大豆异黄酮β-葡萄糖苷酶产生菌的选育及产酶条件研究

以豆豉为材料筛选产大豆异黄酮-β葡萄糖苷酶的菌株为出发菌,通过UV和LiCl诱变育种,利用单因素和正交试验进行产酶条件研究,确定最佳工艺条件为:黄豆粉1%,酵母膏1%,麸皮2%,KH2PO40.1%,NaCl0.5%,起始pH值7.5,装液量30mL/300mL,发酵时间48h,发酵温度37℃,转速70r/min。测得酶活为5.49U/mL。

产大豆异黄酮β-葡萄糖苷酶菌株的筛选及酶学性质研究

从自然发酵酱醅中筛选到一株产大豆异黄酮β-葡萄糖苷酶的菌株MT-0204,通过生理生化反应和分子生物学技术鉴定其为黑曲霉。大豆异黄酮β-葡萄糖苷酶最适pH值在5.0～5.5之间;具有热敏性,45℃时酶活最高;K+、Ca2+、Fe2+、Mg2+和Mn2+可以提高该酶活性,Ag+和Hg+强烈抑制该酶的活性;Km值Vmax值分别是22.47mmol/L和5.2mmol/min·mg。

大豆异黄酮β-葡萄糖苷酶产生菌的选育及产酶条件研究

以豆豉为材料筛选产大豆异黄酮β-葡萄糖苷酶的菌株,并用京尼平甙法检测相对酶活。以相对酶活最高的野生菌为出发菌(经镜检为杆菌),通过UV和LiCl诱变育种,利用单因素和正交实验进行产酶条件研究确定最佳条件为:黄豆粉1%、酵母膏1%、麸皮2%、KH2PO40.1%、NaCl0.5%、起始pH值7.5、装液量30ml、发酵时间48h、发酵温度37℃、转速70r/min。在该条件下,用京尼平甙法测得该菌株的相对酶活为0.826,水杨苷法测得绝对酶活为5.49μg/ml。

红江橙果皮黄酮提取物对α-葡萄糖苷酶和胰脂肪酶的抑制作用

为进一步高值化利用红江橙(Citrus sinensis Osbeck cv.Hongjiang)果皮,该研究以黄酮提取量作为评价指标,采用超声辅助溶剂提取法和正交试验设计优化黄酮的提取工艺,并探讨黄酮提取物对α-葡萄糖苷酶和胰脂肪酶的抑制作用。结果显示,红江橙果皮黄酮类化合物的最佳提取工艺条件:提取温度为70℃、提取料液比为1:5、提取时间为50 min,该条件下黄酮提取量为82.57 mg/g,高于传统乙醇浸提法(23.56 mg/g)。红江橙果皮黄酮提取物(Citrus Sinensis Peel Flavonoids Extract,CSFE)对α-葡萄糖苷酶和胰脂肪酶的半抑制浓度IC50值分别为2.95 mg/mL和28.54 mg/mL;在10~50 mg/mL质量浓度范围内,CSFE对胰脂肪酶的抑制活性均呈现明显的质量浓度依赖性;其作用类型均均为混合型抑制。研究表明,红江橙果皮黄酮类提取物具有良好的α-葡萄糖苷酶抑制活性和胰脂肪酶抑制活性,可为其在降血糖和减肥功能活性的深入研究提供依据。

软枣猕猴桃黄酮体外抗氧化及α-葡萄糖苷酶抑制活性研究

软枣猕猴桃果实富含多糖、黄酮、VC等多种活性成分,为探究软枣猕猴桃黄酮的体外抗氧化活性和降血糖效用,该研究测定了软枣猕猴桃黄酮提取液对DPPH自由基、羟基自由基的清除作用和α-葡萄糖苷酶抑制作用。结果表明,软枣猕猴桃黄酮对DPPH自由基和羟基自由基的清除率均在70%以上,具有较好的抗氧化活性;软枣猕猴桃黄酮对α-葡萄糖苷酶的IC50为1.87 mg·m^(-1),在2~10 mg·m^(-1)抑制活性呈现一定的质量浓度依赖性。通过抑制动力学试验可知,软枣猕猴桃黄酮对α-葡萄糖苷酶的抑制机制为竞争性抑制,且抑制作用是可逆的。该研究为今后软枣猕猴桃黄酮类化合物的开发与利用提供理论依据。

大豆β-葡萄糖苷酶水解大豆异黄酮糖苷的研究

本文研究了大豆β-葡萄糖苷酶的提取、酶学性质以及其水解大豆异黄酮糖苷能力.该酶反应的最佳温度为45℃,最佳pH为5.00;在pH值为5.00～7.00时和低于40℃较稳定;70℃时酶活性基本全部丧失.初步纯化的大豆β-葡萄糖苷酶具有较高的水解大豆异黄酮糖苷能力.

