射流空化对大豆分离蛋白-磷脂酰胆碱乳化特性的影响

为探究射流空化对大豆分离蛋白(soy protein isolates,SPI)-磷脂酰胆碱(phosphatidylcholine,PC)复合体系乳化特性影响,采用荧光光谱表征复合体系构象变化,并分析乳层析指数、粒径、微观结构、表面疏水性和乳化活性及乳化稳定性解析射流空化对SPI-PC复合乳液结构变化及理化/功能性质的影响。结果表明:射流空化能显著改善复合乳液理化性质及乳化性等功能特性,与SPI相比,0.2 MPa、10 min处理组SPI-PC复合乳液的乳化活性指数和乳化稳定性指数分别增加了82.7%和9.43倍。通过动态光散射和光学显微镜验证了射流空化处理SPI-PC较未射流空化处理样品的平均粒径减小,且表面疏水性提高,其中空化压力0.2 MPa、空化时间10 min时,复合乳液的平均粒径最低,表面疏水性最高;说明射流空化处理会使SPI疏水基团暴露,使SPI与PC之间的相互作用增加。荧光光谱分析说明空化作用力对SPI产生了猝灭作用。

两种大豆蛋白-磷脂酰胆碱纳米乳液粉末化特性研究

将超声处理及高压均质后的纳米乳液,直接利用真空冷冻干燥法制备了大豆蛋白-磷脂酰胆碱的乳化粉末,并进一步通过扫描电子显微镜、激光粒径分析仪、红外光谱等手段对真空冷冻干燥粉末以及复原乳液的物理化学等特性进行研究。研究发现冻干粉末复原乳液水复溶性良好,基本保持了与原始乳液相同的纳米级粒径。扫描电子显微镜及冻干粉末的粒径分布显示超声和高压均质制备的纳米乳液粉末结构致密均匀,表面无裂缝和孔隙,且高压均质制备粉末的表面更为平整,粒径分布总体呈现单峰分布,粒径平均值仅为6.13μm。使用超声和高压均质制备的纳米乳液冻干粉末的包埋产率和效率均达到90%以上,同时超声制备的纳米乳液冻干粉末更有利于β-胡萝卜素的包埋,更好地防止β-胡萝卜素损失。采用红外光谱学实验验证后发现,高压均质制备纳米乳液粉末的蛋白α-螺旋与β-折叠结构含量较低。与大豆蛋白-磷脂酰胆碱纳米乳液相比,真空冷冻干燥粉末的储藏稳定性及货架期显著提高。

大豆蛋白-磷脂酰胆碱纳米乳液高压均质工艺研究

以高压均质技术制备大豆蛋白-磷脂酰胆碱纳米乳液,对其特性及稳定性进行试验分析,通过单因素响应面优化确定大豆蛋白-磷脂酰胆碱复合成稳定纳米乳液最优配比:大豆蛋白添加量1.5%,大豆磷脂酰胆碱添加量0.22%,高压均质压力100MPa,此条件下大豆蛋白-磷脂酰胆碱纳米乳液平均粒径217.43nm,TSI为3.02,乳化产率为93.35%。

三氧化二铝柱层析法分离大豆磷脂中磷脂酰胆碱的研究

研究了三氧化二铝柱层析法 ,以 95 %乙醇为洗脱剂从大豆磷脂中分离磷脂酰胆碱的方法。通过本方法可使磷脂酰胆碱的含量及柱上的洗脱得率达 90 %以上。为用色谱法工业化生产磷脂酰胆碱提供了实验依据。

超临界流体分离大豆磷脂酰胆碱

研究了超临界流体CO2 /乙醇分离大豆磷脂酰胆碱的影响因素。结果表明 :在温度 4 0℃- 6 0℃ ,压力在 15MPa - 2 5MPa ,乙醇浓度在 2 % - 2 0 %之间 ,较低的温度 ,较高的压力和较高的乙醇浓度有利磷脂酰胆碱含量的提高。在温度 4 0℃、压力 2 5MPa、乙醇浓度 15 % (v/v)下 ,磷脂酰胆碱含量可达 89% (TLC扫描法 )

