酶底物光谱法与酶底物法检测水中大肠菌群的比较分析

采用新型酶底物光谱法和酶底物法对不同类型水样中总大肠菌群、大肠埃希氏菌及粪大肠菌群指标进行同步检测。两种方法各有优势,采用SPSS软件对检测结果处理后进行配对t检验,结果显示:两组总大肠菌群的数据P=0.057,相关系数r=0.904;两组大肠埃希氏菌的数据P=0.593,相关系数r=0.972;两组粪大肠菌群的数据P=0.136,相关系数r=0.986,表明两种检测方法具有相关性,且没有统计学意义上的显著性差异。采用酶底物光谱法检测有证质控样品,总大肠菌群、大肠埃希氏菌、粪大肠菌群的检测结果均在质控样真值范围内,证明该方法检测准确度符合要求。酶底物光谱法与酶底物法相比,反应原理类似,操作更加简便,具有仪器自动化和智能化快速检测、判读、存储、联网传输数据等优点,可满足实验室常规检测需求,在应急突发事件现场检测方面有较强的运用前景和优势。

乳糖胆盐体系大肠菌群测试片的研制及性能验证

该文以结晶紫中性红胆盐培养基(violet red bile agar,VRBA)组分为体系基础,通过筛选凝胶,正交试验优化凝胶、乳糖与胆盐添加量,以及添加乳糖发酵诱导剂,进行了大肠菌群测试片的研制。研究表明,使用卡拉胶代替琼脂作为载体,将卡拉胶、乳糖与胆盐的添加量分别优化为15、10、1.2 g/L,同时添加250 mg/L乳酰基-N脂酰基鞘氨醇作为乳糖发酵诱导剂,大肠菌群测试片的理化与微生物性能达到最优。测试片性能符合国标方法对VRBA培养基的控制要求;与国标大肠菌群平板计数方法相比,测试片方法在实际样本的检测结果无明显差异的同时,将检测周期缩短了24 h,结果观察更为直观,提升了对弱产气型目标菌的检测能力。该文所研制的大肠菌群测试片便捷快速准确,可适用于食品检测,并可为商业化测试片的研制提供借鉴意义。

松花江干流粪大肠菌群时空变化研究

粪大肠菌群普遍存在于人类和温血动物的粪便中,在水环境和水处理过程中与病原体具有相似的稳定性,水质监测中一般选择粪大肠菌群来表征水体微生物安全状况。对2012年-2019年松花江干流开展粪大肠菌群分布特征的研究,结果表明,粪大肠菌群的数量在2.0×10^(2)~2.4×10^(5)MPN/L之间,月达标率69.1%,2012年-2018年达标率呈现上升趋势,2019年略有下降。各断面年际变化规律不一致,总体上2018年和2019年粪大肠菌群数量明显下降。不同水期数量变化规律不同,沿程数量变化呈现“M”型,表现出粪大肠菌群指标受城市生活污水影响明显。存在一定的季节因素影响,自然衰减不明显,人为因素是污染主要原因。2018年后微生物安全基本得到保证,水体的卫生学状况明显改善。

酶底物法测定污泥中粪大肠菌群的方法研究及比对

为了提高污泥微生物学指标粪大肠菌群的检测效率,验证采用酶底物法检测该指标的可行性及适应性,开展方法研究及比对试验。采用酶底物法和多管发酵法对污泥中粪大肠菌群进行同步测定,检测结果采用SPSS软件进行数据处理及配对t检验,全国6家实验室201组比对结果显示:两组数据P=0.141(>0.05),相关系数r=0.964,表明两种检测方法相关性较好,没有统计学意义上的显著性差异,具有一致性。3家实验室的6个实验组分别对低、中、高三个浓度的实际样品以及有证标准物质配制的样品进行了6次重复测定:实验室内相对标准偏差范围分别为4.5%~13.7%、1.6%~6.7%、1.4%~3.6%和1.1%~4.5%;实验室间相对标准偏差分别为8.7%、5.2%、5.3%、3.1%;重复性限依次为0.44、0.39、0.43和0.27;再现性限依次为0.44、0.49、0.81和0.31;实验室内的相对误差范围为0.91%~2.8%;相对误差最终值为1.9%±1.5%。通过试验验证,酶底物法测定污泥中粪大肠菌群的方法精密度、准确度符合要求,确认方法检出限为10MPN/g。多管发酵法、滤膜法分别是现行检测污泥中粪大肠菌群的国标方法和行标方法,酶底物法与前两者相比,具有操作简单、准确度高、不需要确证试验、检测效率高等特点。酶底物法可作为测定污泥中粪大肠菌群指标的补充方法。

