致仔猪过敏性大豆抗原蛋白β-conglycinin单克隆抗体的制备与鉴定

研究以人工合成的对应于β-conglycinin分子α'亚基上的一段抗原表位肽(RPQHPER,78-84α')作为半抗原,与载体蛋白(OVA)交联后,作为免疫原制备了致仔猪过敏性大豆抗原蛋白β-conglycinin的单克隆抗体(Mab 6G4),并应用酶联免疫吸附等方法进行鉴定。结果表明,制备的单抗Mab 6G4属于IgG1;该抗体能与大豆β-conglycinin特异性结合,IC50为4.7 ng/mL,并对β-conglycinin表现出较强的亲和力,亲和常数达6.9×109 L/mol。因此,制备的单克隆抗体Mab 6G4为分析大豆制品中β-conglycinin的含量及探讨β-conglycinin对仔猪的致敏机理提供了一个潜在的分析工具。

糖基化大豆抗原蛋白的致敏性及其对肠道健康的影响

大豆营养丰富,但其抗原蛋白的高致敏性易导致严重过敏反应。大豆球蛋白和β-伴球蛋白是大豆的主要过敏原,其抗原表位对致敏性起决定作用。通过适宜的加工手段改变过敏原蛋白表位结构,从而影响致敏性。糖基化是当前最有前景实现工业化的非酶加工新技术,不仅能改变蛋白质的结构、营养特性,同时能降低致敏性。文章介绍了大豆主要抗原蛋白的结构、糖基化反应,重点总结了大豆糖基化抗原蛋白致敏性的变化及其对肠道健康的影响,同时对糖基化蛋白面临的挑战进行展望,旨在为糖基化蛋白低致敏性产品的开发及促进肠道健康提供参考。

大豆抗原蛋白的致敏作用及其缓解方法研究进展

大豆是一种重要的蛋白质饲料原料,但因其自身的免疫原性导致应用受到限制,本文综述了大豆抗原蛋白的分类、对仔猪的致敏作用以及缓解方法,旨在为进一步提高大豆在实际生产中的应用奠定基础。

大豆球蛋白G3A1b抗原表位的预测及初步定位

采用生物信息学软件对大豆球蛋白中G3亚基A1b酸性多肽链(G3A1b多肽链)的潜在抗原表位进行综合预测,并结合A1b酸性多肽链的氨基酸序列,重叠分段后设计合成3对引物,构建目的基因的克隆载体;利用T7噬菌体展示技术表达目的蛋白,制备热加工特异性吸收抗体后进行ELISA检测以鉴定被破坏的抗原表位。结果表明:G3A1b多肽链中可能存在27QQN29、39LKPDNRIE46、58NNK60、114PQQKGQSSRP123、134R、174QMPR177和184NQEQEF1897个线性表位;目的基因大小与预期相符,成功构建了克隆载体,组装了噬菌体;G3A1b-3片段具有较高的抗原性且在热加工过程中被破坏得最明显。该结果为精确定位大豆球蛋白G3A1b中致敏关键氨基酸提供了理论支持。

大豆异黄酮对先兆流产模型大鼠的保胎作用及机制研究

目的 研究大豆异黄酮对先兆流产大鼠的保胎作用及可能机制。方法 取雌鼠促情,与雄鼠交配、妊娠后随机分为正常组(纯化水灌胃,n=10)、模型组(纯化水灌胃,n=9)、阳性对照药组(黄体酮4 mg/kg,肌内注射,n=9)和大豆异黄酮低、中、高剂量组(25、50、100 mg/kg灌胃,n=10)。除正常组外,其余各组大鼠均于孕8 d以米非司酮+米索前列醇灌胃建立先兆流产模型。各组大鼠分别于孕1~7 d、孕9~12 d给药/纯化水,每天1次。孕14 d时,计算各组大鼠的保胎率,检测大鼠血清中β-人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)、孕酮(P)水平,观察大鼠胎盘与蜕膜组织病理形态学变化并检测其细胞凋亡指数,检测胎盘组织中凋亡相关因子(Fas)、凋亡相关因子配体(FasL)、增殖细胞核抗原(PCNA)和肝素结合表皮生长因子(HB-EGF) mRNA及其蛋白表达,检测蜕膜组织中Fas、PCNA和HB-EGF mRNA及其蛋白表达。结果 模型组大鼠胎盘组织充血扩张明显,血管较少且形态不规则,可见大量严重基质水肿、炎症细胞浸润和铁胆黄素沉积。与模型组比较,大豆异黄酮各剂量组大鼠的保胎率,血清β-HCG、P水平,胎盘与蜕膜组织中PCNA、HB-EGF mRNA及其蛋白表达水平均显著升高(P<0.05),病理学变化显著改善;胎盘与蜕膜组织细胞凋亡指数,胎盘组织中Fas、FasL mRNA及其蛋白表达水平,蜕膜组织中Fas mRNA及其蛋白表达水平均显著降低(P<0.05),且大豆异黄酮的上述作用呈剂量依赖性(P<0.05)。结论 大豆异黄酮对先兆流产模型大鼠有保胎作用;其作用机制可能与下调母-胎界面Fas、FasL mRNA及其蛋白表达,上调PCNA、HB-EGF mRNA及其蛋白表达有关。