β-葡萄糖苷酶以及益生菌生物转化大豆异黄酮糖苷的研究进展

大豆及其加工制品中以糖苷形式存在的大豆异黄酮不利于人体的消化吸收,难以发挥其生物保健作用。本文综述了利用β-葡萄糖苷酶生物转化大豆异黄酮糖苷以提高生物利用率的国内外研究进展情况,重点介绍了外源性β-葡萄糖苷酶和产β-葡萄糖苷酶益生菌对大豆异黄酮糖苷的转化作用。

黑曲霉β-葡萄糖苷酶水解大豆异黄酮糖苷研究

试验进行了黑曲霉生产β-葡萄糖苷酶研究;该黑曲霉β-葡萄糖苷酶有较高的热稳定性,50℃加热2h后酶活力减少为原来的92%。确立了该黑曲霉β-葡萄糖苷酶水解大豆异黄酮糖苷反应最佳方案;通过与酸水解和苦杏仁β-葡萄糖苷酶水解效率比较,发现该黑曲霉β-葡萄糖苷酶有较好的水解大豆异黄酮糖苷的能力。

固定化β-葡萄糖苷酶双相体系中水解大豆异黄酮

采用共价交联的方法将β-葡萄糖苷酶固定到球形壳聚糖上,并对固定化酶的性质进行表征,得出固定化酶的最佳反应条件:pH=5,温度40℃。据此用乙酸乙酯和pH=5缓冲溶液的双相体系,在40℃条件下水解大豆异黄酮。与游离酶相比,固定化酶在此双相体系中起到了稳定酶的作用;与单相体系相比,双相体系中产物的产率显著提高,反应速率也更快,且能有效去除粗品大豆异黄酮的异味。对于30%左右级别的大豆异黄酮,水解的两个主要水解产物(大豆苷元和染料木素)的产率都能达到70%。

里氏木霉β-葡萄糖苷酶水解大豆异黄酮糖苷的工艺研究

研究了里氏木霉β-葡萄糖苷酶的酶学性质，及其水解大豆异黄酮糖苷能力。该酶反应的最适温度为50℃，最佳pH为5．0；此酶在pH4．5～5．5之间和低于60℃下酶较稳定，在80℃基本无活力。采用里氏木霉β-葡萄糖苷酶水解的方法，将大豆异黄酮糖苷转化为苷元，以染料木苷水解率为检测指标。通过正交试验确定了该酶水解大豆异黄酮的工艺奈件为反应温度50℃、水解时间90min、水解介质pH4．5、加酶量20U，大豆异黄酮中染料木苷的水解率为99％。

乳酸菌β-葡萄糖苷酶水解大豆异黄酮的研究

利用乳酸菌液态发酵得到一种高活性的大豆异黄酮水解酶——乳酸菌β-葡萄糖苷酶,通过单因素试验及正交试验优化了乳酸菌β-葡萄糖苷酶水解大豆异黄酮的条件。正交试验结果显示,当加酶量为25μg/mL,水解温度50℃,水解时间2.0 h,pH6.0时,黄豆苷水解率可达96.51%;在加酶量为25μg/mL,水解温度40℃,水解时间2.0 h,pH5.5时,染料木苷水解率为92.36%。

β-葡萄糖苷酶转化大豆异黄酮及其保健功能的研究进展

大豆异黄酮具有广泛的营养学价值和健康保健等作用,但大豆及其加工制品中以糖苷形式存在的大豆异黄酮不利于人体的消化吸收,难以发挥其生物保健作用。从β-葡萄糖苷酶生物转化大豆异黄酮糖苷、产β-葡萄糖苷酶菌株的筛选及大豆异黄酮的保健功能等方面进行综述,旨在为深入探讨研究β-葡萄糖苷酶及大豆异黄酮的转化提供新思路。

β-葡萄糖苷酶的固定化及其用于制备大豆异黄酮的研究

采用25%脱乙酰壳聚糖滴入15%的NaOH与30%的CH3OH组合的成球凝结溶液制备中空球形脱乙酰壳聚糖。适量的β-葡糖糖苷酶用4%戊二醛与中空球形脱乙酰壳聚糖偶联,实现β-葡糖糖苷酶的固定化。中空球形壳聚糖固定化的β-葡萄糖苷酶适宜pH值为4.0、适宜温度为68℃、相对酶活力为87.9%。在50℃用60%乙醇提取大豆异黄酮糖苷,得率约为4.0mg/g。再用固定化β-葡糖糖苷酶水解异黄酮糖苷,70℃、1h后,再经超滤、固定化酵母细胞等处理,可制备纯度达94%的大豆异黄酮甙元。

