质子磁共振波谱对大白鼠大脑中动脉线栓模型的连续观察

目的 用氢质子磁共振波谱 (1 HMRS)结合扩散加权成像连续观察大白鼠大脑中动脉线栓 (MCAO)模型2 4h内代谢物的变化规律 ,探讨1 HMRS对脑缺血性损伤和缺血再灌注后脑恢复程度的敏感性。材料与方法 共 2 9只Wistar成年鼠 ,4 .7T超导磁共振仪扫描。术前先取其中 8只作为正常组扫描 ;再将这 2 9只随机分为对照组 (只结扎左侧颈总动脉和颈外动脉 ) 7只 ,永久性大脑中动脉栓塞组 7只 ,缺血 30min再灌组 5只 ,缺血 1h再灌组 5只 ,缺血 2h再灌组 5只。检查完成后取栓塞组和再灌组的鼠脑四氮唑 (TTC)染色。结果 (1 )在正常组 ,双侧代谢物分布对称 ,胆碱类复合物 (Cho) /肌酸和磷酸肌酸 (CrandPCr)、N 乙酰天门冬氨酸 (NAA) /Cr没有明显的差异 (P >0 .0 5 ) ;在对照组 ,双侧Cho/Cr、NAA/Cr也无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ,没有检测到乳酸 (Lac)。 (2 )本实验最早观察到MCAO后 2 2min兴趣区内出现Lac ,DWI为高信号 ,ADC值下降。缺血 2 4h内Lac持续升高 ,以 0 .5hLac水平为基数 ,6h内升高最快 ,增加了 1 .2倍 ;1 2h内增加到 1 .6 2倍 ;2 4h后为 1 .4 7倍 ,稍显降低。相反 ,NAA呈持续下降 ,0 .5～ 1h内变化不明显 ,1 .5± 0 .2h观测到NAA下降 ;2h内下降 (2 3.6± 1 3.1 ) % ;1 2h内下降 (6 8.2± 2 1 .9) % ;2

大脑中动脉线栓法脑缺血模型制作的改进及经验探讨

目前局灶性脑缺血动物模型最常用的方法是大脑中动脉线栓法(MCAO),但该方法仍存在技术要求高、模型差异性大、动物死亡率高等缺陷。因此,如何建立稳定、可靠、重复性高的MCAO动物模型成为我们亟需解决的问题。从实验动物、麻醉药物、栓线的选择,手术流程、术后护理等多个方面进行探讨,以期提高MCAO脑缺血动物模型的成功率。

大川芎丸对大鼠缺血脑组织中血管内皮细胞生长因子的影响

目的研究大川芎丸对大鼠缺血脑组织中血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达的影响。方法采用大鼠大脑中动脉缺血(MCAO)模型,将20只SD大鼠随机分成治疗组和对照组,每组各10只,分别于术后每天予以大川芎丸提取物4.13g/kg或相应剂量生理盐水灌胃给药,72h后行神经功能评分后处死,取脑组织作免疫组化染色检测VEGF蛋白表达变化。结果大川芎丸治疗组神经功能评分(1.5±0.71)低于对照组(2.3±0.82),差异有统计学意义(P=0.032);大川芎丸治疗组VEGF表达(19.13±1.52)高于对照组(14.83±0.94),差异有统计学意义(P=0.000)。结论中药大川芎丸可上调大鼠缺血脑组织中VEGF表达,并可能通过此机制起到保护作用。

线栓法致大鼠MCAO/IR模型缺血/再灌注时间与发病机制研究进展

线栓法致大鼠大脑中动脉线栓/缺血再灌注模型是研究缺血性脑损伤最常用的动物模型。近年来,对线栓法致大鼠大脑中动脉线栓/缺血再灌注(MCAO/IR)模型的应用和研究颇多,本文拟对该模型研究中缺血/再灌注时间与部分发病机制之间的相关性及指标的动态变化进行综述,旨在为临床药物研究中缺血与再灌注时间的选择及评价指标选择提供参考,也为今后该动物模型的研究提供一定的线索。