大豆抗原蛋白的组成及其致敏作用机理

本文综述了大豆抗原蛋白的分类、组成和特征,以及大豆球蛋白与β-伴大豆球蛋白可能的致敏作用机理。

大豆抗原及其对仔猪和犊牛的影响

大豆及其制品中含有一些可以引起幼龄动物胃肠道发生过敏反应的抗原物质,这些抗原物质引起的过敏反应可造成动物肠道损伤,进而导致肠道吸收障碍,生长发育受阻。本文对大豆抗原的种类、生物学特性、不同大豆制品中的可溶性抗原及大豆抗原对仔猪和犊牛的影响进行了综述。

大豆抗原蛋白Glycinin对鲤稚鱼和幼鱼肠道组织的影响

【目的】研究大豆抗原蛋白大豆球蛋白(Glycinin)对鲤稚鱼、幼鱼肠道组织的影响。【方法】分别以初始体质量为(10.12±0.08)g/尾的鲤稚鱼、(116.89±0.13)g/尾的鲤幼鱼为试验对象,在控温单循环养殖系统中进行饲养试验。以鱼粉为动物蛋白源,混合油脂(m(玉米油)∶m(鱼油)=1∶1)为脂肪源,糊精、面粉作为饲料糖源,分别配制成5种等氮(鲤稚鱼和幼鱼饲料粗蛋白含量分别约为400和360g/kg)等能(总能分别约为16.9和15.2MJ/kg)的半精制饲料,其中大豆抗原蛋白Glycinin的添加量分别为0(对照),30,60,90,120g/kg。每组饲料设3个重复,进行为期8周的饲养试验。饲养试验结束后,采用组织学方法,探讨大豆抗原蛋白Glycinin对鲤稚鱼、幼鱼肠道组织的影响。【结果】在本试验条件下,大豆抗原蛋白Glyicinin添加量为30,60,90,120g/kg组的鲤稚鱼中肠和后肠皱襞高度显著低于对照组(P<0.05);而前肠皱襞高度、肠质量、肠长、肠体指数和肠长指数在各组之间差异不显著(P>0.05)。随着大豆抗原蛋白Glycinin添加量的增加,鲤幼鱼前肠、中肠和后肠皱襞高度呈下降趋势。其中,大豆抗原蛋白Glyicinin的添加量为60,90,120g/kg组鲤幼鱼后肠皱襞高度、肠质量显著低于对照组(P<0.05);而Glyicinin的添加量为120g/kg组鲤幼鱼肠长和肠长指数显著低于对照组(P<0.05);前肠和中肠皱襞高度在各组之间差异不显著(P>0.05)。从肠道形态变化来看,当Glyicinin添加量为60g/kg时,鲤稚鱼肠绒毛开始出现局部断裂或破损;当Glyicinin添加量为90和120g/kg时肠道组织形态进一步被破坏,中肠和后肠受到Glycinin的影响较严重。当Glyicinin添加量为60g/kg时,鲤幼鱼肌层开始出现变薄的现象;当Glyicinin添加量为90和120g/kg时,肠道形态受到的影响较显著,绒毛出现断裂或者缺失。【结论】当鲤稚鱼饲料中大豆抗原蛋白Glyicinin的添加量为30g/kg时,就会引起中肠和后肠皱襞高度下降;而当Glyicinin的添加量为60g/kg时会引起鲤幼鱼后肠皱襞高度下降,同时鲤稚鱼和鲤幼鱼肠道形态开始出现不同程度的破坏。

