋白表达水平,CCK-8法检测各组细胞增殖活性,细胞划痕实验检测各组细胞迁移率,Transwell小室实验检测各组细胞中侵袭细胞数,流式细胞术检测顺铂作用后各组细胞凋亡率。通过String数据库,对PMS2、ERCC1和ERK上下游蛋白的关系进行生物信息学分析。SW480细胞分别采用3条siRNA进行PMS2和ERCC1敲减,采用RT-qPCR法验证PMS2与ERCC1的相互作用,采用Western blotting法检测各组细胞中PMS2、细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)和磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白表达水平。结果:RT-qPCR法和Western blotting法检测,PMS2基因敲减和过表达细胞模型构建成功。与siRNA-NC组比较,PMS2敲减组细胞增殖活性和细胞迁移率明显升高(P<0.05或P<0.01),侵袭细胞数明显增加(P<0.01),顺铂作用后细胞凋亡率明显降低(P<0.01);与PMS2 control组比较,PMS2过表达组细胞增殖活性和细胞迁移率明显降低(P<0.01),侵袭细胞数明显减少(P<0.01),顺铂作用后细胞凋亡率明显升高(P<0.01)。蛋白-蛋白互作(PPI)富集P值为2.09e-07,包含ERCC1和ERK1/2等相互作用节点数共有13个,提示PMS2、ERCC1和ERK1/2之间可能存在调控作用。与siRNA-NC组比较,各PMS2敲减组细胞中ERCC1 mRNA表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01);与siERCC1-NC组比较,各ERCC1敲减组细胞中PMS2 mRNA表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。与siRNA-NC组比较,PMS2敲减组细胞中PMS2、ERK1/2和p-ERK1/2蛋白表达水平均明显降低(P<0.05或P<0.01);与PMS2 control组比较,PMS2过表达组细胞中PMS2、ERK1/2和p-ERK1/2蛋白表达水平均明显升高(P<0.01)。结论:PMS2表达可影响结肠癌SW480细胞增殖、迁移、侵袭和抗凋亡能力。PMS2与ERCC1存在互相作用关系,并可通过调节ERCC1参与ERK信号转导通路。

银杏叶提取物对结肠癌患者SW480细胞增殖的影响

目的 分析银杏叶提取物对结肠癌患者SW480细胞增殖的影响。方法 选择2022年1—12月新疆五家渠第六师总医院的10份结肠癌标本为研究对象,并对SW480细胞标本进行体外培养,然后实施100、200、300、400、500 mg/L浓度的银杏叶提取物进行反应,并通过CCK-8对人结肠癌SW480细胞的增殖抑制率进行检测,对比干预不同浓度的干预效果。结果 空白对照组的吸光度为(1.125±0.139),100、200、300、400、500 mg/L浓度银杏叶提取物处理后的吸光度分别为(1.145±0.214)、(0.943±0.018)、(0.616±0.017)、(0.571±0.039)、(0.508±0.014),200、300、400、500 mg/L浓度时的吸光度与空白对照组比较,差异有统计学意义(t=4.106、11.474、12.135、13.966,P<0.05)。空白对照组的抑制率为(0.002±0.001)%,100、200、300、400、500 mg/L浓度银杏叶提取物处理后的抑制率分别为(3.020±0.124)%、(12.500±1.242)%、(40.000±4.252)%、(43.100±4.626)%、(45.200±4.252)%,分别与空白对照组比较,差异有统计学意义(t=76.963、31.821、29.747、29.461、33.614,P<0.05)。100、200、300、400、500 mg/L浓度银杏叶提取物处理后的活性氧(reactive oxygen species,ROS)、X连锁凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein, XIAP)mRNA表达水平与空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 银杏叶提取物可对结肠癌SW480细胞的增殖表现为浓度依赖性地抑制。

山慈菇提取物对人结直肠癌SW480细胞迁移和侵袭能力的影响及其分子机制

目的探讨山慈菇提取物对人结直肠癌SW480细胞迁移和侵袭能力的影响及其分子机制。方法选择人结直肠癌SW480细胞株,分为空白对照组,不同浓度山慈菇组(200 mg·L^(-1)、400 mg·L^(-1)),5-Fu组(10μmol·L^(-1)),分别进行划痕实验、细胞增殖抑制实验、细胞迁移与侵袭实验。同时,通过细胞转染技术沉默SW480细胞中的AEG-1基因,采用Western blotting检测AEG-1基因沉默对SW480细胞AEG-1、E-cadherin、MMP-2、MMP-9蛋白表达的影响,并观察不同浓度山慈菇组各蛋白表达的变化。结果不同浓度山慈菇组和5-Fu组SW480细胞的划痕愈合率、细胞迁移率及侵袭率均较空白对照组明显下降,而细胞生长增殖抑制率较空白对照组明显升高(P<0.05);山慈菇提取物具有与5-Fu相似的抑制结直肠癌细胞增殖和侵袭的效果,且与SW480细胞的迁移与侵袭率呈浓度依赖性,与细胞增殖抑制率呈浓度、时间依赖性;不同浓度山慈菇组和5-Fu组SW480细胞中AEG-1、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平均显著降低,E-cadherin蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。结论山慈菇提取物可能通过抑制AEG-1蛋白表达来上调E-cadherin蛋白表达,下调MMP-2、MMP-9蛋白表达,从而抑制人结直肠癌SW480细胞的迁移与侵袭。