超声波作用于大豆分离蛋白-磷脂复合体系的流变性和拉曼光谱变化

研究超声波低功率(100 W)、中功率(300 W)和高功率(450 W)在不同的时间条件下(12、24 min)对大豆分离蛋白-磷脂复合体系结构和功能性质的影响。扫描电子显微镜及流变学实验显示低、中功率超声波处理形成的凝胶结构致密均匀、弹性模量G’较高,且300 W条件下处理24 min时,样品凝胶性质最好。采用光谱学实验验证后发现,大豆分离蛋白-磷脂复合体系构象的变化是影响其凝胶性质的主要因素;拉曼光谱实验结果表明:超声波改变了大豆分离蛋白的二级结构以及色氨酸、酪氨酸所处的微环境,暴露疏水性基团,使其更易与大豆卵磷脂发生疏水相互作用,且低、中功率条件下超声波对大豆分离蛋白和磷脂交互作用的影响较大。超声波功率进一步增大(450 W)使大豆分离蛋白发生不溶性聚集,减弱了与磷脂间的相互作用,复合体系的功能性质随之下降。

多烯磷脂酰胆碱对非酒精性脂肪性肝病模型大鼠肝脏SREBP-1c与ABCA1蛋白表达的影响

目的观察多烯磷脂酰胆碱对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)模型大鼠肝脏SREBP-1c、ABCA1蛋白表达的影响。方法采用高脂饲料建立SD大鼠NAFLD模型,并用多烯磷脂酰胆碱胶囊进行干预治疗4周,观察该药对大鼠血脂、肝脏脂肪含量的影响,并用免疫组化法观察药物对大鼠肝脏SREBP-1c、ABCA1蛋白表达的影响。结果空白组、观察组肝脏TG、TC含量明显低于模型组(P<0.01);同时SREBP-1c蛋白表达水平也明显低于模型组(P<0.01),但观察组与空白组比较差异无统计学意义;而ABCA1蛋白表达水平均明显高于模型组(P<0.01)。结论对肝脏组织SREBP-1c蛋白表达的下调,以及对ABCA1蛋白表达的上调,可能是多烯磷脂酰胆碱改善NAFLD的重要机制。

乙醇对柱层析分离大豆磷脂中磷脂酰胆碱的影响

研究了不同体积分数的乙醇溶液对柱层析分离大豆磷脂中磷脂酰胆碱的影响 ,为工业化色谱法生产磷脂酰胆碱提供了一定的依据 .不同体积分数乙醇在不同洗脱体积下得到的样品 ,其磷脂酰胆碱的质量分数为 6 0 %～ 10 0 % .

大豆磷脂酰胆碱分离、纯化和检测方法

综述大豆磷脂酰胆碱分离提纯,包括低级醇萃取,柱层析分离和超临界流体萃取等方法。同时也介绍磷脂酰胆碱检测方法,主要是准确度高的高效液相色谱法和新兴的核磁共振法。

葛根素对溶血磷脂酰胆碱诱导血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶-9表达的影响

目的:观察葛根素对血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响,探讨葛根素抗动脉粥样硬化(AS)的作用机制。方法:用不同浓度(1.0～10.0mg/L)的溶血磷脂酰胆碱(LPC)孵育体外培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞24h,观察培养上清液中MMP-9含量的变化。不同浓度(10-6～10-4mol/L)的葛根素预先孵育平滑肌细胞4h,然后加入LPC(5.0mg/L)作用24h,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测上清液中MMP-9含量,实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测平滑肌细胞MMP-9 mRNA的表达,蛋白印迹法(Western blot)检测NF-κB p65蛋白的表达。结果:LPC能明显增加上清液中MMP-9的含量,而预先应用不同浓度的葛根素干预后,MMP-9含量、mRNA表达以及NF-κB p65蛋白的表达水平均明显降低,并且具有剂量依赖性。结论:LPC通过激活NF-κB p65而使平滑肌细胞MMP-9表达增强,而葛根素对上述效应具有抑制作用。

大豆粗磷脂中磷脂酰胆碱的分离纯化研究

为了筛选出从醇溶性大豆磷脂中分离纯化大豆磷脂酰胆碱的最佳分离纯化工艺,本文了采用正交设计试验筛选提取大豆磷脂酰胆碱的最佳工艺。结果表明大豆磷脂酰胆碱最佳提取工艺为:按1∶10的料水比进行加热,在78℃恒温下4 h回流提取,重复2次。大豆磷脂酰胆碱的进一步的精制方法为葡聚糖凝胶Sephadex LH-20凝胶柱层析法,并且考察了葡聚糖凝胶Sephadex LH-20对大豆磷脂酰胆碱的纯化能力。首先采用无水乙醇作为葡聚糖凝胶Sephadex LH-20凝胶柱层析洗脱液纯化大豆磷脂酰胆碱,然后将所得的大豆磷脂酰胆碱干燥,最后通过高效液相色谱法对所得的大豆磷脂酰胆碱进行含量测定。结果表明,乙醇提取法以及葡聚糖凝胶Sephadex LH-20柱层析法相结合的纯化过程对大豆磷脂酰胆碱分离纯化效果良好,此外该方法收率高,能够得到纯度为90.12%的大豆磷脂酰胆碱。