建立大鼠大脑中动脉线栓模型的三组改良方法比较

目的 比较3种不同大脑中动脉线栓改良方法制作大鼠局灶性脑缺血模型的效果.方法 将60只雄性SD大鼠随机分为A、B、C组,每组20只.对3组大鼠采用不同线栓插入方法建立大脑中动脉线栓模型.分别检测3组大鼠的模型制作成功率、术后72 h内死亡率、平均手术时间及插入线栓所需时间.观察术后72 h存活的成功模型大鼠脑组织的病理改变.结果 C组大鼠术后72 h内死亡率为5％、平均手术时间为（18.20±0.99） min,插入线栓所需时间为（3.05±0.23） min,均低于A、B组（P＜0.05）.3组成功模型大鼠脑组织均显示有明确脑梗死病理改变.结论 C组大鼠所用的改良手术方法能明显降低手术难度,缩短手术时间,可更加快速、有效的制作大鼠局灶性脑缺血模型.

骨髓间充质干细胞移植对大鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用

目的 探讨骨髓间充质干细胞（BMSCs）移植对大鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用,并探讨其可能的机制。方法 经体外培养并纯化BMSCs,移植前以10 mg/L的Brd U进行标记。线栓法制作大鼠MCAO模型,随机分为移植A组、B组及对照C组。在模型建立后7 d,通过尾静脉分别将3×10^6个BMSCs、1×10^6个BMSCs移植入A、B组大鼠体内,C组不作处理。于移植前、后分别进行改良神经损伤严重程度评分（m NSS）及Morris水迷宫测试,并取大鼠脑组织行免疫组织化学染色。结果 移植A组与移植B组、C组比较,行为学恢复更为明显,（P〈0.01）;B、C两组相比无显著性差异（P〉0.05）;移植A组大鼠学习和记忆能力较C组明显改善（P〈0.05）。A、B组大鼠在脑损伤中心及周围区,可见Brdu单染阳性细胞及Brdu＋MAP-2、Brdu＋GFAP、Brdu＋v WF、Brdu＋VEGF双染阳性细胞。结论 BMSCs经尾静脉移植至MCAO大鼠体内后,可在大鼠体内存活、分化,并促进大鼠伸进功能恢复。疗效与移植细胞数量相关。

丁基苯酞对大鼠缺血脑组织NGF及BDNF表达的影响

目的研究丁基苯酞对大鼠缺血脑组织中脑源性神经生长因子(BDNF)和神经生长因子(NGF)表达的影响。方法健康雄性SD大鼠,用大鼠大脑中动脉线栓法(MCAO)建立永久性缺血模型,按照Zea-Longa的方法对动物的神经功能进行评分,选取1～3分的大鼠按随机数字表随机分成2组:丁基苯酞治疗组(A组),大脑中动脉永久缺血对照组(B组),每组各20只。A组于术后予以丁基苯酞,每天2次,每次25mg/kg,B组给予相应剂量食用油灌胃给药,72h后行神经功能评分,然后处死,分别取脑梗死周围、海马区和梗死区脑组织作免疫组化染色检测BDNF、NGF蛋白表达变化,原位杂交检测BDNF mRNA、NGF mRNA的表达。结果丁基苯酞治疗组神经功能评分(1.35±0.81)低于对照组(1.75±0.55),差异有统计学意义(P=0.04)。丁基苯酞治疗组BDNF和NGF蛋白BDNF mRNA和NGF mRNA在梗死区周围和海马区表达均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),在梗死区差异均无统计学意义(P>0.05)。结论丁基苯酞可上调大鼠梗死区周围和海马区缺血脑组织中BDNF和NGF的表达,并可能通过此机制起到保护作用。

