大花卷丹百合组培快繁技术研究

为获得大花卷丹百合的优质种苗,促进其规模化生产,以大花卷丹百合的鳞片为外植体,采用MS、N_(6)、B_(5)培养基,添加激素NAA、6-BA、GA_(3),进行了大花卷丹百合的快繁技术研究。结果表明,外植体在N_(6)培养基中产生愈伤组织最快、效果最好。愈伤组织及不定芽诱导最佳培养基配方为N_(6)+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA;不定芽增殖最佳培养基为N_(6)+0.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+1.0 mg/L GA_(3)。NAA诱导小鳞茎效果最佳,最适培养基为N_(6)+1.0 mg/L NAA;促进小鳞茎膨大生根要在诱导鳞茎的基础上加入IBA,即最适培养基为N_(6)+0.1 mg/L NAA+2.0 mg/L IBA。

百合抗镰刀菌资源鉴定及抗病相关基因筛选

对20个百合种质资源的组培苗进行尖孢镰刀菌百合专化型（Fusariumoxysporumfsp．1ilii）室内接种鉴定；以筛选出有较好抗性的大花卷丹（Liliumleichtliniiv轧maximowivziiBaker）为材料，以镰刀菌诱导12和24h的作为处理组，无菌水处理作为对照组，采用SMART技术构建了百合经镰刀菌诱导后的抑制差减正、反向两个SSH文库。在正向文库中选择了4个抗病相关的ESTs，用半定量RT-PCR分析这些ESTs的表达情况。经接种鉴定，20个百合种质资源中，对百合镰刀菌表现高抗的有3个，中抗9个，感病8个；SSH文库ESTs片段大小为200-2000bp。依据斑点杂交结果，从正向SSH文库中挑取50个单克隆进行测序和比对分析，得到6种共10条抗病相关EST。通过半定量RT-PCR对其中的4条抗病相关ESTs：丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶（serine／threonineproteinkinase，SffPK）、谷胱甘肽S一转移酶（glutathioneS．transferase，GST）、过氧化物酶（peroxidase，POD）和亲环素（cyclophilin，CYP）的表达情况进行了分析，证明它们在一定程度上都受百合镰刀菌诱导而表现上调表达，推测其可能参与了百合对镰刀菌枯萎病的抗病过程。