蟾毒灵对人大肠癌HCT116细胞增殖的影响

目的研究蟾毒灵对人大肠癌HCT116细胞增殖及细胞周期的影响。方法采用MTT法观察不同浓度蟾毒灵对人大肠癌HCT116细胞增殖的抑制作用;透射电镜观察细胞形态及超微结构;流式细胞术分析细胞周期分布情况。结果蟾毒灵对大肠癌细胞生长抑制作用呈浓度-时间依赖性,蟾毒灵可将细胞周期阻滞于S期,透射电镜观察到典型的细胞凋亡特征。结论诱导大肠癌细胞周期S期阻滞可能是蟾毒灵抑制大肠癌细胞增殖的机制之一。

树舌荧光多糖的制备及其在人大肠癌细胞SWWC1116中的定位

应用胺化还原法在树舌灵芝液体深层发酵浸膏水提多糖(GAP)的还原性末端连接荧光基团(FITC),制备荧光标记GAP(FITC-GAP),并测定其荧光取代率为0.90%.利用xCELLigence RTCA DP全自动实时细胞分析仪检测GAP荧光标记,其前后的细胞毒活性不变.流式细胞仪和荧光显微镜对GAP在人大肠癌细胞SWWC1116定位结果表明,GAP可与人大肠癌细胞SWWC1116的细胞膜结合,并可转运至细胞核内.

粪便脱落细胞检测应用于大肠癌筛查的研究进展

我国大肠癌发病率呈逐年上升趋势,筛查可以有效降低其发病率和病死率。然而,目前常用的大肠癌筛查手段尚存在明显缺陷。粪便脱落细胞检测具有早期发现病变、无创、患者依从性好等优点,在大肠癌筛查上具有潜在的应用前景,本文就这方面研究进展作一综述。

双歧杆菌脂磷壁酸对不同大肠癌细胞株转移能力及VEGF表达的影响

目的研究双歧杆菌脂磷壁酸(lipoteichoic acid,LTA)对血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达及其对大肠癌细胞株侵袭、转移能力的影响。方法采用噻唑蓝比色(MTT)法检测经双歧杆菌LTA处理前后大肠癌细胞株LoVo和HT-29对人工基底膜(Matrigel)的黏附能力变化;Transwell小室体外侵袭迁移实验检测经LTA处理前后两株细胞侵袭、迁移能力的改变。RT-PCR和Western blot检测经LTA作用前后,VEGF在两株细胞中的表达差异。结果经20、50、80μg/ml双歧杆菌LTA处理后,LoVo细胞和HT-29细胞在30、60、90、120min时的黏附率明显低于对照组(P<0.01);经50μg/ml双歧杆菌LTA处理24h后,LoVo细胞和HT-29细胞的侵袭能力及VEGF的mRNA和蛋白质的表达,与对照组比较有显著性差异(P<0.01)。结论双歧杆菌LTA能抑制大肠癌细胞黏附、侵袭、迁移的能力,下调其VEGF的mRNA和蛋白质的表达。

蝎毒组分对人大肠癌细胞的体外抑杀作用研究

目的观察蝎毒不同组分对人大肠癌细胞的体外抑杀作用。方法 用噻唑蓝(MTT法)、集落形成抑制实验,以丝裂霉素C(MMC)为阳性对照药品,以蝎毒提取物SVC Ⅰ、SVC Ⅱ、SVC Ⅲ,SVC Ⅳ各组分、浓度分别为45μg/ml、60μg/ml、75μg/ml、90μg/ml处理人大肠癌细胞Lovo,观察Lovo的生长情况。结果 SVCⅢ对Lovo细胞的细胞毒性和集落形成的抑制作用略强于MMC组,SVC Ⅰ、SVC Ⅱ、SVC Ⅳ对细胞Lovo的影响在所用药物浓度内与对照组相比未见统计学差异,细胞毒性作用不显著。结论SVC Ⅲ对人大肠癌细胞具有明显的细胞毒性和生长抑制作用。

