胰酪大豆胨琼脂培养基比对研究

目的研究5个不同品牌胰酪大豆胨琼脂培养基产品信息标识差异,分析适用性检查结果,为提高检验检测效率,规范培养基生产和管理提供研究依据。方法比对5个不同品牌,各3个批号的胰酪大豆胨琼脂培养基内外包装信息标识和自检项目,并按照《中华人民共和国药典》2020版四部和《食品安全国家标准食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求》(GB 4789.28-2013),对培养基适用性进行研究分析。结果5个品牌胰酪大豆胨琼脂培养基内外包装标识信息存在较大差异,自检报告使用的检验依据和具体检测项目以及适用性判定标准都不相同,5个品牌胰酪大豆胨琼脂培养基适用性检查结果均符合相关标准要求,但相同品牌不同批号间的检查结果均一性存在差异。结论培养基质量控制标准有待规范和完善,有利于培养基生产和使用。

大豆胨制备工艺条件研究

以脱脂豆粕为原料,通过"碱提酸沉"法制备大豆分离蛋白,经正交实验确定的最适条件是碱液萃取温度为50℃、碱液萃取p H值为8、酸沉淀p H值为4.0。以所得的大豆分离蛋白为反应底物制备大豆胨并优化其制备工艺。结果表明,反应的最佳条件为:酶解温度为55℃,酶解p H值为7.5,底物浓度为5%,E/S为16 g/kg。将按照此工艺条件制备出的大豆胨的各项理化指标与所购标准品相比,差异不大。氨基酸分析结果表明,大豆胨中必需氨基酸种类丰富齐全,可为微生物的生长提供丰富的营养。

人参土芽孢杆菌用于胰酪大豆胨琼脂培养基的质量控制研究

目的:通过考察辅料检出的人参土芽孢杆菌(Bacillus ginsengihumi)在不同胰酪大豆胨琼脂培养基(TSA)的生长情况反映培养基的性能差异,讨论菌株作为TSA培养基适用性试验用菌的可行性。方法:将带菌辅料和经多项鉴定的人参土芽孢杆菌分别接种至8个厂家的TSA培养基和TSA对照培养基,讨论9种TSA培养基对辅料污染微生物的检出能力,以及8家企业TSA培养基对人参土芽孢杆菌的促生长能力。结果:由于该辅料携带微生物对营养要求的特殊性,部分厂家TSA检出能力不足,需氧菌总数检查结果偏低。仅B、E两个厂家培养基的促生长能力较高(均大于70%),结果与检出能力一致。结论:质控实验室根据实际需要,可将人参土芽孢杆菌作为TSA质量控制菌株之一。通过本文的讨论模式,各质控实验室也可增加生产环境或产品中的分离菌株,以用于培养基的质量评价,确保培养基对样品检测的灵敏度和可信度,使检验方法更加科学,检验结果更加准确。

铜绿假单胞菌定量冷冻干燥菌球与新鲜制备菌悬液用于胰酪大豆胨琼脂培养基适用性检查的研究

目的:探讨使用铜绿假单胞菌CMCC(B)10104定量冷冻干燥菌球制备菌悬液(以下简称冻干型菌悬液)与新鲜制备菌悬液(以下简称新鲜型菌悬液)评价胰酪大豆胨琼脂培养基适用性的差异。方法:将铜绿假单胞菌CMCC(B)10104冻干型菌悬液和新鲜型菌悬液分别涂布5种市售胰酪大豆胨琼脂培养基,获得培养物的菌落数量、菌落平均直径及肉眼可见菌落出现时间,使用SPSS软件进行统计学分析。结果:铜绿假单胞菌CMCC(B)10104冻干型菌悬液与新鲜型菌悬液的差异主要体现在菌落平均直径上,前者大于后者。铜绿假单胞菌CMCC(B)10104冻干型菌悬液在不同品牌胰酪大豆胨琼脂培养基平板上菌落计数明显不同。结论:使用铜绿假单胞菌CMCC(B)10104冻干型菌悬液更利于筛选对损伤菌促生长能力强的培养基,可以用于计数培养基(胰酪大豆胨琼脂培养基)适用性检查。