大川芎丸对大鼠脑缺血的保护作用

目的 研究大川芎丸对大鼠脑缺血的保护作用。方法 采用大鼠大脑中动脉缺血 (MCAO)模型 ,将2 0只 SD大鼠随机分成治疗组和对照组 ,每组各 10只 ,分别于术后每天予以大川芎丸提取物 4 .13g/kg或相应剂量生理盐水 ,72 h后参照 L onga法行神经功能评分后处死 ,取脑组织作石蜡切片行 HE染色 ,计算脑体梗死积比。结果 大川芎丸治疗组神经功能评分 (1.5± 0 .71)低于对照组 (2 .3± 0 .82 ) ,差异有显著性 (P=0 .0 32 )。大川芎丸治疗组梗死体积比 (10 .81± 1.6 0 )与对照组 (17.82± 1.4 8)相比较 ,脑梗塞体积比明显减少 ,差异有显著性 (P=0 .0 0 0 )。结论 中药大川芎丸对大鼠脑缺血有保护作用。

弱氦-氖激光血管内照射对缺血再灌注大鼠脑组织血管内皮生长因子表达的影响

目的探讨弱氦-氖激光血管内照射对大鼠脑缺血再灌注后血管内皮生长因子表达的影响。方法采用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型，选取Zea—Longa法评分为1～3分的雄性SD大鼠40只，随机分成实验组和对照组，每组各20只。再灌注后2h实验组予以弱氦-氖激光血管内照射，照射时间20min，隔日1次，3次为1疗程；对照组同样予以静脉穿刺，但无激光输出。第6d疗程结束后，行为评分后处死大鼠，脑组织包埋、切片，HE染色，测定脑梗死体积比，采用免疫组化SP法检测血管内皮生长因子表达变化。结果治疗后实验组行为评分低于对照组[（1．40±1．05） vs （2．70±1．08），P=0．OOO]；实验组脑梗死体积比低于对照组[（7．67±1．73）％ vs （11．36±1．68）％，P=0．OOO]；实验组梗死周边血管内皮生长因子表达较对照组增加[IOD值（8．18±1．29） vs （18．62±1．55），P=0．000]。结论弱氦-氖激光血管内照射能明显上调脑缺血再灌注周边区血管内皮生长因子的表达，减轻大鼠大脑中动脉缺血再灌注脑损伤和神经功能缺损。这可能是弱氮-氖激光血管内照射疗法改善急性缺血性脑卒中预后的作用机制之一。

核黄素抑制大鼠缺血性脑损伤

目的探讨核黄素对缺血性脑损伤的保护作用及其机制。方法在体实验,采用SD♂大鼠,随机分为对照组、模型组和核黄素组。核黄素组大鼠腹腔注射核黄素1 mg·kg^(-1),连续7 d后,模型组和核黄素组大鼠用线栓法制作大脑中动脉栓死(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型。术后24 h,用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(triphenyl tetrazolium chloride,TTC)检测脑梗死面积、称重法检测脑水肿状况、电镜观察缺血处脑皮层超微结构变化。离体实验采用原代培养的大鼠脑皮层神经元制备氧糖剥夺(oxygen and glycose deprivation,OGD)模型。用噻唑蓝[3-(4,5-dimethylthiazol-2yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT]法检测OGD后神经元活力、电镜观察神经元超微结构变化。大鼠经MCAO模型24 h后,对脑组织中的超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)的酶活力进行测定。结果核黄素明显减少MCAO引起的脑梗死面积(P<0.01)、抑制脑水肿(P<0.01)、抑制亚细胞结构损伤;核黄素明显保护神经元OGD后的细胞活力(P<0.01)和亚细胞结构。核黄素明显提高铜锌SOD(Cu-Zn SOD,SOD1)、GSH-Px和CAT的酶活力(P<0.01);而对锰SOD(Mn-SOD,SOD2)的酶活力无影响。结论核黄素对大鼠缺血性脑损伤具有保护作用,其作用机制包括保护缺血时脑组织的抗氧化酶活力。

