复方白花前胡液对大脑中动脉缺血再灌注大鼠Caspase-3蛋白表达的影响

目的 :探索复方白花前胡液对大脑中动脉缺血再灌注大鼠Caspase 3蛋白表达的影响。方法 :线栓法制备大脑中动脉缺血再灌注大鼠模型 ,术后2 4、4 8、72h分别检测大鼠的神经功能缺损 ;并采用免疫组织化学法检测凋亡相关基因Caspase 3蛋白表达。结果 :MCAO R 2 4、4 8、72h后 ,所有动物都出现程度不同的运动障碍 ,且大鼠脑组织中Caspase 3蛋白表达显著升高 ,复方白花前胡液可明显改善大脑中动脉缺血再灌注大鼠的神经功能缺损症状 ,抑制大鼠Caspase 3蛋白表达水平。结论 :复方白花前胡液能有效抑制凋亡相关基因Caspase 3蛋白的表达 ,减轻或消除缺血级联反应中迟发性神经元死亡 ,复方白花前胡液是其治疗缺血性中风病的机理之一。

头针对大脑中动脉缺血再灌注模型大鼠Cyt-c、Caspase-3表达的影响

目的:探讨针刺对大鼠脑缺血后神经元凋亡的影响,揭示针刺脑保护机理。方法:选择SD大鼠,用线栓法复制右侧大脑中动脉缺血再灌注模型,并进行头穴透刺,"百会"透"曲鬓",测定缺血半暗带Cyt-c、Caspase-3表达变化。结果:头穴透刺"百会"透"曲鬓"能下调缺血半暗带脑组织Cyt-c、Caspase-3表达水平。结论:针刺脑保护作用与下调Cyt-c、Caspase-3表达有关。

复方通络胶囊对大脑中动脉缺血再灌注大鼠的预防性保护作用

目的:观察复方通络胶囊对大脑中动脉缺血再灌注(MCAO)大鼠的预防性保护作用。方法:采用MCAO大鼠模型,造模前大鼠灌胃给药1周,以神经行为学评分、脑梗死率、脑指数、脑含水量及脑组织伊文氏蓝含量为指标观察复方通络胶囊对MCAO大鼠是否有保护作用。结果:复方通络胶囊能明显降低模型动物神经行为学评分、脑梗死率及脑组织伊文氏蓝含量,与模型组比较差异显著。结论:复方通络胶囊对MCAO大鼠有预防性保护作用。

复方通络胶囊预处理大脑中动脉缺血再灌注大鼠后血浆vWFTM含量和MMP-2 mRNA表达的变化

目的:观察复方通络胶囊对大脑中动脉缺血再灌注(MCAO)大鼠的预防性脑保护作用。方法:采用MCAO大鼠模型,造模前大鼠灌胃给药1周,以血浆血管性血友病因子(vWF)、血栓调节蛋白(TM)含量和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)mRNA的表达为指标,观察复方通络胶囊对MCAO大鼠的作用机制。结果:复方通络胶囊能明显降低模型动物血浆vWF、TM含量,与模型组比较差异显著(P<0.05),并且能抑制MMP-2 mRNA的表达。结论:复方通络胶囊能够降低模型动物血浆vWF、TM含量,抑制MMP-2 mRNA的表达,对MCAO大鼠有预防性脑保护作用。

复方通络胶囊预处理大脑中动脉缺血再灌注大鼠后脑组织NOS SOD活性和MDA含量变化

目的:观察复方通络胶囊对大脑中动脉缺血再灌注(MCAO)大鼠的预防性脑保护作用。方法:采用MCAO大鼠模型,造模前大鼠灌胃给药1周,以脑组织一氧化氮合酶(NOS)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量为指标,观察复方通络胶囊对MCAO大鼠的作用机理。结果:复方通络胶囊能明显降低模型动物MDA含量,提高SOD活性,与模型组比较有显著性差异(P<0.05,P<0.01),并且能降低NOS活性。结论:复方通络胶囊能够降低模型动物NOS活性和MDA含量,提高SOD活性,对MCAO大鼠有预防性脑保护作用。