抑癌基因KAI1对大肠癌细胞生物学特性的影响

目的研究抑癌基因KAI1对大肠癌细胞生物学特性的影响。方法用KAI1 cDNA质粒转染低表达KAI1基因的人大肠癌LoVo细胞。免疫组化和原位杂交检测转染后mRNA和蛋白的表达,利用体外肿瘤同质性粘附、异质性粘附实验和肿瘤侵袭模型等方法,检测KAI1/CD82对大肠癌粘附与侵袭的影响;以空白质粒转染组为对照组。结果体外实验发现转染KAI1质粒的LoVo细胞同质性粘附能力高于对照组,异质性粘附及侵袭能力明显低于对照组。抑癌基因KAI1对肿瘤的增殖能力没有影响。结论KAI1基因表达的减少可以导致大肠癌细胞同质性粘附降低,对基底膜粘附及侵袭转移的能力增加。因此,KAI1基因可以作为大肠癌的一种转移抑制基因。

双歧杆菌对大肠癌细胞ccL_(187)cAMP、cGMP影响的实验研究

双歧杆菌对维持机体正常微生态平衡具有重要作用。本文研究了长双歧杆菌对大肠癌细胞ｃＬ１８７内第二信使ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ浓度的影响，对长双歧杆菌的对数期培养物分别进行下列处理：活菌、死菌、代谢产物作用ｃｃＬ１８７细胞２小时后分别收集ｃＬ１８７细胞内的ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ浓度。实验表明长双歧杆菌的不同状态及代谢产物对ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ产生显著影响，且存在时间依赖关系，三种处理作用ｃＬ１８７细胞内的ｃＡＭＰ值分别为１９２０５±１１５１ｎｍｏｌ／Ｌ、１３７０８±１００３ｎｍｏｌ／Ｌ、２８９８８±１２３ｎｍｏｌ／Ｌ，与对照相比表现出有意义的增高，ｃＧＭＰ浓度变化不明显。结果提示长双歧杆菌及其代谢产物参与ｃｃＬ１８７细胞内的信息传递过程，且具有一定的协同作用。植物血凝素（ＰＨＡ）对ｃＬ１８７细胞表面神经节苷脂的封闭显示ｃＡＭＰ的有意义变化，结果提示双歧杆菌对ｃｌ１８７细胞ｃＡＭＰ可能是通过作用于细胞神经节苷脂受体而发挥作用的。

大肠癌细胞辐射敏感相关基因的筛选

应用基因芯片技术初步筛选人大肠癌细胞辐射敏感相关基因。培养2种不同辐射敏感性的人大肠癌细胞LOVO和SW480,收集细胞至少达到107数量级,提取细胞总RNA,采用人全基因组表达谱芯片获得该两株细胞的基因表达谱,分析比较两者之间基因表达的差异。1、LOVO细胞组检出基因16882个,SW480细胞组检出基因17114个。2、在2倍以上差异表达基因中筛选出上调基因908个,下调基因1312个。上调基因中包括Fas基因、NFkB基因等,下调基因中包括Caspas6基因、RAD21基因等,已有研究证明与辐射敏感相关。3、LOVO细胞中高表达的基因主要有CEACAM5、THBS1、SERPINE2、ARL7、HPGD,提示与辐射敏感相关;SW480细胞中高表达的基因主要有SCD、NQ01、LYZ、KRT20、ATP1B1,提示与辐射抵抗有关。1、大肠癌辐射敏感性的预测可以从基因水平来体现。2、表达谱基因芯片技术能快速、灵敏地预测大肠癌辐射敏感性,筛选大肠癌辐射敏感性相关基因。