丁苯酞对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后caspase-8表达及凋亡活性的影响

目的研究丁苯酞(NBP)对大鼠脑缺血再灌注损伤后的神经保护作用及对caspase-8表达的影响。方法180只Wistar大鼠随机分成假手术组、缺血1h再灌注组、NBP治疗组、NBP预防组、NBP预防治疗组,每组大鼠又随机分成6h、12h、24h3个亚组,各亚组12只,采用改良的ZeaLonga法制作局灶性脑缺血再灌注大鼠模型,观察NBP对大鼠脑缺血再灌注预防或治疗后的神经功能症状评分、组织形态学改变、以及对caspase-8表达的影响。结果与假手术组相比,缺血再灌注组大鼠出现严重的神经功能缺失症状,皮质和海马区caspase-8表达明显增加(P<0.01);与缺血再灌注组比较,NBP治疗组及预防治疗组能显著缓解神经元凋亡的数目及皮质海马部的caspase-8表达(P<0.01),NBP预防组皮质和海马区caspase-8表达也较缺血灌注组降低(P<0.01),但较NBP治疗组较差。结论NBP能减少缺血区凋亡神经元的数目,其预防用药及早期治疗对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤有一定的保护作用,其作用机制可能通过下调caspase-8表达相关。

两种血管性痴呆模型大鼠学习记忆能力与海马自由基代谢的比较

目的观察两种拟血管性痴呆(VD)模型大鼠学习记忆能力及海马组织自由基代谢变化。方法采用线栓法和双侧颈总动脉结扎法分别制备大脑中动脉梗死(MCAO)和慢性脑低灌注型(CCA)VD模型,Morris水迷宫检测痴呆大鼠的学习记忆功能,生化法检测模型大鼠海马组织中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的含量变化。结果在训练的1～4 d,MCAO模型和CCA模型大鼠逃避潜伏期和游泳路径延长(P<0.05,P<0.01),CCA模型出现逃避潜伏期和游泳路径延长的时间早于MCAO模型(P<0.05,P<0.01);MCAO模型大鼠的dP/dT和穿环次数均明显减少(P<0.05,P<0.01);MCAO模型与CCA模型大鼠海马组织MDA含量明显增加,SOD、GSH-Px的含量则明显下降(P<0.05,P<0.01),两种模型MDA、SOD、GSH-Px含量变化无显著差别。结论 CCA模型大鼠空间记忆能力下降明显,而MCAO模型记忆保持能力较差,MDA、SOD、GSH-Px代谢参与了MCAO和CCA所致血管性痴呆的病理过程。

七氟醚预处理对局灶性脑缺血再灌注大鼠T细胞死亡耦联基因8表达的影响

目的:观察七氟醚预处理对局灶性脑缺血再灌注大鼠缺血半暗带内T细胞死亡耦联基因8(TDAG8)表达的影响。方法:选取54只成年雄性SD大鼠,随机分为对照组、再灌注组和七氟醚组,每组18只。采用大脑中动脉内线栓阻断法(middle cerebral artery occlusion,MCAO)制造大鼠局灶性脑缺血再灌注模型。缺血2 h后再灌注48 h。七氟醚组在造模前吸入最低肺泡有效浓度(MAC)为1的七氟醚30 min,对照组和再灌注组则吸入O2。大鼠行神经行为学评分后处死。取大脑行2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色,计算脑梗死容积百分比,采用蛋白印迹法和RT-PCR法检测脑缺血半暗带内的TDAG8蛋白和mRNA的表达变化。结果:①与对照组相比,再灌注组和七氟醚组脑梗死容积百分比均显著升高(P均<0.05);七氟醚组脑梗死容积百分比较再灌注组显著降低(P<0.05)。②与对照组相比,再灌注组和七氟醚组TDAG8蛋白和mRNA表达均显著升高(P均<0.05);七氟醚组较TDAG8的表达再灌注组明显降低(P<0.05)。结论:七氟醚预处理可降低TDAG8的表达,对脑缺血再灌注损伤具有一定保护作用。

