大苞鞘石斛种子快繁体系培养基的筛选

以大苞鞘石斛(Dendrobium wardianum Warner)种子为材料,利用MS培养基为基础培养基,选取2种生长素(NAA、IAA)和2种细胞分裂素(6-BA、KT)进行不同浓度的两两随机组合(NAA+6-BA、NAA+KT、IAA+6-BA和IAA+KT),筛选大苞鞘石斛的最适种子萌发培养基、生根培养基和继代培养基。结果表明,在MS+蔗糖(30 g/L)+马铃薯匀浆(80 g/L)+琼脂粉(7 g/L)+活性炭粉末(0.5 g/L)的基础培养基上,添加NAA(0.9 mg/L)+KT(0.3 mg/L)是大苞鞘石斛种子萌发的最适培养基,添加NAA(0.3 mg/L)+6-BA(0.6 mg/L)是最适生根培养基,添加IAA(0.3 mg/L)+6-BA(0.6 mg/L)是最适继代培养基。可见,大苞鞘石斛在不同生长阶段对植物生长调节剂的种类及浓度的需求存在差异,结果可为大苞鞘石斛的快速繁殖提供科学依据。

大苞鞘石斛(Dendrobium wardianum)种子离体萌发培养

通过无菌播种,对影响大苞鞘石斛(Dendrobium wardianum)种子萌发的各因素进行比较研究。结果表明,将种胚播于B5+20 g/L绵白糖+20%椰乳+pH 5.4上最有利于种胚萌发,培养50 d萌发率达79%。基本培养基、激素、氮源形态及有机添加物对大苞鞘石斛种胚萌发影响明显,萌发时需要硝态氮的量较大,并且基本培养基的正确选择可以有效地避免褐变的发生。

大苞鞘石斛化学成分研究

通过硅胶柱层析、纯化,从大苞鞘石斛中分离得到5个化合物,利用理化性质和波谱分析分别鉴定为钩状石斛素(1)、愉悦石斛素(2)、4',5,7-三羟基-3',5'-二甲氧基黄烷酮(3)、β-胡萝卜苷(4)和β-谷甾醇(5)。所有化合物均为首次从大苞鞘石斛中分离得到。

大苞鞘石斛组织培养快繁研究

为筛选出大苞鞘石斛组培快繁体系各阶段最适培养基配方,以大苞鞘石斛无菌苗茎段为外植体,通过正交试验研究不同因素对大苞鞘石斛植株再生的影响。结果表明:拟原球茎诱导最适培养基为1/2MS+2,4-D0.2 mg/L+蔗糖30 g/L,诱导出的拟原球茎直径1.5 mm时将其从茎段上剥离,并接入原培养基继续诱导15~20 d;拟原球茎增殖最适培养基为1/2MS+NAA 1 mg/L+蔗糖30 g/L+椰乳10%,继代周期25~30 d;拟原球茎分化最适培养基为1/2MS+NAA 0.5 mg/L+蔗糖30 g/L+椰乳10%,分化培养需40 d;将分化的无菌苗继代于花宝2号3 g/L+蛋白胨2 g/L+IBA 1 mg/L+蔗糖30 g/L+椰乳10%生根诱导效果最好,培养45 d;生根壮苗最佳培养基为花宝1号3 g/L+蛋白胨2 g/L+蔗糖30 g/L+活性炭1 g/L,培养50 d。

大苞鞘石斛原球茎超低温保存中生理生化变化

以继代培养60 d的大苞鞘石斛原球茎(=2～3 mm)为材料,对比研究低温高渗(HT+CA)和室温高渗(HT-CA)2种预处理方法对原球茎玻璃化法超低温保存冷冻前含水量以及预处理、脱水和解冻3个关键步骤中相对电导率、丙二醛质量摩尔浓度、可溶性糖和可溶性蛋白质量分数的影响,并结合显微结构观测和组织化学分析揭示高渗预处理影响超低温保存后原球茎相对存活率的生理生化基础。结果表明:在冷冻前,干样含水量显著降低,当干样含水量下降为1.06 g.g-1时,冻后相对存活率达最大值,为46.6%;预处理和脱水显著地提高了相对电导率;脱水和解冻使丙二醛质量摩尔浓度显著升高;可溶性糖和可溶性蛋白质量分数呈显著上升后明显下降的单峰变化曲线。多元相关分析表明,丙二醛质量摩尔浓度与相对存活率之间呈极显著负相关(相关系数为-0.992),膜脂过氧化作用是影响大苞鞘石斛原球茎冻后成活的关键因素之一。显微结构观察到细胞膜在预处理和脱水过程中受到明显破坏;组织化学分析显示淀粉粒和蛋白质的分布多集中在未受损伤的顶端分生组织中,分布变化呈先增多后减少的趋势,这与生理生化分析的结果是一致的。