大豆中主要抗原蛋白的研究进展

文中结合作者多年来的研究成果,对大豆中主要抗原蛋白的识别技术、已识别抗原的相关性质、大豆抗原蛋白对不同种属动物的抗营养作用及其相关机制、降低大豆抗原蛋白免疫原性的主要处理方法等进行了综述,并对该领域未来的发展方向和工作重点进行了探讨和展望。

大豆抗原蛋白对犊牛生长性能、日粮养分消化率和肠道吸收能力的影响

将12头初生荷斯坦公犊牛,随机分为3组,每组4头。分别饲喂含生、熟大豆粉的人工代乳日粮和全乳究大豆中主要抗原蛋白对犊牛健康、生长性能、消化吸收能力的影响。结果表明:①从10日龄起A与B两组犊全部开始腹泻,并可见脱落的肠黏膜,其中A组腹泻程度、持续时间均超过B组犊牛。②营养物质消化率、增重血浆木糖浓度均表现为A<B<C,且3组间差异极显著(P<0.01)。

生物酶解法去除大豆蛋白抗原性研究进展

大豆蛋白具有合理的氨基酸组成和较好的加工性能,是食品工业和动物营养中应用最广泛的植物蛋白。但大豆蛋白会导致人和动物的过敏反应,是公认的八大过敏原之一。国内外对消除大豆蛋白抗原性的方法进行了多方面的研究。传统的加热处理效果并不理想,主要原因可能是大豆蛋白分子中存在序列性抗原决定簇。近年来利用生物酶解技术去除大豆蛋白抗原受到高度重视。研究发现,胰蛋白酶、胃蛋白酶等对大豆蛋白分子的水解和降低抗原性效果较差。碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、风味蛋白酶等作用结果较好,但难以完全消除其抗原性。本文重点介绍生物酶解法降低大豆蛋白抗原性的研究进展,对单一酶解法不能完全消除大豆蛋白抗原性以及不同文献所得结果不一致甚至出现相反现象的原因做了适当分析。

碱性蛋白酶水解对豆粕中大豆抗原蛋白的影响

大豆是八大食物过敏源之一,其中主要蛋白成分7S和11S球蛋白也是致敏性较强的抗原蛋白。本试验研究了豆粕在Alcalase酶水解过程中7S和11S两种大豆抗原蛋白的变化。结果表明,酶解10 min时7S伴球蛋白的α'、α和β亚基、酶解60 min时11S球蛋白的酸性亚基等主要抗原蛋白成分即被完全水解,同时新产生了23 ku和大量14 ku以下组分;酶解豆粕中95.1%的蛋白可溶于水,其中68.1%蛋白质可溶于三氯乙酸。

糖基化改性对大豆蛋白抗原性及结构特性的影响

以大豆分离蛋白和葡聚糖为原料,在干热条件下进行美拉德反应,制取不同时间下的糖基化复合物。以β-伴大豆球蛋白和大豆球蛋白抗原抑制率为指标,采用间接竞争ELISA方法测定糖基化产物的抗原性,在反应6 d时,糖基化产物中β-伴大豆球蛋白和大豆球蛋白的抗原性分别降低了36.90%和18.12%。糖基化产物颜色加深,且游离氨基含量降低,说明大豆蛋白与糖发生了不同程度的反应。红外光谱中糖链的引入,使蛋白质分子展开,β-转角和无规则卷曲结构含量降低,影响了β-伴大豆球蛋白α亚基的抗原表位,从而可能使大豆蛋白的抗原性降低。糖基化反应影响抗原性的关键作用在于蛋白与糖结合部位对蛋白质结构变化的影响。

风味蛋白酶水解大豆分离蛋白的抗原性及功能特性变化

研究了风味蛋白酶水解过程中大豆分离蛋白分子和抗原性变化规律以及酶解物的乳化、发泡等功能性质。结果表明:酶解10 min时,大豆主要抗原蛋白7S的3个亚基和11S的酸性亚基得到有效降解,且产生了分子质量为31、27、22 ku的新谱带,延长酶解时间至120 min时,新生成的谱带变化不大,表现出抗酶解特性。ELISA分析显示,酶解10 min时,大豆11S球蛋白和7Sβ-伴球蛋白的抗原活性剩余率分别降至43%和56%。酶解30 min时,两种蛋白的抗原活性剩余率分别为25%和34%。此指标与电泳图谱中亚基变化趋势基本一致。酶解10 min时,乳化性和发泡性明显提高,延长酶解时间,则乳化和发泡性能显著降低。