大鼠左右大脑中动脉缺血再灌注模型比较

目的探讨大鼠左右大脑中动脉缺血再灌注模型的差异。方法选择右利雄性Wistar大鼠48只,按照随机数字表分为左侧大脑中动脉缺血再灌注组(左侧优势组)、右侧大脑中动脉缺血再灌注组(右侧非优势组),每组24只,每组使用各自侧别的假手术对照。血管内线栓法阻塞大脑中动脉2h,然后再灌注。测试神经功能,取脑分别进行常规TTC染色和HE染色,测量脑梗死体积,光镜下观察脑组织病理变化。结果左侧优势组再灌注24、48和72h神经功能缺损评分明显低于右侧非优势组(P<0.05)。左侧优势组缺血程度较右侧非优势组重。左侧优势组神经元数量严重缺失,海马细胞排列紊乱,脑梗死体积明显大于右侧非优势组[(102.1±8.8)mm3 vs(97.0±11.2)mm3,P<0.05]。结论大鼠优势半球大脑中动脉阻塞后,神经功能缺损程度较非优势侧严重,脑梗死体积更大。大鼠优势半球局灶性脑缺血模型重复性好,而且可靠。

大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型制备及行为学评价标准的改进

目的:改进大鼠脑缺血再灌注模型的制备方法,并提出改良的行为学评价标准。方法:采用改进法制备模型并进行神经肌肉和前庭功能的评价,以观察改良方法和评价标准的可靠性。结果:模型大鼠出现神经功能障碍,脑组织缺血梗死。结论:该改良法制备的模型是研究局灶性脑缺血的理想实验动物模型。

脑络清对大脑中动脉缺血再灌注大鼠的保护作用

目的观察脑络清对大脑中动脉缺血再灌注(MCAO)大鼠的保护作用。方法采用MCAO大鼠模型,以神经行为学评分、脑梗死率、脑指数、脑含水量及病理组织学检查为指标观察脑络清对MCAO大鼠是否有保护作用。结果脑络清能明显降低模型动物脑梗死率、脑含水量,保护神经元细胞与模型组比较差异显著(P<0.05)。结论脑络清对MCAO大鼠有保护作用。

小鼠大脑中动脉缺血再灌注后缺血区及周边区星形胶质细胞的变化

目的探讨小鼠大脑中动脉缺血再灌注后脑梗死体积、星形胶质细胞(AS)病理形态及其蛋白表达的变化。方法选取69只成年健康雄性KM小鼠,将小鼠随机分为脑缺血2h再灌注1、4、10、24、48、72h模型组(n=9)以及假手术组(n=6,仅结扎右侧颈总动脉)和正常组(n=9)。采用线栓法制备小鼠大脑中动脉局灶性脑缺血再灌注模型。应用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法观察脑梗死的部位与体积;免疫组化法观察脑缺血中心区与周边区不同再灌注时间点胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。结果缺血再灌注1h开始出现脑梗死灶,且再灌注24h时梗死体积最大,之后逐渐缩小(F=745.534,P=0.000)。小鼠脑缺血再灌注后缺血中心区AS肿胀、肥大进而较快发生凋亡,其GFAP表达水平低于周边区(P<0.05);而缺血周边区GFAP阳性表达的AS出现反应性活化,进而发生形态学改变;缺血周边区及对侧相应脑组织区域GFAP的表达量均随再灌注时间的延长呈现增加趋势(P<0.05)。结论 AS反应性活化可能是一种缺血后的全脑保护性防御机制,尤其是在缺血周边区,其活化程度影响脑组织的存活与修复,提示在脑缺血再灌注过程中AS反应性活化可能在脑损伤后可塑性形态及功能改变中发挥重要作用。

注射用熊胆粉对大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤影响的研究

目的:观察注射用熊胆粉对大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤的影响。方法:制备大鼠大脑中动脉缺血模型,观察给药后对其神经病学症状、脑梗塞面积及组织病理学的影响。结果:注射用熊胆粉能缓解大鼠神经病学症状的发生,减少脑梗塞面积,改善组织病理学的变化。结论:注射用熊胆粉可明显减轻大鼠中动脉脑缺血再灌注损伤。