大豆磷脂中磷脂酰胆碱的分离工艺研究

大豆磷脂中含有１９％－２５％的磷脂酞胆碱，本文研究了从大豆粗磷脂中磷脂酰胆碱的分离工艺，得到了最佳的分离工艺参数。

氟伐他汀对溶血磷脂酰胆碱致内皮细胞粘附分子和基质金属蛋白酶-9表达的影响

目的：观察氟伐他汀对内皮细胞粘附分子（intercellular adhesion molecule，ICMA）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达的影响，探讨氟伐他汀抗动脉粥样硬化（AS）的作用机制。方法：体外培养人脐静脉内皮细胞，待细胞生长到融合状态时加入溶血磷脂酰胆碱（lysophosphatidylcholine，LPC）5mg／L作用0、12、24、48h，观察LPC对ICAM和MMP-9表达的影响。不同浓度（10^-7 -10^-5mol／L）的氟伐他汀预先孵育20min，然后加入LPC（5nvdL）作用24h，用免疫细胞染色法检测核因子-κBp65（NF-κBp65）、ICAM-1、血管细胞粘附分子-1（vasettlar cell adhesion molecule-1。VCAM-1）蛋白和用RT-PCR检测MMP-9mRNA的表达水平。结果：LPC能明显增加ICAM-1、VCAM-1和MMP-9的表达，相关分析表明，NF-κBp65与ICAM-1、VCAM-1和MMP-9的表达呈直线相关关系。而预先应用不同浓度的氟伐他汀干预后，上述效应明显减弱，并且具有剂量依赖性。结论：LPC通过激活NF-κBp65而导致内皮细胞ICAM-1、VCAM-1和MMP-9的表达增强，而氟伐他汀对上述效应有抑制作用。

大豆磷脂酰胆碱分子类型的研究

研究了HPLC TLC/HPLC MS对大豆磷脂酰胆碱中磷脂酰胆碱分子种类的分离鉴定方法 ,结果表明此法能很好的分离大豆磷脂酰胆碱的分子种类 ,并通过MS能对磷脂酰胆碱的分子种类加以鉴定。在用HPLC对不同磷脂酰胆碱分子种类分离后 ,可以进一步对不同分子种类的磷脂酰胆碱含量进行测定。该方法用于PC 90的分子类型研究 ,得到在PC 90中至少含有 18∶2 / 18∶2 PC ,18∶3/ 18∶3 PC ,16∶0 / 18∶2 PC ,16∶0 / 18∶3 PC和 16∶0 / 18∶1 PC等 5种分子类型 ,并在 2 0 5nm归一化法测得 18∶2 / 18∶2 PC含量为 6 4%。

大豆分离蛋白与卵磷脂间相互作用对O/W型乳状液稳定性的影响

研究大豆分离蛋白与卵磷脂的复合比例及相互作用对乳化体系稳定性及功能性质的影响。结果显示:乳状液的乳化活性和粒径分布等性质受大豆分离蛋白与卵磷脂比例分配的影响较大。当大豆分离蛋白与卵磷脂间的质量比为10∶1时,复合体系的乳化活性较高(98.1 m^2/g),同时乳液的体积平均直径D_(4,3)最小(13.34μm),乳液双峰分布程度较低。乳化稳定性和ζ-电位测试结果显示,复合体系中大豆分离蛋白与卵磷脂比例为1∶1或100∶1都不利于体系稳定,此时激光共聚焦显微镜观测乳液出现相分离和不规则非球形液滴。这说明大豆分离蛋白与卵磷脂作为复合乳化剂具有最适配比,在该比例下大豆分离蛋白与卵磷脂间的相互作用对食品级水包油(oil-in-water,O/W)乳状液的稳定性是有利的。

离心薄层色谱法提取纯大豆磷脂酰胆碱的研究

采用离心薄层色谱法 (CTLC)提取大豆磷脂酰胆碱 (SPC) ,速度快 ,溶剂消耗量少 ,制备样品量大 ,成本低。研究旨在找到 CTLC的最佳控制条件。产品鉴定采用 HPLC和 TLC,证明产品不含中性杂质和其他磷脂 ,原子吸收测定锌含量质量分数不高于 0 .0 55× 1 0 -6。