环境监测用胰酪大豆胨琼脂培养基中和消毒剂效能验证

目的:验证环境监测用胰酪大豆胨琼脂培养基(Tryptone Soya Agar,TSA)中和消毒剂的效能。方法:配制7种常见环境微生物菌悬液,每一种菌的理论配制浓度为200 CFU/mL,对配制后的菌悬液进行平皿菌落计数。模拟生产车间人员消毒行为,在距离TSA平皿水平距离大于100 cm、垂直距离40 cm的位置,喷洒消毒剂(75%乙醇和70%无菌异丙醇)进行手部消毒,分别在消毒前后用菌悬液涂布TSA平皿,同时分别设置阴性对照组和空白对照组,用独立样本t检验方法对培养基菌落进行统计学分析。结果:金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉、表皮葡萄球菌、婴儿芽孢杆菌的实际浓度分别为270 CFU/mL、240 CFU/mL、220 CFU/mL、220 CFU/mL、150 CFU/mL、300 CFU/mL、330 CFU/mL。通过统计学分析,各实验处理组的菌落计数结果与空白对照组差异不显著(P>0.05)。结论:当前公司车间人员的日常手部消毒方式对环境监测用胰酪大豆胨琼脂培养基造成的消毒剂残留不影响环境微生物的培养,环境监测结果真实可靠。

大豆果胨的生产方法

美国4564530号专利叙述了大豆果胨的生产方法,兹介绍如下: 该发明专利是用密封包装方法生产大豆果胨产品。其主要成分系大豆、琼脂和糖。 以前人们知道用琼脂可以生产大豆果胨。在亲水胶体中,琼脂被认为是最合适的。它可以与大豆蛋白进行反应,但它易使大豆蛋白絮凝不理想。琼脂实际上是唯一能生产出质地滑润、均质性好、富含水分的大豆果胨的亲水胶体。问题在于如何利用琼脂和密封容器来实现工业化生产大豆果胨。

《美国药典》35版附录“<62>非无菌产品微生物检查:控制菌检查法”中两个问题的探讨

目的:探讨耐胆盐革兰阴性菌检查中,胰酪大豆胨肉汤预培养是否能达到对菌体只复苏不增殖的目的;肠道增菌肉汤颜色指示特性的必要性。方法:采用不同菌株和不同厂家培养基,依据《美国药典》35版方法进行对比考查。结果:胰酪大豆胨肉汤按规定的最短预培养时间培养后菌体有增殖;不同厂家肠道增菌肉汤培养基的颜色指示特性具有不一致性。结论:微生物经胰酪大豆胨肉汤预培养在复苏的同时菌数有所增加;肠道菌增菌肉汤无需观察颜色指示特性。

胰酪胨大豆肉汤培养基和改良马丁培养基在药品无菌检查中的比较研究

目的:观察胰酪胨大豆肉汤培养基(TSB)和改良马丁培养基(MM)对真菌和需氧菌检测效果的差异。方法:选用3株细菌和3株霉菌试验菌株,用定性和定量2种方法分别测试培养基对试验菌株的促生长能力和检测灵敏度;定性方法参照现行中国药典;定量方法采用平板计数法。结果:定性和定量2种检测方法所得的实验结果基本一致,除腊叶芽枝霉外,在规定的条件下TSB和MM培养基对试验菌株的促生长能力比较,经统计学分析,差异无显著性(P>0.05);TSB培养基对所有试验菌株的检测灵敏度均可达到<1 CFU,下限可达到<0.1 CFU,与MM培养基比较,差异无显著性(P>0.05)。结论:在现行中国药典规定的接种和培养条件下,TSB培养基对试验菌株的促生长能力和检测灵敏度与MM培养基基本等同,能满足我国现行药典的检测要求。