蒙药萨乌日勒对大脑中动脉缺血再灌注模型损伤大鼠的神经保护作用研究

目的:探讨蒙药萨乌日勒对大脑中动脉缺血损伤模型大鼠的神经保护作用。方法:将30只Wistar雄性大鼠(体重220±20g)随机分为3组:空白组(NT)、模型组(IS)、萨乌日勒组(SA)。采用Zea-Longa线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血模型(MCAO),脑缺血90min后实施灌注。治疗方法:大鼠清醒24h后进行治疗。NT组和IS组:按1mL/100g·d灌胃蒸馏水;SA组:61.7mg/100g·d剂量灌胃。各组连续给药2周,第15天取材进行实验观察。①观察各组大鼠神经功能评分;②将大鼠脑组织HE染色,观察脑组织形态学改变;③检测血清的AST、ALT的含量,观察肝毒性。结果:①神经功能评分(Bederson):治疗前,模型组大鼠神经功能缺损障碍明显,与空白组比较差异显著(P<0.01);治疗2周后,与模型组比较,萨乌日勒组大鼠Bederson评分显著降低(P<0.01);②HE染色结果显示:NT组大鼠大脑皮质神经细胞分布规则,细胞胞浆丰满、细胞核内染色质清晰。IS组大鼠大脑皮质病变区色泽苍白,与周围分界明显;细胞胞浆浓缩红染,胞核固缩软化明显;细胞密度下降,分布较正常组织稀疏,排列不规则,水肿、疏松明显。SA组大鼠大脑病变区与周围分界明显,皮质神经细胞轻度减少,细胞浆与细胞核改变接近正常脑组织。与IS组比较SA组大鼠大脑正常细胞数量增多。各组大鼠肝组织HE染色结果显示:各组大鼠肝组织未见明显的异常。③检测血清AST、ALT含量结果示:模型组、萨乌日勒组血清肝功生化指标AST和ALT水平变化不大,与空白组比较无显著差异(P>0.05),表明萨乌日勒无肝毒性。结论:蒙药萨乌日勒可明显减轻大鼠神经功能障碍,对大脑中动脉缺血再灌注损伤具有较好的保护作用。

大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型的改良

目的:改进大鼠脑缺血再灌注模型的制备方法。方法:采用改良法制备模型并进行大鼠行为学的评价,以观察改良方法的可靠性。结果:模型大鼠出现神经功能障碍,脑组织缺血梗死,较对照组操作简单,缺血成功率高。结论:该改良法制备的模型是研究局灶性脑缺血的理想实验动物模型。

单涎酸神经节苷脂对大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤的保护作用研究

目的研究单涎酸神经节苷脂对大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤的保护作用。方法64只SD大鼠随机分成A组(正常组,11只)、B组(假手术组,11只)、C组(NS对照组,14只)、D组(GM1治疗组,14只)、E组(GM1预防组,14只)。采用改良"线栓法"制作大鼠MCAO再灌注模型,不同方案尾静脉注射GM1。采用"盲法"分别于再灌注10min和再灌注24h对大鼠进行神经功能缺失评分;处死大鼠,A、B组3只,C、D、E组6只大鼠进行TTC染色测量脑梗死体积;各组6只大鼠用作HE染色光镜观察;各组2只大鼠用作电镜观察。结果MCAO再灌注10min评分结果,C、D、E组>A、B组(P<0.01),C、D组>E组(P<0.01);MCAO再灌注24h评分结果,C组>A、B、E组(P<0.01),D组>A、B、E组(P<0.05),C组>D组(P<0.05);脑梗死体积比C、D、E组>A、B组(P<0.01),C组>D、E组(P<0.01),D组>E组(P<0.05);HE染色见梗死灶中心区神经细胞坏死,周围区细胞不同程度损伤;电镜观察A、B组细胞完整,超微结构清晰,C组细胞超微结构破坏严重,D、E组细胞超微结构破坏程度轻。结论GM1能减小MCAO再灌注后脑梗死体积,改善神经功能障碍;GM1对大鼠MCAO再灌注损伤有保护作用。

吗啡对大鼠大脑中动脉缺血再灌注后神经功能影响

目的观察吗啡预处理对大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤后大脑组织形态学改变、梗死面积及神经功能的影响。方法将雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组及吗啡组,每组12只。假手术组不阻断脑血流,模型组和吗啡组按LONGA方法阻断大脑中动脉2h后再开放灌注。模型组和吗啡组在脑缺血前60min分别腹腔注射生理盐水及1mg/kg吗啡2mL。再灌注24h时,测定大鼠神经功能缺损评分,苏木精-伊红染色观察缺血脑组织形态学改变,红四氮唑(TTC)染色计算脑梗死面积。结果假手术组大鼠神经功能及脑组织形态学正常,大脑组织无梗死。与模型组比较,吗啡组脑组织形态学病理改变较轻,脑梗死面积减少(t=11.22,P<0.05),神经功能缺损评分降低(t=5.86,P<0.05)。结论吗啡预处理能减轻大鼠局灶脑缺血再灌注损伤,改善神经功能。

大脑中动脉缺血再灌注后nNOS的表达

①目的 探讨神经元型一氧化氮合酶 (nNOS)与脑缺血的关系。②方法 制备Wistar大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型 ,用苏木精 伊红染色观察缺血后脑组织的形态学改变 ,用免疫组织化学法显示nNOS的变化。③结果 缺血再灌注后皮质及壳尾核nNOS免疫阳性神经元细胞表达增多 ,以再灌注 3h最多 ,6h开始下降。组织学观察可见缺血区内有神经元的变性、肿胀及坏死。④结论 在局灶性脑缺血再灌注早期nNOS表达增多 。