多烯磷脂酰胆碱对放射性肺损伤大鼠MCP-1和TGF-β1表达的影响

目的:探讨多烯磷脂酰胆碱(PPC)对放射性肺损伤大鼠TNF-α和转化生长因子-β1(TGF-β1)表达水平的影响。方法:单次剂量30Gy照射大鼠右肺建立放射性肺损伤模型。96只大鼠随机分为4组:空白对照组(A组)、PPC照射组(B组)、PPC佯装组(C组)及生理盐水(NS)佯装组(D组),每组24只。A,B组于照射后分别予NS和PPC腹腔注射1周;C、D组于佯装照射后分别予PPC和NS腹腔注射1周。照射后第7,30,90天后采集血标本并离心取血清,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中TGF-β1和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的含量。结果:A组在放疗后3个时间点的血清TGF-β1和MCP-1水平均明显高于D组(P<0.05),B组在放疗后3个时间点的血清TGF-β1和MCP-1水平均明显高于C组(P<0.05),并且B组大鼠血清TGF-β1水平在放疗后30天明显低于A组(P<0.05),而血清MCP-1水平则在放疗后第7天明显低于A组(P<0.05)。结论:PPC可降低放射性肺损伤大鼠血清TGF-β1和MCP-1的表达水平。

大豆中磷脂酰胆碱提取工艺及检测方法的优化研究

试验建立了聚能式脉冲超声提取-高效液相色谱-蒸发光散射测定大豆中磷脂酰胆碱的分析方法。通过单因素试验,选定了液料比、超声功率比和全程时间3个因素。根据Box-Benhnken设计,采用3因素3水平响应面法优化了最佳提取条件:液料比50:1mL/g、超声功率比62%、全程时间11.0 min。考察不同流动相组成对分离的影响,优化后的色谱条件:硅胶柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为水:异丙醇:三乙胺:乙酸(23:77:0.08:1.5),流速1.0 mL/min;蒸发光散射检测器:漂移管温度100℃、载气(氮气)流速2.0 L/min。磷脂酰胆碱在20~320 mg/L范围内呈良好线性,相关系数为0.9992,加标回收率为92.7%~95.0%,检出限为0.18 mg/g。结果表明,该方法简便快速、结果准确、重现性好,适合检测大豆中磷脂酰胆碱。

掺入大肠杆菌膜中的磷脂酰胆碱(PC)影响青霉素β-内酰胺酶的分泌

【目的】为了研究磷脂酰胆碱（PC）在原核生物细胞中的生物学作用，探讨PC对细菌膜系统的功能的影响。【方法】使用p^tac85质粒作载体，将螺旋菌pcs基因导人E．coli Top10细胞构建了E．coli Top10 pcs^＋菌株，并在特定的条件下培养细菌，使细菌膜磷脂中合成30％左右的磷脂酰胆碱。然后再使用抗生素抗性分析、β-内酰胺酶的酶活测定以及Western blot杂交技术，分析质粒编码的β-内酰胺酶从细胞质到细胞间质的分泌情况。【结果】抗生素抗性分析发现，高浓度的氨苄青霉素抑制E．coli Top10 pcs^＋细菌的生长的氨苄青霉素剂量低于对照组，其半致死剂量IC50在700～800μg／mL之间。酶活检测显示E．coli Top10 pcs^＋细菌周质内β-内酰胺酶的酶活性只有对照菌株的1／5，Western blot进一步分析发现周质内β-内酰胺酶的含量也为对照菌株的1／5。由此可见，周质内低含量的β-内酰胺酶是导致E．coli Top10 pcs^＋细菌氨苄青霉素抗性降低的原因。【结论】掺人细菌膜磷脂双分子层的PC影响β-内酰胺酶通过Sec转运途径从细胞质分泌到细菌周质空间内，提示细菌磷脂酰胆碱可能在调节蛋白转运和分泌方面起着重要的作用。

超高效液相色谱-高分辨质谱法测定磷脂酰胆碱的含量

建立了用超高效液相色谱-高分辨质谱（UPLC-HRMS）测定磷脂酰胆碱含量的分析方法。样品直接用乙醇溶解,超声萃取20 min,然后取适量提取液于8 000 r/min高速离心5 min,最后有机膜过滤后用UPLC-HRMS检测。该方法的标准曲线在相关浓度范围内呈良好的线性,检测线性范围为2.31~231 mg/L,线性相关系数为R^2=0.999 8。磷脂酰胆碱的检出限为1.0 mg/kg,定量限为2.3 mg/kg。采用阴性饲料粉末进行加标回收实验,3个浓度水平的添加样品均重复测定8次,加标回收率为88.19%~93.50%,其RSD均小于10%,得到较好的精密度。用该方法可测定饲料粉末、大豆磷脂和大豆磷脂软胶囊中磷脂酰胆碱的含量,方法灵敏度高、重复性好、定量准确。