高产大豆异黄酮糖苷水解酶菌株的发酵工艺研究

Absidia sp.R是从酒曲中分离出的一株产大豆异黄酮糖苷水解酶活性较高的菌株。该菌最佳产酶条件为:2.5％的麦麸为碳源,1％的硝酸钠为氮源,培养基起始pH为7.0,瓶装量为40mL/250mL,接种量8％,培养温度为30℃,转数为160r/min,培养时间为84h,其酶活力可达到82U/mL。除Cu2+对该菌产酶有较强的抑制作用外,金属离子对产酶影响不大。

大豆异黄酮对糖尿病大鼠心肌自由基损伤的保护作用

目的 :探讨大豆异黄酮对糖尿病 (diabetesmellitus,DM)大鼠心肌损伤的保护作用。方法 :SD大鼠 4 8只 ,随机分为正常对照组 (NC)、糖尿病对照组 (DC)、低剂量大豆异黄酮治疗组 (L SI)、中剂量大豆异黄酮治疗组 (M SI)、高剂量大豆异黄酮治疗组 (H SI)、尼尔雌醇治疗组 (NT)。后 5组应用链脲佐菌素 (streptozotocin ,STZ) 5 0mg/kg腹腔注射 ,制备DM模型。第5周起 ,NC、DC组予 0 .5 %羧甲基纤维素钠 (CMC Na) 1 0ml·kg-1 ·d-1 灌胃 ,L SL、M SI、H SL组分别予以大豆异黄酮 30、6 0、1 2 0mg·kg-1 ·d-1 灌胃 ,NT组予尼尔雌醇混悬液 0 .1mg/kg ,每周 2次 (周一、四 ) ,其余时间同NC、DC组灌胃。每天灌胃2次 ,体积均为 1 0ml/kg。第 1 0周末 ,测空腹血糖及心肌组织乳酸脱氢酶 (LDH)、肌酸激酶 (CK)、超氧化物歧化酶 (SOD)活性和丙二醛 (MDA)含量。结果 :与DC组比较 ,H SI组大鼠体重、心肌组织LDH、CK、SOD活性显著升高 (P <0 .0 5～P <0 .0 1 )。结论 :高剂量大豆异黄酮可显著提高糖尿病大鼠体重、心肌组织LDH、CK、SOD活性 。

纤维素酶水解大豆异黄酮糖苷混合物的抗氧化活性

大豆异黄酮主要以糖苷类型的分子形式存在于大豆中,但是其具有生物活性的部分主要是苷元。为了建立一种体外生物转化大豆异黄酮糖苷为大豆异黄酮苷元的新方法,采用纤维素酶水解70%乙醇提取脱脂大豆粕得到的异黄酮粗提物,对比了水解前后两样品的异黄酮组成差异,并测定了其清除DPPH自由基的能力。结果表明:纤维素酶能完全水解大豆苷和染料木苷为大豆素和染料木素;而不能水解丙二酰基染料木苷和丙二酰基大豆苷。纤维素酶处理以后的大豆异黄酮糖苷混合物达到DPPH自由基50%清除率所需要的异黄酮浓度是未处理的大豆异黄酮糖苷混合物的1/2.56。

大豆异黄酮糖苷酶的纯化及性质研究

利用Absidia sp.R菌株,通过液体发酵的方法,得到了一种高活性的大豆异黄酮糖基水解酶.该酶经硫酸铵分级沉淀、DEAE-Cellocuse（DE-52）离子交换层析纯化,被纯化了11倍,收率为10.9%;经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测得该酶的分子量为53kD;该酶的最适反应温度为50℃;最适pH为5.0;温度低于60℃,pH在5.0～7.0范围内该酶较稳定,Co2＋、Ca2＋对该酶有激活作用;Ag^＋、Cu^2＋对该酶有抑制作用.当以染料木甙为底物时该酶的米氏常数（Km）为1.3×10^-2mol/L.等电聚焦电泳测得其等电点为3.2.

酶法水解大豆异黄酮

利用Absidiasp R菌株 ,通过液体发酵 ,得到了一种高活性的大豆异黄酮糖苷水解酶 ,该酶水解糖苷型大豆异黄酮的最适底物浓度为 7 5mg/mL ;最适反应时间为 1 5h ;该酶在温度为 2 0～5 0℃、pH为 4 0～ 7 0范围内相对稳定 ,最适酶解反应温度为 40℃ ,最适pH值为 5 0 ;金属离子对该酶活力的影响不显著 ,其中Co2 +、Zn2 +对该酶有激活作用 ,Ag+、Cu2 +对该酶有抑制作用 ,Fe3+浓度<5 0mmol/L时 ,对该酶有促进作用 ,当离子浓度 >5 0mmol/L时 ,则有抑制作用。利用实验获得的最适酶解条件反应 ,可使染料木苷生成染料木素的转化率达到 1 0 0 %。