Sox2下游调控蛋白的筛选及其对大肠癌细胞增殖、迁移的影响

目的分析大肠癌细胞转录因子Sox2对大肠癌细胞增殖及迁移的影响。方法应用SDS-PAGE蛋白电泳,结合考马斯亮蓝及镀胺银染色方法,筛选差异蛋白。质谱分析筛选Sox2下游调控蛋白,应用定量PCR(QPCR)及Western blotting验证和鉴定下游调控蛋白。Cell Counting Kit-8(CCK8)观察Sox2对大肠癌细胞增殖的影响,Transwell实验观察Sox2对迁移能力的影响。结果应用蛋白组学技术成功筛选出Sox2下调蛋白S3a、上调蛋白ENO1、Gama-actin。QPCR和Western blotting显示,Sox2过表达后,大肠癌细胞S3a表达减少(P<0.005),ENO1表达增加(P<0.05),Gama-actin表达无明显差异,细胞增殖及迁移能力提高(P<0.05);Sox2干扰后,大肠癌细胞S3a表达增加(P<0.05),ENO1表达减少(P<0.001),Gama-actin表达无明显差异,细胞增殖及迁移能力下降(P<0.05)。结论 Sox2负向调控S3a的表达,正向调控ENO1的表达,促进大肠癌细胞增殖及迁移。

乌龙茶水提取物对人大肠癌LOVO细胞增殖及凋亡的影响

以赛珍珠5800铁观音为材料,测定乌龙茶中水浸出物、茶多酚、游离氨基酸、可溶性糖、黄酮类物质、没食子酸、8种儿茶素和3种生物碱的含量;并将0、0.2、0.4、0.6、0.8和1.0 mg·m L^(-1)乌龙茶水提取物作用于体外培养的人大肠癌LOVO细胞中,分别处理24和48 h后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖抑制率,并在倒置显微镜下观察细胞形态的变化;以0.6和0.8 mg·m L^(-1)乌龙茶水提取物处理LOVO细胞48 h,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率,扫描电镜下观察细胞凋亡情况.结果表明,乌龙茶中各化学成分的含量均较高,水浸出物含量达40.8%以上,茶多酚含量14.2%,游离氨基酸含量1.8%,可溶性糖含量6.9%,黄酮类物质含量0.7%,儿茶素总量12.2%,咖啡碱含量1.7%,这些成分为其品质保证和功效发挥奠定了一定的物质基础.MTT法试验结果表明:0.2 mg·m L^(-1)乌龙茶水提取物对LOVO细胞生长无抑制作用;处理24和48 h后,0.4~1.0 mg·m L^(-1)乌龙茶水提取物对LOVO细胞生长的抑制率分别达13.9%~79.6%和16.4%~89.2%.0.6和0.8mg·m L^(-1)乌龙茶水提取物处理下LOVO细胞凋亡率分别为60.4%和62.3%,且低含量下细胞凋亡主要呈早期凋亡形式.扫描电镜观察显示,0.6和0.8 mg·m L^(-1)乌龙茶水提取物处理48 h后LOVO细胞出现明显的凋亡现象,细胞体积缩小,细胞间隙增大,表面微绒毛断裂、减少甚至消失,细胞膜表面出现塌陷,产生类似空洞的结构等.因此,乌龙茶水提取物能有效抑制人大肠癌LOVO细胞增殖,并可诱导其凋亡的发生.

苦参碱对大肠癌细胞凋亡发生及Bad蛋白表达的影响

目的观察苦参碱(matrine)对体外大肠癌细胞凋亡发生及Bad蛋白表达的影响。方法大肠癌LOVO细胞株分为对照组和苦参碱不同浓度作用组,将终浓度分别为0.1、0.5、2.5g/L的苦参碱加入培养液中,观察大肠癌细胞形态学变化,测定各组苦参碱作用1、4、16h后的细胞活力(MTT法)、细胞凋亡率(流式细胞术)、Bad蛋白含量(免疫组化法和western blot法)。结果与对照组比较,苦参碱组出现细胞皱缩、脱壁、细胞漂浮及细胞破碎现象,细胞活力显著降低,细胞凋亡率增加,Bad蛋白表达增加,有明显的时间和浓度依赖关系。结论苦参碱能提高大肠癌细胞凋亡发生率和Bad蛋白的表达。