大苞鞘石斛种子萌发过程中形态变化研究

[目的]对大苞鞘石斛种子萌发过程中的形态变化进行研究。[方法]以MS+0.5～1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA为培养基,进行大苞鞘石斛种子的萌发试验,并通过光电镜观察萌发过程中的形态变化。[结果]种子的萌发试验表明,大苞鞘石斛种子的萌发经历了由淡黄色转为淡绿色、胚开始膨大、胚胀破种皮、形成绿色圆球茎、产生第1叶原基、呈现明显的根端和形成小叶等一系列过程。通过光电镜观察发现,大苞鞘石斛的种子中间有一个小圆球形的胚;种皮有加厚的环纹。种胚发生过程有2种形式:①直接途径。种子萌发形成原球茎并进一步分化成试管苗;②间接途径。种子萌发形成低比例的愈伤组织,再分化形成原球茎或直接分化形成芽。成熟的原球茎具有明显的两极性,即膨大的生长点和伸长的胚根。[结论]试验对大苞鞘石斛种子萌发过程中的形态变化进行了研究,为大苞鞘石斛的进一步开发利用提供了依据。

不同因素对大苞鞘石斛原球茎分化的影响

选择6-BA、NAA、培养基种类和有机添加物种类等4个因素进行L16（4^4）正交试验，研究各因素对大苞鞘石斛原球茎分化的影响。结果表明：将无菌播种50d已突破种皮的原球茎转接于含3g／L花宝1号＋2g／L蛋白胨＋0．2mg／LNAA＋10％马铃薯提取液＋20g／L蔗糖（pH5．6）的培养基上培养70d，分化效果最好。6-BA对原球茎分化影响最为显著。

大苞鞘石斛原球茎悬浮培养研究

以大苞鞘石斛类原球茎为材料,通过悬浮培养,研究基础培养基、添加物和激素对其原球茎增殖及多糖含量的影响。结果表明:适合大苞鞘石斛原球茎悬浮培养的基本培养基为MS和B5培养基,增殖系数分别为4.31和4.03,多糖含量分别为7.08%和7.12%;添加物为香蕉+椰子汁时,增殖系数和多糖含量最高,分别为3.91和9.97%;适合原球茎悬浮培养的激素组合为0.5 mg/L NAA+0.2 mg/L 6-BA。

大苞鞘石斛中多糖DWW-1的提纯及其结构与性质分析

从大苞鞘石斛Dendrobium wardianum中分离纯化得到一种均一多糖组分DWW-1,采用化学和光谱学的方法对其理化性质及初步结构进行研究。首先采用水提醇沉方法制备大苞鞘的粗多糖,经过Sevag法除蛋白,DEAE-Cellulose和SephadexG-75柱层析分离纯化得到均一多糖DWW-1纯品。其次利用化学法、高效凝胶过滤色谱法、液相色谱法,并结合红外光谱,对DWW-1进行性质及结构分析。结果显示DWW-1为白色絮状固体,易溶于水,分子量为6.479×10~4,糖基组成为葡萄糖、糖醛酸、甘露糖、岩藻糖四种单糖;多糖糖苷键以1→4连接键为主,1→3为次;其次DWW-1具有较强DPPH自由基清除活性。初步研究结果表明从大苞鞘石斛中分离到的是一种具有抗氧化活性多糖,并简称为DWW-1。

大苞鞘石斛胚组织培养及植株再生研究

为筛选出大苞鞘石斛各生长阶段最适培养基配方,并建立大苞鞘石斛快繁体系,以大苞鞘石斛种胚为材料,以1/2MS为基本培养基,通过正交试验研究不同种类激素和添加物的浓度配比对种胚萌发和植株再生的影响。结果表明,大苞鞘石斛种胚萌发和原球茎膨大的最适培养基为1/2 MS+IBA 1.0 mg·L-1+6-BA 2.0 mg·L-1+NAA 2.0 mg·L-1+香蕉泥50 g·L-1,萌发率达91.29%;叶芽分化的最适培养基为1/2MS+IBA 0.5 mg·L-1+6-BA 1.0 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1+香蕉泥50 g·L-1;干物质积累的最适培养基为1/2 MS+IBA 2.0 mg·L-1+6-BA 2.0 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1+香蕉泥200 g·L-1;丛生芽增殖的最佳培养基为1/2 MS+IBA 0.5 mg·L-1+6-BA 1.0 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1+香蕉泥100 g·L-1,平均增殖系数达6.33;丛生芽生根培养的最佳培养基为1/2 MS+IBA 0.5 mg·L-1+6-BA 3.0 mg·L-1+NAA0.2 mg·L-1+香蕉泥50 g·L-1+土豆泥50 g·L-1。

