大蒜皂苷研究进展

皂苷类化合物是大蒜的主要活性成分之一,其种类、结构、生物活性及作用机理尚不十分明确。文中综述了近年文献报道的大蒜皂苷类型、结构、生物活性及药用机理,介绍了大蒜皂苷的抗菌、抗氧化损伤、降低胆固醇、抗血小板聚集和提高纤溶活性等功能;并对皂苷成分分析方法进行了综述,为今后有关的研究工作提供参考。

大蒜皂苷对照品制备及比色法测定大蒜皂苷提取物中总皂苷含量

目的提取分离大蒜中皂苷成分Proto-iso-eruboside-B(PIEB),以其为对照品建立大蒜皂苷提取物的含量测定方法。方法采用大孔吸附树脂、硅胶、反相硅胶柱色谱组合分离技术,制备大蒜皂苷对照品,光谱法鉴定其结构,薄层色谱法和高效液相色谱面积归一化法定性、定量检测其纯度,并以其为对照品,硫酸-甲醇比色法测定大蒜皂苷提取物中总皂苷含量。结果经结构鉴定,制备的对照品为PIEB,纯度>98%。PIEB在19.44～58.32μg范围内含量与吸光度呈良好线性关系,回归方程为:Y=0.012X+0.002,r=0.999 5(n=6),平均回收率为98.26%,相对标准偏差为2.5%。结论该制备工艺所得化合物纯度达到中药化学对照品的质量要求。含量测定方法准确性、重复性良好,可作为大蒜皂苷提取物中总皂苷的质量控制方法。

用LC-MS/MS法测定大鼠血浆中大蒜皂苷PIEB的浓度及其体内药动学研究

目的采用高效液相色谱-质谱(LC-MS/MS)法测定大鼠血浆中大蒜皂苷提取物中大蒜皂苷Proto-iso-eruboside-B(PIEB)的浓度,并研究其药动学特点。方法采用Athena C18-WP色谱柱(50mm×2.1mm,3μm),流动相为乙腈-水(含0.05%甲酸)体系,梯度洗脱,流速0.3ml/min。大鼠分别给予低、中、高剂量大蒜皂苷总提取物灌胃及静脉注射单一剂量大蒜皂苷总提取物,给药后在不同的时间点眼眶取血,采用LC-MS/MS法测定血药浓度;采用InnaPhase Kinetica2000TM软件计算相关药动学参数。结果大蒜皂苷提取物中的PIEB成分在10～2 430ng/ml范围内具有良好的线性关系(r=0.999 1);方法学考察均符合要求;大鼠静脉给药大蒜皂苷总提取物(50 mg/kg)后,PIEB即刻在体内达到最大血药浓度,其t1/2为322min左右,平均驻留时间(MRT)为270min;口服灌胃低、中、高浓度大蒜皂苷总提取物后,PIEB的AUC、cmax等随给药剂量的增加而增大,大蒜皂苷提取物中的PIEB成分在大鼠体内的药动学过程符合线性药动学特征。结论本方法操作简便、结果准确、重复性好,适用于测定大鼠血浆中大蒜皂苷PIEB的浓度。

比色法测定大蒜总皂苷含量

目的建立一种大蒜总皂苷含量的测定方法。方法以薯蓣皂苷元为对照品,香草醛-冰醋酸-高氯酸比色法测定大蒜总皂苷含量。结果对照品在1.67-13.34μg/ml范围内与吸光度呈良好线性关系,回归方程为：A=0.014C-0.012（R=0.999）,平均回收率97.8%,相对标准偏差（relative standard deviation,RSD）=1.98%。方法学考察各项指标均符合要求。结论总皂苷测定方法简单,准确性、稳定性和重复性良好,可作为大蒜总皂苷质量控制手段。