大豆异黄酮对海拔5000m以上高原红细胞增多症患者氧自由基代谢的影响

高原红细胞增多症（high altitude polycythemia，HAPC）是机体在高原缺氧环境中，红细胞过多增生使血液粘度增高、血流阻力增加而引起的一系列临床症状。海拔5000m以上人群的发病率明显增高。雌激素用于治疗HAPC已有多年的历史，与扩血管治疗合用可提高治疗效果。研究证实雌激素可抑制红细胞增生，因此高原红细胞增多症多见于成年男性、少见于女性。

脱脂大豆粕中提取大豆蛋白、异黄酮、低聚糖和皂甙的工艺方法研究

以脱脂大豆粕为原料,在提取大豆异黄酮的基础上,同时将大豆蛋白、低聚糖和皂甙3种活性成分逐一分离。小试研究表明,从脱脂大豆粕中提取大豆异黄酮的最佳条件为:乙醇浓度40%,酸加量0·15%,温度30℃,时间6h。大豆异黄酮乙醇提取液经回收乙醇、树脂吸附提纯得到含量约20%的大豆异黄酮粗粉。再用浓度为92%的60倍丙酮提纯3次,可得到含量约40%的大豆异黄酮粉。该工艺中大豆粕经乙醇浸提可得到大豆蛋白;树脂吸附后的未吸附液经处理可得到大豆低聚糖;大豆异黄酮经丙酮精制可分离出大豆皂甙。

大豆异黄酮对糖尿病大鼠心肌组织NO含量和NOS活性的影响

目的探讨大豆异黄酮(soyisoflavones,SI)对糖尿病大鼠心肌组织NO含量和NOS活性的影响。方法SD大鼠48只,随机分为正常对照组(NC)、糖尿病对照组(DC)、SI低剂量组(L-SI)、SI中剂量组(M-SI)、SI高剂量组(H-SI)、尼尔雌醇组(NI)。后5组腹腔注射链脲佐菌素55mg·kg-1制备DM模型。第7周起,NC、DC组予0.5%CMC-Na10mL·kg-1·d-1,L-SI、M-SI、H-SI组分别予大豆异黄酮30、60、120mg·kg-1·d-1,NI组予尼尔雌醇混悬液0.1mg·kg-1(2次/周)灌胃。第12周末,测大鼠体重、空腹血糖,血清LDH、CK含量,心肌组织NO含量和NOS活性。结果(1)DC组大鼠血清LDH含量明显高于正常(P<0.01),经中、高剂量SI治疗后显著低于DC组(P<0.01),且高剂量优于中剂量组(P<0.01)。DC组大鼠血清CK含量明显高于正常(P<0.01),各治疗组与DC组差异无显著性。(2)心肌组织NO含量、NOS活性以DC组最低,M-SI、H-SI组比DC组明显升高(P<0.01)。结论中、高剂量SI可提高心肌组织NO含量和NOS活性,对糖尿病大鼠心肌具有保护作用。

亚临界水提取大豆胚芽中异黄酮及低聚糖的研究

以大豆胚芽为原料、高压反应釜为反应容器,应用亚临界水为溶剂、采用高纯氮气加压提取大豆胚芽中异黄酮及大豆低聚糖。利用紫外分光光度法测定大豆异黄酮的含量。选取液料比、提取时间、提取温度、压力4个因素进行单因素试验,再进行正交试验优化亚临界水提取大豆异黄酮的条件。结果表明:在液料比25:1,浸提温度120℃,浸提时间40 min,浸提压力1.9 MPa的条件下,大豆异黄酮的得率是1.09%,大豆异黄酮粗提物的产率为6.52%,粗提物纯度是2.60%;大豆低聚糖粗提物产率是35.2%。

大豆异黄酮、皂甙和低聚糖提取工艺研究

大豆异黄酮、大豆皂甙、大豆低聚糖是大豆的 3种主要活性成分 ,本文研究了从大豆中同时提取这 3种活性成分的工艺条件。经过单因素实验和正交实验 ,确定了合适的提取条件 :5 0 %乙醇 ,1∶2 7的固液比 (原料∶溶剂 ) ,6 0℃回流 5h。在此条件下提取 3次 。