MALDI-TOF MS分析大肠菌群不合格餐(饮)具中的微生物污染情况

为了解餐(饮)具中大肠菌群污染情况及被污染的餐(饮)具是否有致病风险,对大肠菌群项目不合格餐(饮)具中的微生物进行菌种鉴定。将餐(饮)具复发酵阳性的培养物转接伊红美蓝琼脂平板进行分离,利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术对28批不合格餐具中分离到的62株野生菌株的单个菌落进行精确鉴定,鉴定率为93.55%,鉴定结果均与自动微生物生化鉴定仪鉴定结果一致。主要鉴定出阪崎克罗诺杆菌、丙二酸盐克罗诺杆菌、大肠埃希氏菌、肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌、弗氏柠檬酸杆菌、阴沟肠杆菌等10种微生物。其中存在致病风险的微生物比例达68.97%,而28批次不合格餐(饮)具中存在致病风险的达26批次,占比92.86%。MALDI-TOF MS技术能同时且快速准确地鉴定出餐(饮)具中存在的不同微生物,而大肠菌群不合格餐(饮)具存在较高的致病风险,需加强餐(饮)具卫生管理与监测。

水中粪大肠菌群四种监测方法的对比分析

粪大肠菌群作为一项能够反映水质卫生安全程度的因子,已成为水体污染评价的重要指标。目前,国内环境监测领域主流的测定方法有多管发酵法、纸片快速法、酶底物法和滤膜法4种。从原理、阳性判别方式、适用范围、检出限、方法特点和干扰因素等方面对上述4种方法进行对比论述,表明了4种方法所具有的特性,总结了实际工作中应当因地制宜选择合适的测定方法,有助于提升监测质量、提高工作效率。

水中粪大肠菌群的测定——多管发酵法与酶底物法的比较

采用多管发酵法和酶底物法,同步测定30个平行样品中的粪大肠菌群。比较数据结果表明,2种方法测定的实验结果具有相关性,且在统计学上没有显著差异。多管发酵法虽作为经典的粪大肠菌群检测方法,需要的试剂和器材比较多,分析步骤多,检测周期长,样品检测结果的相对偏差明显高于酶底物法。酶底物法检测周期短,操作方便,对试验环境条件要求低,弥补了多管发酵法的不足能更好满足环境监测要求。

多管法测定地表水中粪大肠菌群的测量不确定度评定方法研究

依据《水质粪大肠菌群的测定多管发酵法》(HJ 347.2—2018),研究了地表水中粪大肠菌群的测量不确定度,主要对培养基称量和溶液的量取、水样取样稀释以及两种浓度水样重复性检测引起的不确定度进行量化分析。通过本研究得出A类评定的不确定度为粪大肠菌群测量的不确定度的主要来源。不确定度的分析能有效掌握检测结果的可信程度和准确性,建立的不确定度评定方法,适用于类似粪大肠菌群检测的不确定度评定。

不同废水中活性氯与粪大肠菌群的相关性研究

活性氯具有特定的氧化性,能使微生物细胞内酶活性降低,导致细胞失活,从而使微生物死亡;在疫情期间,大量使用含氯消毒剂杀毒,对生态环境有着一定的影响,本文选取疫情期间废水中粪大肠菌群和总余氯含量为代表,直接测定了不同水样中所含粪大肠菌群以及使用哈希DR300便携式快速测定仪测定个水样中总余氯的含量,得到了废水中总余氯含量与粪大肠菌群具有一定的线性相关性。

测试片法检测食品中大肠菌群的验证评价

为探究大肠菌群测试片法在食品检测中的可行性,依据国际标准ISO 16140-2:2016中的性能指标验证要求,对MicroFast^(®)大肠菌群测试片法进行包容性、排他性,以及与国家标准《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数》(GB 4789.3—2016)中方法的一致性验证,采用t-检验和Bland-Altman分析方法进行一致性分析评价。16株目标菌在测试片上形成典型菌落,24株非目标菌中的23株均未在测试片上形成菌落,阿巴特图巴沙门氏菌ATCC 35640在测试片上形成非典型菌落。测试片法和GB 4789.3—2016中方法的检测结果呈正相关(R^(2)>0.976);95%置信区间的样品比例为1∶25,满足不得高于1∶20的要求;所有食品类型的β-期望容忍区间(β-ETI)均在±0.5对数单位范围内,测试片法和GB 4789.3—2016方法具有很好的一致性。MicroFast^(®)大肠菌群测试片法对纯菌株的包容性和排他性良好,在一致性方面符合ISO 16140-2:2016对方法等效性的要求,可作为替代方法,用于检测食品中的大肠菌群。