大蒜有效成分组方的药效学实验研究

目的观察大蒜有效成分组方(Y为大蒜油、Z为大蒜皂苷、D为大蒜多糖)对接种S180小鼠生命延长率和抗炎作用的疗效。方法实验1:昆明小鼠,雄性,80只,按照随机数字表法分为模型组,溶剂组,环磷酰胺组,大蒜油组,受试药物(Y+Z+D)高、次高、中、低剂量,共8组,每组各10只。各组给予相应药物10 d后开始观察并记录各组小鼠的存活时间、生命延长率。实验2:昆明小鼠72只,雌雄各半,将小鼠按照随机数字表法分为6组,即模型组,阿司匹林组,大蒜YZD高、次高、中、低剂量组(每组各12只,雌雄各半),以上各组给予相应的药物,每天1次,连续给药7 d。末次给药2 h后将小鼠处死,剪下两耳称重,计算肿胀度和肿胀抑制率。结果实验1结果显示,(Y+Z+D)高剂量组和大蒜油组的动物存活天数与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05);(Y+Z+D)高剂量组和大蒜油组的动物存活天数长于其他各组,差异有统计学意义(P<0.05);(Y+Z+D)高剂量组和大蒜油组的生命延长率亦高于其他各组。实验2结果显示,大蒜YZD高剂量具有一定的抗炎的作用。结论大蒜有效成分组方(Y+Z+D)高剂量具有一定的抗肿瘤和抗炎作用。

大蒜有效部位组合物对模型大鼠胃癌前病变的疗效和作用机制

目的:研究大蒜油-大蒜皂苷-大蒜多糖组合物治疗胃癌前病变的疗效,阐明该组合物治疗胃癌前病变的作用机制。方法:将大鼠随机分为空白对照组(n=14)和造模组(n=144)。于造模22周时,将造模组大鼠再随机分为6组:模型组(n=24)、大蒜油对照组(n=24)、胃复春对照组(n=24)、组合物高、中、低剂量组(3×24)。连续给药13周后处死。取材后,在光镜下观察胃黏膜的病理学变化。同时,采用电化学发光法检测各组大鼠离心血浆中的3种肿瘤标志物CEA、CA199、CA724的水平。运用Western Blotting和Real-time PCR技术检测胃癌前病变大鼠胃组织中TGF-β1和Smad4的蛋白和mRNA表达情况。结果:1)组合物高剂量(2.38 g/kg)组能够显著地改善胃癌前病变大鼠胃黏膜的病理变化。2)组合物高剂量(2.38 g/kg)组能够明显降低胃癌前病变大鼠血清中的CEA、CA199、CA7243种肿瘤标志物的水平。3)组合物高剂量(2.38 g/kg)组能够下调TGF-β1 mRNA及其蛋白表达水平,而能够上调Smad4 mRNA及其蛋白表达水平。结论:组合物高剂量(2.38 g/kg)组能够显著改善胃癌前病变大鼠胃黏膜的病理变化,降低血清肿瘤标志物水平,调节TGF-β1和Smad4的蛋白表达,从而纠正TGF-β/Smads信号转导通路的异常变化,有效地治疗胃癌前病变。

基于NIRS和UV-Vis的大蒜冻干粉中活性成分含量测定

目的建立大蒜冻干粉中蒜氨酸、大蒜多糖、大蒜皂苷的含量测定方法,以期为其质量控制提供依据。方法采用近红外光谱法(NIRS)建立大蒜冻干粉中蒜氨酸的定量校正模型,并对模型进行评价;采用紫外-可见分光光度法(UV-Vis)建立大蒜多糖及大蒜皂苷的含量测定方法。结果蒜氨酸定量校正模型的r为0.9987,校正均方根误差(RMSEC)为0.0245,交叉验证均方根误差(RMSECV)为0.104,蒜氨酸定量校正模型的平均回收率为99.72%。15批大蒜冻干粉中大蒜多糖、大蒜皂苷的平均含量分别为70.42%、1.96%。结论建立了大蒜冻干粉中蒜氨酸含量测定的近红外定量校正模型,为生产过程中大蒜冻干粉中蒜氨酸含量的快速测定奠定了基础;大蒜多糖、大蒜皂苷含量测定方法的建立能够为补充大蒜冻干粉的质量控制标准提供依据。

大蒜总多糖、总皂苷的提取纯化工艺

目的:优选大蒜总多糖、总皂苷的提取纯化工艺。方法:采用双提法提取大蒜油和大蒜总多糖,乙醇提取总皂苷,以大蒜总多糖、总皂苷收得率为考察指标,对料液比、提取时间、提取次数以及药液浓缩浓度等进行L9(34)正交试验和单因素考察。结果:优选大蒜总多糖提取工艺条件为加5倍量水,提取3次,每次1 h;纯化条件为药液浓缩至含生药1.0 g.mL-1。85%乙醇沉淀;总皂苷提取工艺为加5倍量乙醇提取2次,每次1 h;纯化条件为药液减压回收乙醇至无醇味(53℃相对密度1.065),加水至药材质量的0.8倍(1.25 g.mL-1)。结论:该工艺稳定,利用一批大蒜原料,可同时得到大蒜油、大蒜总多糖和总皂苷,大蒜总多糖提取物出膏率为21.36%,含多糖51.36%,大蒜总皂苷提取物出膏率为6.04%,含总皂苷3.79%。