树脂及活性碳吸附技术回收大豆乳清中的异黄酮和低聚糖

对用树脂及活性碳吸附方法回收大豆乳清废水中的大豆异黄酮和低聚糖进行了研究。测定了树脂及活性碳吸附饱和曲线 ,研究了异黄酮和低聚糖的洗脱条件 ,建立了该法处理大豆乳清废水回收大豆异黄酮和精制大豆低聚糖的工艺。结果表明 :处理 1t废水 ,约可回收 4 0 %的大豆异黄酮130g ,精制大豆低聚糖浆 9kg ,并将乳清废水的COD和BOD分别由 136 0 0和 780 0降至 96 0和 340。本法处理乳清废水可创造良好的经济效益。

大豆异黄酮对初老大鼠卵巢Bcl-2基因和Caspase-3基因mRNA表达的影响

目的观察大豆异黄酮(soy isoflavones,SI)对初老大鼠卵巢Bcl-2、Caspas e-3 mRNA表达及氧自由基含量的影响。方法利用自然衰老的雌性大鼠建立初老动物模型,连续灌胃给药8周后,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测卵巢Bcl-2和Caspase-3 mRNA表达,采用硫代巴比妥酸和黄嘌呤氧化法分别检测卵巢丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果与初老组相比,各SI处理组卵巢Bcl-2 mRNA表达量和SOD的活性均明显增高、Caspase-3表达量明显下降,中剂量(158 mg.kg-1)和高剂量(500 mg.kg-1)SI处理组MDA含量也显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论大豆异黄酮上调卵巢Bcl-2、下调Caspase-3表达、抑制氧自由基生成并增强SOD活性,可能是其改善衰老卵巢功能的机制之一。

大豆异黄酮对膳食诱导型代谢综合征大鼠糖脂代谢、血清瘦素及FFA的影响

目的:通过实验研究观察大豆异黄酮对代谢综合征大鼠胰岛素抵抗,血脂,血清瘦素及FFA的影响。方法:采用高脂高糖高盐饲料喂养诱导建立大鼠MS模型。将成模的MS大鼠随机分为模型组,大豆异黄酮高、低剂量组及西药组。灌胃4周,采用试纸法和生化法分别测血糖血脂,放免法测胰岛素及血清瘦素水平,比色法测FFA水平。结果:SIF高剂量组大鼠FBG、FINS、HOMA-IR与模型组相比均降低(P<0.05),与西药组疗效相似。与模型组相比,SIF高剂量组血清TC、TG以及LDL-C水平显著降低(P<0.01)。而SI高剂量组瘦素及FFA水平较模型组明显降低(P<0.05),与西药组无明显差异。结论:大豆异黄酮可以改善MS模型大鼠胰岛素抵抗,调节血脂,其可能与降低脂肪细胞因子瘦素及FFA水平相关。

高活性大豆异黄酮糖苷酶的分离原料筛选、纯化及性质研究

通过对32种植物β-葡萄糖苷酶水解染料木苷的活性比较,发现鹰嘴豆β-葡萄糖苷酶具有4.19U/mg的大豆异黄酮糖苷水解酶活性。该酶经硫酸铵分级沉淀、DEAE-Cellulose-52离子交换、Sephadex G-100凝胶层析纯化,纯化了10.1倍,收率为7.2%;SDS-PAGE和Sephadex G-100凝胶层析结果表明,该酶的分子量为73.2kD,含两个亚基;该酶的最适反应温度为45℃;最适pH6.0;当以染料木苷和大豆苷为底物时该酶的米氏常数分别为11.0和19.0μg/ml。温度在30～45℃、pH值在4.5～6.5范围内该酶较稳定:Ag^+、Hg^(2+)和D-葡萄糖酸内酯对该酶有强烈抑制作用。该酶能水解染料木苷和大豆苷,但不能水解纤维二糖和α-乳糖。

大豆异黄酮对缺血再灌注大鼠心肌自由基损伤的保护作用

目的:研究大豆异黄酮对缺血再灌注大鼠心肌自由基损伤的保护作用及其机制。方法:通过结扎冠状动脉左前降支制作心肌缺血再灌注模型。大豆异黄酮组造模前给予连续15天的大豆异黄酮灌胃。再灌注后检测心肌梗死面积,同时检测心肌组织和血浆乳酸脱氢酶、磷酸肌酸激酶和心肌组织丙二醛、超氧化物歧化酶的含量。结果:大豆异黄酮组心肌梗死面积减小,丙二醛表达降低,超氧化物歧化酶活性增强,乳酸脱氢酶、磷酸肌酸激酶外泄减少。结论:大豆异黄酮对缺血再灌注引起的心肌自由基损伤具有一定的保护作用,此作用与大豆异黄酮提高心肌组织的超氧化物歧化酶和降低丙二醛,清除自由基,防止脂质过氧化等有关。