针刺结合游泳训练对大脑中动脉缺血再灌注大鼠认知功能的影响

目的探讨针刺百会穴结合游泳训练对大脑中动脉缺血再灌注大鼠认知功能的影响。方法将SD大鼠手术制成右侧大脑中动脉缺血再灌注模型,将手术模型成功后的28只大鼠进行神经功能评定及水迷宫测试后按照随机数字表分为模型组、针刺组、游泳组和针游结合组,每组7只;另设假手术组7只。假手术组及模型组不给予任何治疗;针刺组给予百会穴针刺治疗,1次/d;游泳组给予游泳训练,1次/d;针游结合组给予针刺百会穴结合游泳训练,1次/d。共治疗6 d。每天治疗前测量体重进行神经功能评分,治疗6 d后进行水迷宫测试其学习记忆能力,测试结束取脑,采用TUNEL染色观察海马区细胞凋亡情况。结果治疗后针刺和游泳治疗无明显交互作用(P>0.05),但针游结合组大鼠神经功能评分低于模型组(P<0.05);针游结合组大鼠水迷宫穿越平台次数多于模型组(P<0.05)。结论针刺结合游泳训练对于大脑中动脉缺血再灌注大鼠认知功能的影响可能优于单纯针刺或游泳,需要更深入的研究探索。

蒙药希木德呼乌日勒对大脑中动脉缺血再灌注损伤的作用

目的:实施蒙药希木德呼乌日勒对大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤的改善作用。方法:把SD大鼠随机分为假手术组、模型组、希木德呼乌日勒组。对模型组、希木德呼乌日勒组大鼠实施大脑中动脉缺血再灌注。对希木德呼乌日勒组大鼠灌胃给希木德呼乌日勒,假手术组及模型组予生理盐水,1次/d,连续给药7天。结果:希木德呼乌日勒组大鼠大脑梗死面积小于模型组。模型组的神经功能评价评分(3.17±0.68)大于希木德呼乌日勒组(2.17±0.68)(P<0.051)。结论:蒙药希木德呼乌日勒能改善大鼠大脑急性缺血再灌注损伤。

电凝法与线栓法制备大脑中动脉缺血模型在脑卒中后中枢痛研究中的应用对比

目的采用电凝法与线栓法分别造成小鼠大脑中动脉缺血,建立脑卒中后中枢痛(central post-stroke pain,CPSP)模型,探究更贴近临床的造模方法。方法选择6~8周龄(20~25g)健康雄性C57BL/6小鼠,随机分为空白对照组(Naive组)、电凝组(dMCAO组)和线栓组(tMCAO组),进行不同造模处理。在造模后行Longa神经功能缺陷评分,利用TTC染色评估大脑梗死体积,通过机械性缩足阈值和热缩足潜伏期评估小鼠的疼痛状态,旷场实验评估小鼠的运动功能。结果与Naive组相比,电凝组和线栓组小鼠造模后神经功能缺陷评分均升高(均P<0.01),TTC染色可观察到不同程度的脑缺血(P<0.05,P<0.01);与Naive组相比,电凝组和线栓组在造模后的第7、14、21、28天均表现出机械性痛觉超敏和热痛觉过敏,两组差异无统计学意义;与Naive组相比,电凝组小鼠在造模后第29天的运动功能无显著差异,而线栓组小鼠的运动功能下降(P<0.01)。结论电凝法和线栓法均可诱发脑卒中后中枢痛,但电凝法更贴近CPSP的临床表征,更具复制意义。

