大血藤总酚酸调控微小RNA-155对缺氧复氧心肌细胞的细胞活性凋亡及氧化应激的影响

目的探讨大血藤总酚酸对缺氧复氧心肌细胞的细胞活性凋亡及氧化应激的影响及分子机制。方法2019年12月至2020年8月,心肌细胞H9C2分为对照组(正常培养)、缺氧复氧组(缺氧4 h,复氧12 h)、大血藤总酚酸低、中、高浓度组(造模前分别用12.5、25.0、50.0 mg/L大血藤总酚酸培养2 h,然后进行缺氧复氧处理)、大血藤总酚酸-H+NC组(将miR-155模拟物阴性对照转染至H9C2中再用50.0 mg/L大血藤总酚酸培养,最后进行缺氧复氧处理)、大血藤总酚酸-H+miR-155 mimic组(将miR-155模拟物转染至H9C2中再用50.0 mg/L大血藤总酚酸培养,最后进行缺氧复氧处理)。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测微小RNA-155(miR-155)表达水平;MTT法检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹法(Western blotting)检测蛋白表达;试剂盒检测细胞培养液中肌酸激酶、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛含量。结果缺氧复氧处理的心肌细胞中miR-155表达水平升高,细胞吸光度降低,心肌细胞凋亡率升高,活化胱天蛋白酶-3(cleaved-caspase-3)表达水平升高,胱天蛋白酶-3前体(pro-caspase-3)表达水平降低,心肌细胞中肌酸激酶、LDH、丙二醛含量升高(P<0.05)。大血藤总酚酸中、高浓度处理后缺氧复氧诱导的心肌细胞中miR-155表达水平降低,细胞吸光度升高,心肌细胞凋亡率降低,cleaved-caspase-3表达水平降低,pro-caspase-3表达水平升高,心肌细胞中肌酸激酶、LDH、丙二醛含量降低,且呈浓度依赖性(P<0.05);而大血藤总酚酸低浓度组各数据无显著变化。过表达miR-155可逆转大血藤总酚酸对缺氧复氧诱导的心肌细胞活性、凋亡[(22.73±0.58)%比(13.55±0.33)%,P<0.05]和肌酸激酶[(79.19±2.78)U/L比(41.22±2.31)U/L,P<0.05]、LDH[(44.20±2.80)U/L比(24.77±2.46)U/L,P<0.05]、丙二醛[(24.05±1.28)μmol/L比(12.73±0.59)μmol/L,P<0.05]含量的影响。结论大血藤总酚酸可能通过下调miR-155抑制缺氧复氧心肌细胞的凋亡及氧化应激。

大血藤总酚酸对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织氧化应激水平和能量代谢的影响

目的:探讨大血藤总酚酸对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织氧化应激水平和能量代谢的影响。方法:实验分为7组:假手术组、模型组、尼莫地平组(20 mg·kg^-1)、脑络通组(500 mg·kg^-1)以及大血藤总酚酸大、中、小剂量组(300、150和75 mg·kg^-1),灌胃给药,每天1次,连续7 d。末次给药1h后,线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,假手术组除外,其他各组缺血2 h后拔线以实现再灌注,再灌注24 h后,TTC染色脑组织,拍照并计算梗死面积,并测定脑组织中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平和ATP酶(Na^+-K^+-ATP酶和Mg^2+-ATP酶)活力。结果:与模型组比,尼莫地平,脑络通和不同剂量大血藤总酚酸均能不同程度减少脑梗死面积、降低脑匀浆MDA水平,升高SOD水平和增加ATP酶活力(P<0.05或P<0.01)。大血藤总酚酸对脑缺血再灌注大鼠的改善作用呈剂量依赖性,且大剂量大血藤总酚酸对脑梗死面积的降低作用和脑组织中SOD、MDA的改善作用与脑络通作用相似,但弱于尼莫地平的作用;对脑组织中ATP酶活力的改善作用与尼莫地平作用相似,但弱于脑络通的作用。结论:局灶性脑缺血再灌注大鼠模型复制成功。大血藤总酚酸具有保护大鼠脑缺血再灌注损伤的作用,该作用可能与其具有的抗氧化与改善脑组织能量代谢有关。