GC-MS/MS测定叠鞘石斛中乐果等三种农药残留的一测多评研究

以叠鞘石斛(Dendrobium aurantiacum)为研究对象,样品采用乙腈提取,经Cleanert TPH专用净化柱净化。用GC-MS/MS测定样品,根据色谱相对保留时间和质荷比信息对样品进行定性分析,以乐果二级离子扫描峰(125.0/79.0)面积为参照峰,建立以乐果为对照品,测定叠鞘石斛中乐果等三种农药残留量的GC-MS/MS方法。结果表明,乐果、敌敌畏、毒死蜱进样量在0.1~1.0 ng与它们的色谱峰面积有较好的线性关系,最低检出限(以进样量计)分别为1.399×10^(-2)、2.279×10^(-4)、1.757×10^(-4) ng;平均回收率分别为95.4%、95.0%、94.7%。该一测多评方法简单快速,定量准确,适用于叠鞘石斛中乐果、敌敌畏、毒死蜱农药残留的同时测定。

大苞鞘石斛酚类化学成分研究

目的研究大苞鞘石斛Dendrobium wardianum茎中的酚类化学成分。方法运用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱、半制备液相色谱和制备薄层色谱等分离技术进行分离纯化。通过1H-NMR、13C-NMR、X射线单晶衍射、质谱等波谱数据和理化性质对化合物结构进行鉴定。结果从大苞鞘石斛茎中共分离得到31个酚类化合物,分别鉴定为4-羟基-3,3′,5′-三甲氧基联苄(1)、denbinobine(2)、柚皮素(3)、3,3′-二羟基-5,5′-二甲氧基联苄(4)、3,4ʹ-二羟基-5-甲氧基联苄(5)、5,7-二羟基色原酮(6)、dihydrotricin(7)、4,5-二羟基-3,7-二甲氧基-9,10-二氢菲(8)、1,4,7-三羟基-5-甲氧基芴酮(9)、二氢松柏醇二氢对羟基桂皮酸酯(10)、4,4′-二羟基-3,5-二甲氧基联苄(11)、(+)-丁香脂(12)、(+)-杜仲树脂酚(13)、N-反式桂皮酸酰对羟基苯乙胺(14)、丁香酸(15)、二氢松柏醇(16)、苜蓿素(17)、3,5,4′-三羟基-3′-甲氧基联苄(18)、threo-7-O-ethyl-9-O-(4-hydroxyphenyl)propionyl-guaiacylglycerol(19)、balanophonin(20)、ω-hydroxypropioguaiacone(21)、对羟基苯甲醛(22)、3-hydroxy-1-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyphenyl)propan-1-one(23)、(−)-铁皮石斛素B(24)、(+)-铁皮石斛素B(25)、dendrowillol A(26)、香草醛(27)、dihydro-p-cinnamic acid(28)、p-hydroxyphenethyl trans-ferulate(29)、对羟基苯甲酸(30)、对羟基肉桂酸(31)。结论首次获得了铁皮石斛素B的单晶并通过X射线单晶衍射,发现该化合物为一对外消旋体,其绝对构型分别为2S,3S和2R,3R,并对铁皮石斛素B进行了手性拆分。化合物20、25首次从石斛属植物中分离得到,化合物5、6、14、19、24、26、29、31均为首次从大苞鞘石斛中分离得到。

大苞鞘石斛组培扩繁研究

以大苞鞘石斛(Dendrobium wardianum Warner)无菌苗为试材,比较不同培养基组合对大苞鞘石斛组培苗生长的效果.结果表明:最适合大苞鞘石斛类原球茎(Protocorm-Like Bodies,PLBs)增殖的培养基是MS+2.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA+20.0 g/L Su,最适合其丛生芽增殖的培养基是MS+0.3 mg/L NAA+30.0 g/L Su+1.0 g/L活性碳,最适合其丛生芽生根的培养基是1/2 MS+1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+30.0 g/L Su+2.5 g/L香蕉粉+1.0 g/L活性碳.

植物生长调节剂促进春石斛提前开花效果研究

植物生长调节剂对春石斛的花期调控试验结果表明,不经低温诱导、10月份应用植物生长调节剂能促进春石斛杂交种在春节前开花,但最高节开花率仅为21.5%;结合外界低温,11月份应用植物生长调节剂能促进春石斛野生种大苞鞘石斛提前20 d开花,节开花率达50%,且花质明显提高。

3种石斛多糖及其降血糖活性的比较研究

天然多糖安全、低毒,是潜在糖尿病治疗药物。为寻找活性高、含量高的植物多糖资源,本文从多糖得率、结构和降血糖活性三个方面,对云南地方药材大苞鞘石斛、铁皮石斛和金钗石斛进行比较。通过热水浸提、透析和层析得到多糖,然后用糖尿病小鼠模型测定降血糖活性。结果表明大苞鞘石斛的多糖得率高(14.1%,DW),且分子量较小,其单糖组成与铁皮石斛多糖相似;降血糖效果强于铁皮石斛和金钗石斛多糖。大苞鞘石斛可作优良的亲本,为降血糖的石斛多糖资源开发提供育种资源。