多管发酵法测定水中粪大肠菌群方法验证及注意的问题

水质粪大肠菌群是水体受人畜粪便污染的最直接指标。本文对多管发酵法测定水中粪大肠菌群中样品采集、样品保存、质量保证和质量控制措施、废物处理等内容进行探讨,并对HJ 347.2—2018方法进行验证,方法的空白对照、阴阳菌株对照、准确度和精密度结果均符合方法要求。

对生活饮用水细菌总数、总大肠菌群的检测

为了提高生活饮用水细菌总数检测和总大肠菌群生化鉴别水平,并顺利通过中国国家认证认可监督管理委员会组织的能力验证考核,上海建科检验微生物实验室从人、机、料、法、环、测几个方面着手,制定了相应的检测实施方案。不同的检测员根据考核盲样各自独立操作,并在细菌总数结果统计时进行互相验证计数;在总大肠菌群生化鉴别时,使用两种不同的生化试验来验证。实践证明:采用此方案能够准确检测生活饮用水细菌总数和总大肠菌群,并达到能力验证考核要求。

水中总大肠菌群滤膜检测法影响因素

总大肠菌群作为水体受粪便污染的指示菌,其检出情况可以反映水体被粪便污染的程度,是评价饮用水水质安全的重要指标。滤膜法操作简便、价格相对较低,是检测总大肠菌群的常用方法。本文依照《生活饮用水标准检验方法》(GB 5750.12—2023)总大肠菌群滤膜法进行检测,探讨了检测试剂和耗材对总大肠菌群培养效果的影响。结果发现使用品牌C培养基和混合纤维素滤膜可以获得菌落形态清晰、计数结果较好的结果,杭州某品牌的滤膜检测结果有较好的稳定性。对比后选择品牌C培养基、孔径为0.45μm的杭州某品牌混合纤维素滤膜进行检测,实际样品加标回收率在90.0%~107.5%,适用于总大肠菌群的检测,可以获得易于观察、准确可靠的检测结果。

固定酶底物法测定水中粪大肠菌群的优点及影响因素分析

固定酶底物法是一种常用的检测水中粪大肠菌群的方法,其优点包括操作简便、检测灵敏度高、结果可靠等。然而,该方法的准确性和稳定性受到多种因素的影响,如底物浓度、酶反应条件、水样处理等。为了进一步提高该方法的检测准确性和稳定性,研究人员可以从优化底物选择、优化反应条件、优化水样处理等方面进行探索。介绍了固定酶底物法测定水中粪大肠菌群的基本概念和研究背景,重点探讨了该方法的优点和影响因素。通过优化底物选择、反应条件和水样处理等方面的研究,进一步提高该方法的准确性和稳定性,有助于更好地应用固定酶底物法来监测水质,保障公共卫生安全。

矿泉水中大肠菌群检测能力验证结果及分析

能力验证活动是评价检测技术能力的一项重要依据。通过参加ACAS-PT1625(2023)矿泉水中大肠菌群的检测能力验证,对检验过程的关键环节进行质量控制分析,利用能力验证结果有效评价实验室检测人员的技术能力,保证试验结果的准确性和可靠性,提升实验室检测能力。

水质样品的色度对酶底物法测定总大肠菌群、粪大肠菌群的影响

为了评估水质样品的色度变化对总大肠菌群和粪大肠菌群测定的影响,采用酶底物法对5个色度样品进行检测分析。结果表明:在接种总大肠菌群数或粪大肠菌群一致的情况下,随着样品色度的增加,阳性反应的可判读阳性孔数逐渐减少,最终色度达到128倍或64倍时阳性孔数开始无法判读;另外,以色度0样品的总大肠菌群或粪大肠菌群测定值为参比,色度1样品的总大肠菌群或粪大肠菌群测定值与其无显著性差异,其余3个样品(色度2、色度3和色度4)的总大肠菌群或粪大肠菌群测定值变化均较大且差异极显著。综上所述,水质样品色度变化会影响酶底物法阳性孔数判读,从而在一定程度上降低其测定有色水质样品总大肠菌群和粪大肠菌群结果的准确性和可靠性。