透气包装材料湿性微生物屏障试验方法研究

YY/T 0681.14—2018《无菌医疗器械包装试验方法第14部分:透气包装材料湿性和干性微生物屏障试验》[1]中规定,透气包装材料湿性微生物屏障试验方法,将微生物液滴滴加到试验样品上,液滴干燥后,进行试验以测定是否有微生物穿透到试验样品的另一面。根据试验结果评价透气包装材料是否可以提供充分的微生物屏障。该行业标准中关于培养基和试验微生物制备方法比较单一,存在一定的局限性,本文旨在研究方法的改进措施以使之具有更广泛的实践指导意义。

粉针剂工艺模拟分装过程验证探讨

目的通过无菌乳糖模拟分装工艺验证证实分装注射用无菌粉末的无菌生产工艺规程和从事此生产工艺的操作人员能够保持产品的无菌性,证明其无菌工艺的可靠性。方法采用无菌乳糖干燥粉替代无菌原料药,模拟分装于西林瓶,然后于西林瓶中加入胰酪胨大豆肉汤液体培养基的方法来进行验证,将分装样品先后在20~25℃与30~35℃下培养7d,并作阴性、阳性对照。结果无菌分装环境及操作人员表面微生物检查合格,阴性、阳性对照成立,试验样品无菌。结论无菌粉针剂分装过程中,经培训的操作人员在规定的洁净环境中按操作规程操作所生产的产品可以保证无菌。

血液制品无菌生产工艺验证-培养基灌装试验

目的通过无菌灌装胰酪胨大豆肉汤培养基来验证血液制品无菌生产工艺的有效性和安全性。方法按正常分装程序进行无菌灌装,同时在灌装过程中模拟最快灌装速度、最多工作人员数量、最大灌装数量、最长工作时间、常规干扰试验和非常规干扰试验。结果通过模拟灌装过程中的最快灌装速度、最多工作人员数量、最大灌装数量、最长工作时间、常规干扰试验和非常规干扰试验,分装后的培养基孵放后无微生物生长。结论无菌灌装胰酪胨大豆肉汤培养基的验证过程及结果可以证明血液制品无菌生产工艺的控制是有效的和安全的。

口服液体药用塑料瓶微生物污染状况分析及试验方法改进

目的:通过分析口服液体药用塑料瓶的微生物污染状况,评价其对口服液体制剂质量的贡献。方法:参考中国药典2010年版和美国药典36版方法,测定2013年全国评价性抽验中得到的4个品种、9种规格、43家企业的55批口服液体药用塑料瓶的微生物种类和数量。采用薄膜过滤法处理样品提取液,用胰酪大豆胨琼脂培养基进行培养,计数需氧菌总数,用胆盐乳糖增菌液培养,进行控制菌检查。结果:每批样品的细菌、霉菌和酵母菌数及大肠埃希菌均符合国家药品包装容器(材料)标准(试行)规定,58%的样品未检出污染微生物,污染有微生物的样品菌数均未超过7 cfu·瓶-1,均为环境污染菌芽孢杆菌类及球菌类,且均未检出大肠埃希菌。结论:口服液体药用塑料瓶微生物污染未超标。将细菌数、霉菌和酵母菌数统一合并为需氧菌总数测定,可在一张滤膜上同时测定样品的细菌数、霉菌和酵母菌数。改进的检验方法具有省时、方便的特点。

3种培养基运用于饮料无菌冷灌装生产线无菌验证效果的评价

目的通过比较LG培养基(LG)、胰酪胨大豆肉汤(TSB)和改良马丁培养基(MMB)对细菌和真菌的检测灵敏度和促生长能力,评价LG培养基是否适用于PET瓶无菌冷灌装生产线的无菌验证。方法选用4株细菌和2株真菌分别对LG、TSB和MMB培养基的检测灵敏度和促生长能力进行评估。结果4种细菌在LG与TSB中的检测灵敏度相当,两者略优于MMB;2种真菌在LG与MMB中的检测灵敏度与促生长能力相当,两者略优于TSB。结论LG培养基无论对细菌还是真菌,均具有较高的检测灵敏度及较优的促生长能力,而且该培养基成本比较低,非常适用于需要使用大量培养基的无菌冷灌装生产线的无菌验证。