高速逆流色谱结合制备型高效液相色谱法分离制备大豆皂苷单体

为建立一种有效的同时分离制备多种大豆皂苷单体的方法,先采用高速逆流色谱分离去除大豆皂苷粗提物中的大豆异黄酮,然后对得到大豆总皂苷,优化制备型高效液相的流动相酸(乙酸或三氟乙酸)的含量和梯度洗脱程序,以制备高纯度的大豆皂苷单体。结果表明:流速10mL/min,流动相乙腈(含0.01%三氟乙酸)-水按梯度程序Ⅲ洗脱,出峰数量多、峰形好、分离度高。经高效液相分析与光谱特性、质谱和核磁共振鉴定了11个峰的大豆皂苷种类,包括5种A组、2种B组以及3种2,3-2H-2,5-二羟基-6-甲基-4H-吡喃-4-(DDMP)大豆皂苷。研究结果提供了从含量相对丰富的大豆胚芽中大量分离制备部分或完全乙酰化的A组以及非DDMP和完整DDMP存在的B组大豆皂苷的有效方法。

Sephadex LH-20凝胶层析结合液相制备色谱分离纯化大豆皂苷单体

为建立大豆皂苷单体的分离纯化方法,采用70%乙醇浸提法提取脱脂大豆胚芽中大豆皂苷粗提物;利用葡聚糖凝胶色谱法,以甲醇为洗脱溶剂,洗脱速度3mL/min,进样量60mg大豆皂苷粗提物,分离大豆皂苷和异黄酮,得到高纯度的总大豆皂苷;以总大豆皂苷为原料,优化制备型HPLC流动相、洗脱程序、进样量等条件,最终采用流动相A:水,B:0.01%TFA-乙腈,流速为10mL/min,进样量70mg,分离大豆皂苷单体。采用UPLC-MS鉴定各类皂苷单体,制备得到9种高纯度大豆皂苷单体,分别为ac3-Ab、Aa、Ab、Ae、Af、Bb、Be、Ba、Bb′,纯度在99%以上的有ac3-Ab、Aa、Ab、Bb大豆皂苷,其余纯度为90%以上。DDMP类皂苷因其极不稳定,得到纯度较低的αg、βg、γg大豆皂苷。本方法能有效地分离大豆胚芽中的A组、B组和DDMP组大豆皂苷。