平板显色法同时计数生乳中的大肠菌群和菌落总数

为提高大肠菌群和菌落总数的计数效率,选用2-硝基苯基-β-D-吡喃半乳糖苷作为平板培养基中的显色底物,利用大肠菌群lacZ基因编码的β-半乳糖苷酶将其分解产生黄色化合物,使得大肠菌群菌落区分于其他菌株,实现大肠菌群和菌落总数的同时计数,优化该培养基配方,评估培养基的特异性、准确性以及在生乳中的应用效果。最终确定该培养基配方:胰蛋白胨12.5 g/L、酵母浸粉2.5 g/L、磷酸氢二钾2.75 g/L、磷酸二氢钾1.75 g/L、氯化钠5.0 g/L、琼脂15.0 g/L,2-硝基苯基-β-D-吡喃半乳糖苷0.1 g/L,pH值为7.0。在此基础上,添加0.05 g/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷或2.0 g/L乳糖均能够增强菌落显色效果,而葡萄糖则会抑制黄色化合物生成。特异性实验中,仅大肠菌群菌落颜色呈黄橙色,其他菌株则呈乳白色。在生乳样本中,该培养基与国标方法对于大肠菌群和菌落总数的计数结果基本一致。因此,该复合显色培养基能够大大提高大肠菌群和菌落总数的计数效率,降低检测成本,为生乳的卫生指标检测提供一种可行方案。

酶底物法检测水中总大肠菌群影响因素的探讨

采用酶底物法测定水中总大肠菌群。通过正交实验从样品放置室温时间、培养温度、培养时间和稀释用水等方面探讨酶底物法测定水中总大肠菌群的各种因素的影响。实验表明样品放置室温时间对水中总大肠菌群的测定的影响因素最大,第二为培养温度,第三为培养时间,影响最低的为稀释用水。酶底物法测定水中总大肠菌群的条件为:室温放置时间在20~23 min,培养温度在35.0~38.0℃,培养时间在24~28 h,采用稀释溶液(爱德士公司)、灭菌生理盐水(自配)来稀释样品。

不同标准菌株对原料乳大肠菌群检验用培养基验收差异分析

为保证原料乳质量,丰富检测原料乳中大肠菌群涉及到的培养基的验收质控菌株,采用GB 4789.28—2013《食品安全国家标准 食品微生物学检验 培养基和试剂的质量要求》中规定的验收方法,分别选取3个品牌的结晶紫中性红胆盐琼脂(violet red bile agar,VRBA)、结晶紫中性红胆盐-4-甲基伞形酮-β-D-葡萄糖苷琼脂(violet red bile agar with MUG,VRBA-MUG)、月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤(lauryl tryptose broth,LST)和煌绿乳糖胆盐肉汤(brilliant green lactose bile broth,BGLB),对其进行外观、pH值、水分含量等物理指标以及生长率、选择性等微生物指标实验评价。同时以弗式柠檬酸杆菌ATCC 43864为参照,选取7株弗式柠檬酸杆菌对3个品牌的VRBA、VRBA-MUG、LST和BGLB进行验收实验评价。结果表明:3个品牌的不同培养基干粉颜色均正常,水分含量均控制在5%~6%,pH值均符合国家标准;7株弗氏柠檬酸杆菌在3个品牌VRBA、VRBA-MUG上的生长率均大于0.7;仅CMCC 48098和CICC 22910在3个品牌的LST、BGLB中浊度达到2,且导管内产生气体,与ATCC 43864结果相同。综上,3个品牌的VRBA、VRBA-MUG、LST和BGLB全部符合GB 4789.28—2013,推荐CMCC 48098和CICC22910用作验收4个培养基质控菌株的补充菌株。

食品微生物学检验中大肠菌群MPN计数法的应用与准确性分析

本文借鉴国家标准GB 4789.3—2016中第一法MPN计数法,分析其在食品微生物学检验中的应用和准确性,并提出提高大肠菌群MPN计数法准确性的建议,旨在提升食品微生物学检验的精确性和可靠性,进一步保障人们的健康安全。