大肠癌细胞辐射敏感相关蛋白的初步筛选

人大肠癌细胞LOVO和SW480细胞具有不同的辐射敏感性。用直线加速器分别予以0、2、4、6 Gy X射线照射,然后运用SELDI-TOF蛋白质芯片技术测定照射后24 h细胞的蛋白质谱,分析两株细胞间在不同照射剂量后的蛋白质表达情况,通过Swiss-Prot数据库搜索初步筛选出可能与大肠癌细胞辐射敏感性相关的几种蛋白:GADD45B、Thioredoxin、Metallothionein 1(MT1)。结果表明:大肠癌辐射敏感性的预测能够从蛋白质水平来体现,而SELDI-TOF蛋白质芯片技术可从蛋白质水平预测人大肠癌细胞辐射敏感性,为临床大肠癌患者的个体化放疗提供选择依据。

荧光原位杂交技术预测人大肠癌细胞内在放射敏感性的实验研究

探讨荧光原位杂交技术预测人大肠癌细胞内在放射敏感性的可行性。应用荧光原位杂交技术检测人大肠癌动物模型照射后癌细胞2号染色体易位畸变并分析其与照射后肿瘤生长曲线的相关性。结果表明,放疗使Lovo移植瘤的增长明显延缓,Lovo细胞的放射敏感性高于SW480细胞。X射线照射后肿瘤荧光原位杂交技术检测结果显示:Lovo细胞的2号染色体诱导易位畸变量显著大于SW480细胞(p<0.05)。荧光原位杂交技术能快捷、可靠地预测人大肠癌细胞的放射敏感性,从而为临床大肠癌病人放疗的选择提供重要参考依据。

大肠癌细胞的原代培养方法

目的:探讨大肠癌细胞体外分离培养方法,建立合理、高效、稳定的短期大肠癌细胞原代培养模式。方法:取60例大肠癌(T3或T4,且CT示肿瘤直径>2.0 cm)的新鲜肿瘤组织,随机分为黏膜层取材组与浆膜层取材租,分别采用组织块法、机械分离法、胰酶消化法、胶原酶消化法进行体外培养大肠癌细胞,对不同方法及培养条件进行比较并加以改进。结果:黏膜层取材组优于浆膜层取材组(P<0.05),胶原酶消化法优于胰酶消化法(P<0.05),胰酶消化法优于机械分离法(P<0.05),胶原酶消化法是最优的人类大肠癌细胞原代培养方法,细胞培养成功率达到66.7%。结论:通过黏膜层取材的胶原酶消化法可成功建立较为合理、高效、稳定的短期大肠癌细胞原代培养模式。

正常大肠干细胞的条件永生化

目的 :建立正常人大肠干细胞系。方法 :用中性蛋白酶分级分离法从人胚肠中分离正常大肠干细胞 ,以含端粒酶逆转录酶和 SV4 0大 T抗原的重组逆转录病毒感染 ,对其进行永生化 ;然后 ,对建立的正常大肠干细胞系进行生物学特性鉴定。结果 :用中性蛋白酶分级消化获得的 AKP活性阴性的细胞群生长呈多角形。该细胞群转染含端粒酶逆转录酶和 SV4 0大 T抗原的重组逆转录病毒后 8～ 12周出现上皮样细胞克隆 ,经细胞特性鉴定 :PAS染色黏蛋白阳性 ,上皮细胞角蛋白 pan、CK- 8、CK- 19均阳性 ;用 EL ISA- PCR法检测该细胞第 12代和第 4 3代端粒酶活性 ,分别为 0 .4 3、0 .83;用 Western blot法检测发现该细胞系表达端粒酶和 SV4 0大 T抗原 ;用 RT- PCR检测示该细胞株表达 Musashi- 1m RNA;以 1× 10 6细胞数接种裸鼠 ,观察 4个月无肿瘤形成 ,软琼脂克隆试验培养无转化细胞克隆出现。结论 :建立的正常的大肠干细胞系具有干细胞特征 ,可作为体外研究致癌剂