补阳还五汤对MCAO模型大鼠炎症因子水平的作用研究

目的:观察补阳还五汤对缺血性脑损伤炎症因子水平的作用。方法:SD大鼠按体重随机分为假手术组,模型对照组,阿托伐他汀(10mg/kg),补阳还五汤高、中、低剂量组(20、10、5g/kg),用颈内动脉线栓法建立MCAO脑缺血再灌注模型;实验第10周期末,采血,取脑组织,ELISA法测定血清及脑组织中TNF-α、IL-6、IL-8、ROS、NF-κB含量。结果:20、10g/kg补阳还五汤能显著降低模型大鼠血清及脑组织TNF-α、IL-6、NF-κB含量,降低脑组织ROS水平。结论:补阳还五汤能有效降低MCAO大鼠的炎症反应;其对缺血性脑损伤的防治作用可能与降低炎症因子水平,抑制炎症反应有关。

小鼠脑梗死后脑组织HDAC9的表达及其意义

目的检测线栓法大脑中动脉阻塞(MCAO)后小鼠不同部位脑组织HDCA9的表达及胞内分布变化,探讨HDAC9与缺血性脑卒中的关系。方法 21只雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组(9只)与手术组(12只),将手术组术后Longa评分2~3分的小鼠纳入MCAO组(9只),术后3 d断头取脑,采用免疫荧光染色观察HDAC9脑组织内分布位置与胞内分布变化,采用Western免疫印迹法与实时荧光定量PCR法检测各组不同部位(梗死侧/对侧皮层/MCAO组小脑/假手术组皮层/假手术组小脑)HDAC9的表达变化。结果(1)免疫荧光染色:脑梗死后,梗死灶周围脑组织HDAC9的荧光强度较其他部位明显增强。高倍镜下与假手术组对比,梗死灶周围HDAC9胞浆内表达增多,核内表达减少;(2)蛋白与m RNA表达检测:与各组对比,梗死侧脑组织HDAC9表达显著升高,具有统计学差异(均P<0.05),蛋白与m RNA表达情况相一致。结论 HDAC9与缺血性脑卒中密切相关,可能参与其病理生理过程。

参丹芎注射液对大鼠急性脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的:研究复方参丹芎注射液对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法:采用线栓法堵塞大鼠大脑中动脉(MCAO)脑缺血/再灌注损伤模型(MCAI/R),将造模成功的雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、参丹芎注射液高、中、低剂量组(20、10、5mg提取物/kg)、金纳多组(35mg提取物/kg),分组后立即iv给药,连续给药3d后考察神经功能缺失症状,脑梗死灶面积,脑组织中丙二醛(MDA)含量、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性的变化。结果:参丹芎注射液(20、10mg提取物/kg)能够明显减轻脑缺血/再灌注损伤大鼠神经功能缺损症状,减少脑梗死灶面积和MDA含量、增加LDH、SOD和GSH-Px活性。结论:参丹芎注射液对大鼠脑缺血再灌注损伤具有明显的保护作用。

余甘子提取物对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制

目的研究余甘子提取物对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制。方法大鼠随机分为假手术组,模型组,余甘子提取物高、中、低剂量(生药6.0、3.0、1.5 g/kg)组和阳性药组(银杏叶提取物100 mg/kg),各给药组每天ig给药1次,连续给药10 d。末次给药后30 min,大脑中动脉线栓法制备大鼠脑缺血再灌注模型,造模后,行神经功能学评分,测定脑梗死面积和脑组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、诱导性一氧化氮合酶(i NOS)、核转录因子(NF-κB)的水平。结果与模型组相比,余甘子提取物能减少局灶性脑缺血再灌注大鼠的神经功能评分和脑梗死面积(P<0.05),提高脑组织SOD活性(P<0.05),降低MDA、NO、IL-1β、IL-6、i NOS和NF-κB的水平(P<0.05)。结论余甘子提取物对大鼠脑缺血再灌注损伤具有明显的保护作用,其机制可能与抗氧化和抑制炎症有关。