大豆异黄酮对糖耐量异常大鼠肾损伤保护作用

目的研究大豆异黄酮对D-半乳糖诱导的糖耐量异常大鼠早期肾损伤的保护作用。方法采用剂量递增法持续腹腔注射D-半乳糖,诱导糖耐量异常大鼠模型;以大豆异黄酮作为拮抗糖耐量异常早期肾损伤的受试物,二甲双胍为阳性对照,观察正常大鼠、糖耐量异常模型大鼠及各受试物组大鼠的血糖,血浆尿素氮和尿微量白蛋白含量、肾脏超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)活性、丙二醛(MDA)、晚期糖基化终产物(AGEs)含量变化以及肾细胞DNA氧化损伤程度。结果模型组大鼠餐后2 h血糖,尿微量白蛋白、肾MDA和AGEs含量较正常对照组均明显增高(P<0.05),SOD活性明显降低(P<0.05),肾细胞DNA拖尾率明显升高。大豆异黄酮干预6周后,大鼠餐后2h血糖、尿微量白蛋白、肾MDA和AGEs含量较模型组明显降低(P<0.05),肾脏SOD活性明显增高(P<0.05),肾细胞DNA拖尾率明显降低。与二甲双胍组比较,大豆异黄酮高低剂量组AGEs含量显著降低(P<0.05),其他指标间比较,差异均无统计学意义。结论D-半乳糖诱导的糖耐量异常大鼠存在早期肾脏损伤;大豆异黄酮对糖耐量异常大鼠早期肾损伤有保护作用,其机制与其改善糖耐量,提高机体抗氧化能力和抑制非酶糖基化反应有关;大豆异黄酮抑制非酶糖基化作用明显强于二甲双胍。

大豆异黄酮糖苷酶产生菌培养条件优化及转化

将经过筛选的产大豆异黄酮糖苷水解酶的菌株米曲霉3042经过单因子及正交试验,确立了产酶的最适培养基配方为:玉米芯+麸皮4%,(NH4)2SO40.1%,水扬苷0.01%,KH2PO40.1%,Vc 0.1%,MgSO40.1%。产酶的最佳培养条件为:发酵培养基起始pH 6.0,发酵温度27℃,摇床转速160 r/min,发酵时间84 h时酶活力最高。粗提取的大豆异黄酮经发酵液转化后,其结合态含量降低,游离态含量增加。

大豆异黄酮糖配体制备工艺研究

以大豆胚轴为原料,通过正交设计确立制备含染料木黄酮的糖配体酸水解条件,水解酸液的浓度为2.5 mol/L、水解温度为90℃,水解时间为3h。根据糖配体的溶解度与极性经AB-8大孔树脂柱乙醇溶剂分步淋洗(水→30%乙醇→80%乙醇)分离及以氯仿∶甲醇∶20%冰乙酸,体积比为7∶3∶1为展开系薄层小量制备出纯度为48.6%大豆异黄酮糖配体染料木黄酮。

半胱胺、大豆异黄酮、β-葡聚糖对美洲鳗幼鳗生长的影响

采用3因素3水平的正交试验,研究饲料中添加半胱胺、大豆异黄酮、β-葡聚糖对美洲鳗幼鳗生长性能的影响。结果表明:3种添加剂同时使用时,大豆异黄酮对美洲鳗增重率的影响最大,而β-葡聚糖对饲料系数的影响最大,最佳的添加剂量组合为半胱胺200 mg/kg、大豆异黄酮40 mg/kg和β-葡聚糖1.0%。半胱胺显著降低美洲鳗体脂含量,但对体蛋白、灰分含量无影响,大豆异黄酮和β-葡聚糖对美洲鳗体成分没有明显的影响。

大豆异黄酮对糖耐量异常大鼠早期肾损伤的影响

目的:研究大豆异黄酮对D-半乳糖诱导的糖耐量异常大鼠早期肾损伤的影响。方法:按剂量递增法持续腹腔注射D-半乳糖8周,诱导IGT大鼠模型;以高低剂量的大豆异黄酮为受试物,测定各组大鼠血糖水平,血尿素氮和尿微量白蛋白(microalbuminuria,MAU)含量,肾脏乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)及其各同工酶活性。结果:模型组大鼠餐后2h血糖,MAU含量,LDH及各同工酶活性明显高于正常对照组(p<0.05);与模型组比较,大豆异黄酮高低剂量组大鼠餐后2h血糖,MAU含量,LDH总比活均明显降低(p<0.05),LDH各同工酶活性也较模型组低。结论:大豆异黄酮可明显改善IGT大鼠餐后血糖水平,降低尿微量白蛋白含量以及肾脏乳酸脱氢酶及其同工酶活性,从而发挥对早期肾脏损伤的保护作用。