大苞鞘石斛原球茎玻璃化超低温保存技术的研究

本文研究建立了大苞鞘石斛(Dendrobium wardianum Warner)原球茎玻璃化法超低温保存的技术体系。结果发现,预处理和玻璃化溶液(plant vitrification solution 2,PVS2)装载脱水是影响大苞鞘石斛原球茎相对存活率的两个关键步骤,高渗与低温-高渗两种预处理方法测定的相对存活率具有显著性差异;玻璃化溶液的种类以及脱水时间对冻后存活率具有重要的影响。基于此,建立了大苞鞘石斛原球茎的超低温保存体系,即:以继代培养60 d的大苞鞘石斛原球茎为材料,1/2MS+0.8 mol/L蔗糖的培养基上4℃低温预处理6 d后,转至1/2 MS+2 mol/L甘油+0.4 mol/L蔗糖的装载液中室温下装载40 min,在0℃下装载PVS2脱水40 min,然后转入装有新鲜PVS2冷冻管中并迅速投入液氮。在液氮保存1 h后放在40℃水浴中快速解冻1 min,利用含1.2 mol/L蔗糖的1/2MS培养液洗涤3次,每次间隔10 min;待恢复培养30 d后统计存活率,可使大苞鞘石斛原球茎超低温保存后存活率达到20.0%。

大苞鞘石斛化学成分及细胞毒活性研究

目的研究大苞鞘石斛Dendrobium wardianum的主要化学成分及部分化合物的肿瘤细胞毒活性。方法应用多种色谱分离技术,结合半制备液相色谱对化合物进行分离纯化,通过核磁共振谱、质谱、薄层色谱对照等鉴定化合物结构;MTS法检测部分化合物的肿瘤细胞毒活性。结果从大苞鞘石斛中分离得到16个化合物,分别鉴定为愉悦石斛素(1)、钩状石斛素(2)、反式-阿魏酸二十烷基酯(3)、反式-阿魏酸二十二烷基酯(4)、对香豆素酸二十四烷基酯(5)、4-羟基-3-甲氧基肉桂醛(6)、二氢松柏醇(7)、3,7-二甲氧基-5-羟基-1,4-菲醌(8)、3-乙氧基-5-羟基-7-甲氧基-1,4-菲醌(9)、4-甲氧基-9,10-二氢菲-2,7-二醇(10)、5,7,4′-三羟基二氢黄酮(11)、5,7,4′-三羟基-3′,5′-二甲氧基二氢黄酮(12)、苜蓿素(13)、3,5,4′-三甲氧基-4-羟基联苄(14)、3,5,3′-三甲氧基-4′-羟基联苄(15)和3,3′-二甲氧基-4,5′-二羟基联苄(16)。对所得化合物3、6、8、9、11、14、15进行了肿瘤细胞毒活性筛选,其中化合物6、8有一定的体外肿瘤生长抑制活性。结论化合物3、5、6为首次从石斛属植物中分离得到,化合物10、11、14、15为首次从大苞鞘石斛中分离得到;大苞鞘石斛活性成分有待挖掘。

大苞鞘石斛和铁皮石斛多糖提取及其免疫调节作用比较

为比较大苞鞘石斛与铁皮石斛多糖对机体免疫调节作用的差异,经提取纯化,分别得到2种石斛不同纯度的粗多糖、精多糖和多糖水洗组分。对昆明小鼠灌胃上述6种纯度的多糖,观察其对小鼠免疫器官指数、迟发性变态反应、抗体积数和小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力等免疫学指标的影响。结果表明,纯度最高的大苞鞘石斛多糖水洗组分与铁皮石斛多糖水洗组分含有7种单糖,其中甘露糖和葡萄糖的含量均最高。两种石斛同等纯度多糖的各指标值相近,且随多糖纯度的提高,各指标值逐渐增大,免疫活性逐渐增强。经两种石斛的多糖水洗组分灌胃后,两组小鼠的胸腺指数和脾脏指数相近,耳肿胀率、抗体积数和腹腔巨噬细胞对鸡红细胞吞噬指数差异虽不显著,但均显著高于对照。上述结果表明,与铁皮石斛多糖相比,大苞鞘石斛多糖具有与其相近的免疫调节作用,因而具有良好的药用开发价值。

石斛属27种药用植物的性状鉴定特征比较

目的比较中国西南地区产27种石斛属药用植物药材(茎)的性状特征,为石斛药材质量标准的制定提供依据。方法考察药材来源,并比较性状鉴定。结果描述了27种石斛属药用植物药材的性状鉴别特征。结论可为石斛属药用植物药材的准确鉴定提供参考。