农杆菌介导法将SPS基因导入大豆的研究

长期以来,大豆遗传转化由于受基因型限制,受体系统不完善、实验结果重复性差等因素,使农杆菌介导的大豆遗传转化频率低下。农杆菌介导法多以子叶节为受体系统,但转化体极易形成嵌合体,导致后期筛选难度加大。基因枪方法的技术难度大、易引起基因沉默。以大豆胚尖为受体,采用农杆菌介导法将玉米蔗糖磷酸合成酶(SPS)基因导入大豆基因组中。由于胚尖具有较强的分生能力,再生细胞由转化细胞而来,极大地降低了生成嵌合体的可能性。卡那霉素抗性植株经PCR及Southern杂交等分子检测,证明目的基因已导入并整合到大豆基因组中。

农杆菌介导植酸酶基因转化大豆的研究

以大豆胚尖为受体,利用农杆菌介导法将来源于泡盛曲霉的植酸酶基因phy转入黑农37和吉林小粒豆中。此法取材方便,操作简单,产生嵌合体的可能性低。在筛选培养基中经草胺膦(1.0 mg.L-1)筛选,获得抗性植株。对获得的草胺磷抗性植株采用除草剂(10%Basta)筛查表型鉴定与目的基因、筛选标记基因PCR分子检测相结合的方法,检测结果直观、可信度高。最终获得5株阳性植株,转化率为0.5%。