大豆主要抗原蛋白分离及测定方法的研究

大豆主要抗原蛋白不同的特性决定其提取和分离方法很多,主要有:等电点沉淀法、冷沉淀法、盐析法、按离子强度不同而沉淀分离法、免疫法等,提取和分离过程中影响大豆主要抗原蛋白分离的因素包括提取缓冲液的pH、离子强度、组成成分等。本文就大豆主要抗原蛋白的组成结构、分离及测定方法、影响因素及进一步的研究方向作一综述。

大豆主要过敏原Gly m Bd 30K的抗原表位区基因的克隆表达、纯化及免疫原性鉴定

根据文献并结合生物信息学方法选取大豆主要过敏原Gly m Bd 30k的抗原表位区,采用PCR方法扩增出该抗原表位区基因片段,并通过酶切连接分别构建单体的pET表达载体(pET-sGly)和二聚体的pET表达载体(pET-dGly),重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)plysS,经IPTG诱导后进行SDS-PAGE分析;同时用Ni2+离子亲和层析柱纯化表达的sGly和dGly抗原表位蛋白,用western-blotting和ELISA检测重组蛋白的免疫原性。结果表明:表达的单体sGly蛋白以可溶性表达为主,而其二聚体dGly蛋白以包涵体形式存在,纯化的sGly和dGly蛋白都具有较好的免疫原性,重组蛋白sGly的抗原性更佳。成功构建的大豆主要过敏原Gly m Bd 30k蛋白的抗原表位区单体sGly蛋白及其二聚体dGly蛋白的工程菌,为研制大豆主要过敏原的单克隆抗体以制备用于大豆主要过敏原检测的试剂奠定了基础。

大豆主要过敏原Gly m Bd 30K抗原决定簇表征预测研究

本文应用生物信息学技术,通过使用三种软件SOPMA、Swiss-model和DNAStar来预测大豆主要过敏原Gly m Bd 30K的抗原表位,结果发现80-85、103-106、217-220、355-360这四段氨基酸残基序列是可能的抗原表位,为后续的蛋白表位实验提供了依据,大大提高了工作效率。

糖基化反应改善大豆抗原蛋白功能特性的研究进展

大豆含有丰富的营养成分,被广泛应用于食品和饲料行业,但大豆中的抗原蛋白对人和动物有一定的致敏作用而不利于吸收和利用,有时甚至导致幼龄动物的死亡。因而改善大豆抗原蛋白功能特性及去除抗原蛋白的致敏性便成为了研究的热点。该文围绕蛋白质糖基化方法可安全有效的改善蛋白质功能性质这一特性,综述了糖基化方法对大豆抗原蛋白功能特性影响的相关研究,以期对大豆抗原蛋白的后续深入研究提供理论参考。

大豆蛋白中抗原物质的研究进展

自发现大豆蛋白中抗原物质可引起幼龄动物发生过敏以来,大豆抗原的研究受到广大学者所关注。在某种程度上,它们的存在影响了大豆的营养价值,从而限制了其广泛利用。本文综述了大豆抗原分离提纯与有效加工灭活的方法,以及大豆抗原在仔猪、犊牛和鼠体内抗营养作用及消化动力学的研究进展,为进一步完善其致敏机理提供科学参考。

大豆抗原蛋白对仔猪肠道转运通道的影响

试验研究了大豆抗原蛋白对仔猪生长性能及肠道功能的影响。试验选用21日龄(杜×长×大)仔猪12头,随机分成2个处理组:对照组(饲喂含4%酪蛋白的基础日粮)和大豆分离蛋白组(饲喂含4%伴大豆分离蛋白的基础日粮)。试验为期7 d,采血后屠宰,取十二指肠、空肠、回肠和结肠等组织样品,测定仔猪生长性能、血液生化指标、肠道损伤和肠道功能相关基因等数据。结果表明:1日粮中添加大豆分离蛋白降低了仔猪的日增重,提高了仔猪料重比和腹泻率。2大豆分离蛋白提高了仔猪十二指肠、空肠和结肠的隐窝深度,降低了十二指肠的绒毛宽度、回肠的绒毛高度和绒毛面积。3在日粮中添加大豆分离蛋白降低了十二指肠和回肠AQP 3、Villin、MMP3及空肠AQP10的基因表达水平;提高了空肠Bcl-2、CFTR、Pep T1、SGLT-1、NHE3、AQP 3、AQP 4、AQP 8和Occludin的相对表达量。因此,大豆抗原蛋白调控肠道黏膜损伤与修复和转运通道基因的表达,改变了肠道的正常组织形态,进而降低了仔猪的生长性能。