氧化应激对大肠癌细胞迁移、血管内皮生长因子表达及细胞间通信的影响

目的探讨氧化应激对大肠癌细胞迁移能力、血管内皮细胞生长因子表达及细胞间通信的影响。方法使用H2O2模拟大肠腔内氧化应激环境,通过不同浓度H2O2刺激人结肠癌细胞HCT-8,使癌细胞处于氧化应激状态,通过Transwell小室观察大肠癌细胞迁移能力;利用免疫细胞化学观察VEGF表达;利用划痕染料传输试验LY/DT法测定细胞间通信连接,最后利用Western blot进一步检测细胞间通信连接蛋白(Connexin 43)的表达。结果当H2O2浓度≤10-5 mol/L时,不同程度地促进细胞的迁移,上调结肠癌细胞HCT-8 VEGF的表达,抑制细胞间通信;当H2O2浓度为10-5 mol/L时,明显促进细胞的迁移(t=2.247,P<0.05),上调结肠癌细胞HCT-8 VEGF的表达(Z=3.938,P=0.000),抑制细胞间通信(Z=3.860,P=0.000)。结论大肠癌细胞在过氧化物刺激的情况下,促进细胞迁移,诱导血管内皮生长,抑制细胞间通信,在大肠肿瘤的进展中可能具有促进作用。

大黄素通过ROS介导大肠癌细胞株LOVO凋亡的实验研究

目的观察大黄素对人大肠癌细胞株LOVO凋亡的影响,并探讨活性氧(ROS)是否介导了大黄素诱导细胞凋亡的过程。方法体外分组培养人大肠癌细胞株LOVO,设空白对照组和大黄素3个不同浓度干预组(40,80,120μmol.L-)1,大黄素干预时间分别为12,24,48 h。以四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖率、AnnexinⅤ-FITC和PI双染流式细胞术检测凋亡,激光扫描共聚焦显微镜检测细胞内ROS水平,Western印迹法检测caspase-3表达。结果与空白对照组比较,大黄素干预组呈浓度依赖性诱导大肠癌细胞株LOVO凋亡,细胞内ROS水平明显增加,caspase-3的表达明显上调,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论大黄素通过ROS介导线粒体凋亡信号通路诱导大肠癌细胞凋亡,可能是大肠癌细胞凋亡诱导途径之一。

X线照射对大肠癌细胞株Lovo细胞TNFR-p55表达及释放的影响

目的研究X线照射在体外培养人大肠癌细胞株LoVo后,其膜TNFR-p55表达及释放sTNFR-p55情况。方法免疫细胞化学检测细胞膜TNFR-p55蛋白的表达,ELISA法检测培养上清中sTNFR-p55水平,流式细胞仪分析细胞凋亡率,光镜观察细胞形态变化。结果X线照射后的细胞膜TNFR-p55蛋白表达显著增强(P<0.01);照射后大肠癌Lovo细胞上清sTNFRR-p55水平显著低于照射前sTNFRR-p55水平(P<0.01);光镜发现细胞体积缩小、变圆、胞浆浓缩、核固缩深染;流式细胞仪分析细胞凋亡率显著增高(P<0.05)。结论X线可通过上调细胞膜TNFR-p55蛋白的表达,抑制其脱落释放sTNFRR-p55到上清中,诱导细胞凋亡增强照射肿瘤的杀伤作用。

人γ-干扰素基因导入人大肠癌细胞中的方法及鉴定

目的：为将人γ－干扰素（ｈｕＩＦＮ－γ）基因尽快用于临床基因治疗，寻求基因导入的有效方法。方法：利用阳离子脂质体Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ将ｈｕＩＦＮ－γ基因导入人大肠癌细胞株，利用ＰＣＲ、ＲＴ－ＰＣＲ对该基因的整合和表达进行鉴定，并对细胞培养上清中γ－干扰素的活性进行了检测。结果：该基因已经有效地进入细胞内并实现了表达。结论：利用脂质体可以有效地将ｈｕＩＦＮ－γ基因导入肿瘤细胞内，基因表达的持续时间可以满足肿瘤基因治疗的需要。不同细胞株其上清中ｈｕＩＦＮ－γ的分泌量不同。