自筛β-葡萄糖苷酶高产菌-N_1制备大豆异黄酮苷元的研究

目的:探索一种用自筛的β-葡萄糖苷酶高产菌-N1制备大豆异黄酮苷元的方法。方法:应用酶学研究常规方法在实验室条件下,用自筛的β-葡萄糖苷酶高产菌-N1获得β-葡萄糖苷酶液,探索制备大豆异黄酮苷元的工艺。结果:实验室制备的大豆异黄酮苷元样品纯度为91.33%,收率为11.44%。大豆异黄酮粗品经处理后,苷的数量减少,大豆苷和黄豆黄苷从28.21%降低到22.93%,染料木苷从8.24%降低到5.67%。苷元的数量明显的增加,大豆苷元从0.04%增加至0.05%,黄豆黄素从的0.003%增加至0.09%,染料木素从0.006%增加至0.07%。结论:研究表明以自筛菌-N1作为酶促反应制备大豆异黄酮苷元的β-葡萄糖苷酶产生菌完全可行。大豆异黄酮粗品经酶液处理后,苷元的数量有明显的增加,尤其是黄豆黄素和染料木素,分别增加了30倍和11.67倍。为进一步研究奠定了基础。

嗜热菌β-葡萄糖苷酶A基因的克隆表达及转化大豆异黄酮糖苷

对嗜热厌氧乙醇菌（Thermoanaerobacter ethanolicus）JW200基因组DNA中β-葡萄糖苷酶A基因（Te-BglA）进行PCR扩增，构建重组质粒pET-20b-Te-BglA，并对纯化的重组酶Te-BglA的酶学性质和动力学参数进行研究。结果表明，基因Te-BglA在Escherichiacoli细胞中成功表达，获得重组酶Te-BglA，该酶的最适温度和pH值分别为80℃和7．0。以对硝基苯酚-β-葡萄糖苷（pNPG）为底物时，Km值为（0．78±0．02）mmol／L，Kcat/Km值为（6．86±0．16）×10^4／（mol·s）；以天然底物水杨苷为底物时，Km值为（5．18±0．10）mmol／L，Kcat／Km值为（2．04±0．02）×10^4L／（mol·s），两者比较可知，重组酶Te-BglA表现出对pNPG更好的亲和力和更高的催化效率常数。该酶在80℃保温1h后相对于冰浴中（未保温）的酶活仍有70．1％的残留，在pH4．5～8．0区间仍保持较高的pH稳定性。酶解大豆粉的结果表明，重组酶Te-BglA在80℃作用3h后，大豆黄素和染料木素的产量分别达到35．9mg／g和59．1mg／g。

冠突散囊菌发酵鲜桑叶对其黄酮抑制α-葡萄糖苷酶活性的影响

为提高桑叶中黄酮类物质含量并改善其α-葡萄糖苷酶抑制活性,采用冠突散囊菌(Eurotium cristatum CY-1)进行鲜桑叶固态发酵的研究。研究结果表明,E.cristatum CY-1可以新鲜桑叶为发酵基质进行良好的生长。以30 g鲜桑叶(含水量76.92%)为发酵基质进行固态发酵时,第8天菌体生物量达到378.2 mg。随着发酵的进行,桑叶黄酮提取物(mulberry leaf flavonoids,MLF)的含量在第8天时升至最高值,为3.289 mg/g干桑叶,相对于未发酵桑叶提高了78.7%。MLF对α-葡萄糖苷酶的半数抑制浓度(IC_(50))随着发酵时间的延长而显著降低,其中经E.cristatum CY-1发酵10 d的桑叶MLF和未发酵桑叶的MLF的IC_(50)值分别为4.925μg/mL和25.995μg/mL。综上,冠突散囊菌的发酵不仅可以有效提高桑叶黄酮的含量,还可以提高其对α-葡萄糖苷酶的抑制效率。

嗜热菌β-葡萄糖苷酶A水解大豆异黄酮的研究

该研究将含嗜热乙醇菌β-葡萄糖苷酶A(Te-BglA)基因的重组质粒pET-20b-Te-BglA导入大肠杆菌JM109(DE3)中,经诱导表达和Ni2+亲和层析纯化,将其用于酶解大豆异黄酮,以染料木素的产量为检测指标,通过正交试验优化Te-BglA水解大豆异黄酮的条件。优化结果显示:最佳的水解条件为加酶量70U,温度80℃,水解时间60min,pH值7.4,在此条件下水解100g大豆粉可得到染料木素58.1mg。

β-葡萄糖苷酶的提取及转化大豆异黄酮的实验研究

大豆异黄酮(soybean insoflavones,简称ISO)是一类存在于大豆中的具有重要生物活性的物质。它主要分为游离型苷元和结合型糖苷两大类,其生物活性主要表现为游离型苷元的生物活性。

产β-葡萄糖苷酶芽孢杆菌的筛选及水解大豆异黄酮糖苷研究

为获得能高效水解大豆异黄酮糖苷的芽孢杆菌,利用七叶苷平板分离法从动物的新鲜粪便中筛选产β-葡萄糖苷酶的芽孢杆菌菌株,然后对酶活最高的菌株进行种属鉴定和水解大豆异黄酮糖苷的研究.结果显示:筛选到1株酶活力较高的芽孢杆菌R2-2,经鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens);该菌株有较高的糖苷水解能力,黄豆苷水解率最高达到53.65%,染料木苷为48.80%.