大蒜多糖及皂苷的多指标优化提取工艺研究

目的:制备大蒜多糖和大蒜皂苷。方法:采用水提醇沉超声法,选取醇提浓度、温度、时间、超声功率4个因素,运用正交设计筛选大蒜多糖的最佳提取工艺。采用苯酚-硫酸法对大蒜多糖进行含量测定,茴香醛—硫酸法对大蒜皂苷进行含量测定。结果:通过上述方法优化多糖和皂苷的制备工艺为50%乙醇处理,超声时间2 h,提取温度20℃,超声功率40%条件下提取效果最佳,多糖收率为28%,多糖含量可达95%,皂苷收率为0.7%,皂苷含量为35%。结论:优化工艺条件提取大蒜多糖和皂苷产量和纯度高,简单可行。

比色法测定大蒜提取物中大蒜总皂苷含量

目的:建立一种大蒜提取物中总皂苷含量的测定方法。方法:以知母皂苷A-Ⅲ为对照品,香草醛-高氯酸比色法测定大蒜提取物中总皂苷含量。结果:知母皂苷A-Ⅲ在20.16～181.44μg与吸光度呈良好线性关系,回归方程为Y=4.839X+0.066,r=0.999 5(n=9),平均回收率100.6%,RSD 1.5%。结论:该方法简单,准确性、重复性良好,可作为大蒜提取物中总皂苷质量控制方法。

大蒜3个有效部位联合应用对人胃癌MKN45细胞的杀伤作用

目的:观察大蒜有效部位及其组合物对人胃癌MKN45细胞杀伤的作用。方法:采用体外大鼠脾淋巴细胞增殖实验和MTT法测定细胞杀伤作用,筛选出具有免疫增强作用和细胞毒作用的大蒜有效部位进行组合,并对大蒜有效部位及其组合物对肿瘤细胞杀伤作用进行对比,运用正交试验筛选出大蒜3个有效部位联合应用对人胃癌MKN45细胞杀伤作用的最佳配比。结果:大蒜总多糖+大蒜总皂苷(2#+5#)对大鼠淋巴细胞增殖具有明显的促进作用,大蒜油、大蒜总多糖、大蒜总皂苷(1∶1∶1)的联合应用,其杀伤肿瘤细胞的作用(IC50 13.3μg.mL-1)明显优于同等剂量的2个有效部位组合及大蒜油的单独用药(IC50 35μg.mL-1)。对MKN45细胞杀伤作用的顺序为大蒜油>大蒜多糖>大蒜总皂苷,3个有效部位组合最佳配比为大蒜油∶大蒜多糖∶大蒜总皂苷1∶2∶1。结论:3个部位联合应用对肿瘤细胞的杀伤作用最强,并且组合物最大优势是在扶正、祛邪的同时,可能减少大蒜油的刺激性。

大蒜3个有效部位配伍对3种人胃癌细胞的杀伤作用

目的:观察大蒜3个有效部位组合物对3种人胃癌细胞的杀伤作用,筛选有效部位组合物最佳配伍比例。方法:以大蒜3个有效部位(大蒜油、大蒜总多糖、大蒜总皂苷)为研究对象,选用L16(45)正交表设计分组、给药,以胃癌细胞代谢MTT活力(抑瘤百分率)作为考察指标,采用SPSS软件对实验数据进行处理。结果:大蒜3个有效部位对MKN45细胞杀伤作用的主次顺序为大蒜油(1#)>大蒜总多糖(2#)>大蒜总皂苷(5#),其最佳配比为1#∶2#∶5#=1∶20∶10。大蒜3个有效部位对AGS细胞抑制率影响无明显差别,其最佳配比为1#∶2#∶5#=1∶13.3∶3.3。大蒜总皂苷对人胃癌HGC-27细胞抑制率的影响显著(P<0.01),影响的主次顺序为大蒜总皂苷>大蒜油>大蒜总多糖,其最佳配比为1#∶2#∶5#=1∶200∶50。结论:3种人胃癌细胞对大蒜3个有效部位组合物的杀伤作用的敏感性不同,3个有效部位组合对3种人胃癌细胞杀伤作用的最佳配比浓度亦不相同。