基于脂质与动脉粥样硬化通路探讨侯氏黑散治疗脑缺血再灌注损伤的机制研究

目的利用网络药理学和动物实验验证分析《金匮要略》侯氏黑散治疗脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia reperfusion injury,CIRI)的成分、靶点及信号通路,并通过脂质与动脉粥样硬化通路研究其作用机制。方法在TCMIP、GeneCards和OMIM疾病数据库获取侯氏黑散与CIRI的交集靶点,使用STRING网站构建交集靶点的蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络,使用Cytoscape软件筛选核心靶点和成分并构建“成分-靶点”网络。使用R语言进行GO和KEGG富集分析,使用AutoDock Vina验证成分与靶点的对接能。动物实验中将60只SPF级SD大鼠随机分为假手术组、模型组、西药组和侯氏黑散低、中、高剂量组。用线栓法制备大脑中动脉闭塞/再灌注(middle cerebral artery occlusion/reperfusion,MCAO/R)大鼠模型,造模7 d后通过改良神经功能评分(modifiedneurological severity score,mNSS)评估神经功能,TTC染色检测脑梗死体积,HE染色观察脑组织病理变化,全自动生化分析仪检测血清低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(how density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、总胆固醇(total cholesterol,TC)和甘油三酯(triglycerides,TG)含量,ELISA检测血清白介素-1β(interleukin 1β,IL-1β)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平,免疫组织化学和RT-qPCR检测脑组织中HSP90AA1、NF-κB1、SRC的蛋白及mRNA表达水平。结果从侯氏黑散中筛选得到508种有效成分及549个药物靶标,1592个CIRI疾病靶点,交集靶点共153个,核心靶点为HSP90AA1、SRC、NF-κB1,与棕榈酸、三磷酸腺苷、穿贝海绵甾醇、腺苷等核心成分均具有较强的结合力。GO富集分析的生物过程主要涉及对外源性刺激的反应、位置维护、炎症反应的调节等,KEGG通路分析主要富集在脂质和动脉粥样硬化、cAMP信号通路、花生四烯酸代谢等。与模型组相比,侯氏黑散各剂量组mNSS评分、脑梗死率、血清IL-1β、IL-6和TNF-α含量、脑组织HSP90AA1蛋白表达水平和HSP90AA1、NF-κB1和SRC mRNA表达水平降低(P<0.05,P<0.01);侯氏黑散高剂量组LDL-C、TC、TG水平降低(P<0.05,P<0.01),HDL-C水平增高(P<0.05);侯氏黑散中剂量组TG水平降低(P<0.01);西药组和侯氏黑散中、高剂量组NF-κB1和SRC蛋白表达水平降低(P<0.05,P<0.01)。与侯氏黑散低剂量组相比,侯氏黑散中、高剂量组mNSS评分、脑梗死率,血清TG水平,血清IL-1β、IL-6和TNF-α含量,脑组织中NF-κB1 mRNA表达水平均显著降低(P<0.01);侯氏黑散高剂量组脑组织HSP90AA1、NF-κB1和SRC蛋白表达水平和HSP90AA1、NF-κB1 mRNA表达水平降低(P<0.05,P<0.01)。与侯氏黑散中剂量组相比,侯氏黑散高剂量组mNSS评分、脑梗死率,血清IL-1β、IL-6和TNF-α含量,脑组织HSP90AA1蛋白表达水平和NF-κB1 mRNA表达水平降低(P<0.05,P<0.01)。结论侯氏黑散以多成分、多靶点、多通路治疗CIRI,其中抑制核心靶点HSP90AA1、NF-κB1、SRC的mRNA和蛋白表达,调控脂质与动脉粥样硬化通路是侯氏黑散治疗CIRI的重要机制。

轻中度狭窄性大脑中动脉粥样硬化斑块特征与缺血性卒中责任斑块形成的相关性

目的 采用高分辨率磁共振血管壁成像(VW-HRMRI)分析导致轻中度狭窄的大脑中动脉粥样硬化斑块特征,探讨其与责任斑块形成的相关性及临床诊断价值。方法 回顾性分析于徐州市中心医院就诊的大脑中动脉轻中度狭窄的有症状患者(n=33)和无症状患者(n=19),所有患者均行VW-HRMRI检查,共识别出68个斑块,将识别出的斑块分为责任斑块组(n=33)与非责任斑块组(n=35)。使用二元Logistic回归分析和ROC曲线分析斑块特征与缺血性卒中发生的关联及临床诊断价值。结果 相较于非责任斑块,责任斑块表现出更高的重构指数(P=0.03)与强化等级(P=0.01)以及更大的斑块体积(P=0.003)与陡峭度(P=0.002),二元Logistic回归分析显示,正性重构(OR=5.400;95%CI:1.334~21.857)、强化等级(OR=4.431,95%CI:1.750~11.219)、斑块体积(OR=1.09,95%CI:1.014~1.171)及陡峭度(OR=1.122,95%CI:1.038~1.214)均与责任斑块独立相关。ROC曲线分析显示,正性重构、强化等级、斑块体积与陡峭度4种危险因素的曲线下面积分别0.631、0.696、0.705、0693,而预测模型(4种危险因素联合)的曲线下面积为0.875,敏感度和特异性分别为0.818与0.800。结论 正性重构、强化等级、斑块体积与陡峭度为责任斑块的独立危险因素,4种影像特征联合应用能更好的预测责任斑块的发生,为及早进行临床治疗提供影像依据。