大豆皂苷Bb对牙槽骨成骨细胞增殖、凋亡及MEK/ERK通路的影响

目的探讨大豆皂苷Bb经丝裂原细胞外信号调节激酶/细胞外信号调节激酶(MEK/ERK)信号通路对牙槽骨成骨细胞增殖、凋亡的影响。方法培养人牙槽骨成骨细胞,Dulbecco改良的Eagle培养基(DMEM)培养的细胞作为对照组(A组),以含400μg/mL雌二醇、400μg/mL和800μg/mL大豆皂苷Bb的DMEM培养的细胞分别作为雌二醇组(B组),大豆皂苷Bb低、高剂量组(C_(1)组和C2组)。采用MTT法测定细胞活力和计数细胞菌落数,采用流式细胞术测定细胞凋亡水平,采用逆转录实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法及蛋白印迹法测定细胞中MEK,ERK mRNA和蛋白表达水平。结果与A组比较,B组、C_(1)组、C2组光密度(OD)、细胞存活率、菌落数、MEK及ERK mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P<0.05),且呈剂量依赖性;与B组比较,C_(1)组上述指标均明显降低(P<0.05),而C2组无明显差异(P>0.05)。与A组比较,B组、C_(1)组、C2组细胞凋亡率均明显降低(P<0.05),且呈剂量依赖性;与B组比较,C_(1)组细胞凋亡率明显升高(P<0.05),C2组细胞凋亡率无明显差异(P>0.05)。结论大豆皂苷Bb能促进牙槽骨成骨细胞增殖,抑制凋亡。其作用机制可能与大豆皂苷Bb促进牙槽骨成骨细胞MEK,ERK mRNA和蛋白表达,以及激活MEK/ERK信号通路传导有关。

大豆皂苷Bb预处理对脑缺血再灌模型大鼠的神经保护作用

目的 探讨大豆皂苷Bb(soyasaponin Bb, SSBb)预处理对脑缺血/再灌注(ischemia/reperfusion, I/R)大鼠的神经保护作用。方法 将SD大鼠分为假手术组、模型组和低、高剂量SSBb预处理组,每组15只大鼠。通过线栓法建立大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion, MCAO)大鼠模型,并于闭塞后2 h实现再灌注,用来模拟脑I/R。低、高剂量SSBb预处理组在MCAO术前1 h分别灌胃20和50 mg/kg SSBb。再灌注24 h后,用改良神经损伤严重缺损评分表(modified neurological severity score, mNSS)评估神经功能缺陷,用2,3,5-三苯基氯化四氮唑(2,3,5-triphenytetrazolium chloride, TTC)检测脑梗死体积,用微管相关蛋白-2(microtubule-associated protein-2,MAP-2)染色法评估神经元损伤,用干/湿称重法检测脑含水量,用免疫荧光法检测缺血半暗带中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)表达水平,用Western blot检测突触后致密蛋白-95(postsynaptic density-95,PSD-95)、突触素I(synapsin I)和突触结合蛋白(synaptotagmin)的表达水平。结果 与模型组比较,低和高剂量SSBb预处理均能显著改善MCAO模型大鼠的神经功能缺陷、减轻脑水肿和脑梗死,并降低缺血半暗带中TNF-α的表达水平和PSD-95、synapsin I和synaptotagmin的表达水平(均P<0.01和P<0.001);其中高剂量组作用最为显著(P<0.001)。结论 SSBb预处理在脑I/R损伤大鼠中发挥的神经保护作用。

大豆皂苷Bb乙二胺衍生物的制备

天然的皂苷分子结构不一定表现出免疫佐剂活性的最佳状态,为获得不同皂苷结构修饰衍生物,研究选用碳二亚胺法,借助于乙二胺衍生物的氨基,使大豆皂苷单体Bb分别与β-苯丙酸、L-脯氨酸发生缩合反应,将亲脂性的,带正电荷的、亲水性的化合物基团分别连接到大豆皂苷C-3-O位的葡萄糖醛酸羧基上,形成不同程度亲水、亲脂性的衍生物。分别使用分析及制备型HPLC分离纯化制备的衍生物,并利用傅立叶红外光谱、质谱等方法鉴定衍生物结构。研究结果形成了不同结构的衍生物,可用于后续的大豆皂苷结构与免疫佐剂活性的研究。