大豆蛋白酶抑制剂对内毒素致大鼠急性肺损伤的实验研究

目的:研究大豆蛋白酶抑制剂对内毒素致大鼠急性肺损伤的防治作用。方法:SD雄性大鼠50只,分为假手术组,模型组,阳性药苯甲磺酰氟(PMSF)组,大豆蛋白酶抑制剂高、中剂量组共5组,每组10只。除假手术组外其余各组大鼠气管内注入内毒素(6 mg·kg^(-1)),假手术组大鼠气管内注入等量的生理盐水。造模后第1天腹腔注射治疗药物,大豆蛋白酶抑制剂(SBTI)高、中剂量组分别150,100 mg·kg^(-1)·d^(-1)。阳性药组大鼠给与等体积的苯甲磺酰氟50 mg·kg^(-1)·d^(-1);假手术组和模型组大鼠腹腔注射等量的生理盐水。造模后第7天取材,测定肺系数、肺通透指数、肺泡灌洗液中细胞计数和中性粒细胞百分比、弹性蛋白酶样活性,肺组织NF-κB和IκBα的活性测定,HE染色进行病理学观察。结果:PMSF和SBTI均能降低急性肺损伤大鼠肺系数、肺通透指数,降低肺泡灌洗液中的细胞总数、活化中性粒细胞百分比和弹性蛋白酶样活性。其中以阳性药组和SBTI高剂量组疗效较显著,阳性药疗效优于SBTI高剂量组。SBTI组大鼠肺组织核蛋白中NF-κB p65的含量明显降低(P<0.01),SBTI组大鼠肺组织胞浆蛋白中IκBα的含量明显升高(P<0.05)。结论:大豆蛋白酶抑制剂显著降低肺组织的炎症反应,减轻肺组织损伤,对内毒素致大鼠肺损伤具有一定的保护作用。

草鱼丝氨酸蛋白粗酶的提取、酶学特性及大豆胰蛋白酶抑制剂对其活性的影响

【目的】探究草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶(MBSP)粗酶的提取方法、酶学特性,以及大豆胰蛋白酶抑制剂(STI)对草鱼鱼糜凝胶品质的影响,为改善传统草鱼鱼糜制品品质提供理论基础。【方法】从草鱼背肌中提取MBSP粗酶液,探究提取过程中漂洗次数(1~5次)、热处理温度(35、40、45、50、55℃)、酸洗脱pH值(pH 4.0、pH 5.5)对提取液酶活性的影响,获得最佳提取条件;设置梯度实验探究所得酶的最适温度、pH、稳定性等酶学特性,最后探究大豆胰蛋白酶抑制剂对粗酶酶活性的影响及其对草鱼鱼糜凝胶性能的调控。【结果及结论】经3次漂洗、45℃热处理、pH 4.0酸洗脱后得到的草鱼MBSP粗酶液酶活性最高(P<0.05);所得MBSP最适pH值在9.0附近,最适温度为45℃,具有较好的温度稳定性(P<0.05),其活性可被Na^(+)在一定程度上抑制且被K+、Ca^(2+)激活(P<0.05);STI添加可以显著改善草鱼鱼糜质构,其对草鱼肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶有可逆竞争性抑制作用,半抑制质量浓度为10.85μg/mL,抑制常数Ki=0.24μmol/L。

大豆胰蛋白酶抑制剂对肉鸡生长和肠道健康的影响

近年来,随着我国畜禽养殖业向“限抗”“禁抗”“替抗”的转变,肉鸡的肠道因失去抗生素的保护而变得非常脆弱,肠道健康问题成为当前肉鸡养殖户关注的热点问题。豆粕作为肉鸡饲粮中主要的蛋白质来源,豆粕中同样含有抗营养因子—大豆胰蛋白酶抑制剂,可损害肉鸡肠道健康。因此,通过总结胰蛋白酶抑制剂的概念及其对肉鸡生长和肠道健康的影响,以期为合理利用豆粕及改善肉鸡肠道健康提供参考。

大豆胰蛋白酶抑制剂对家禽生长和肠道健康的影响

随着家禽养殖业的快速发展,饲料中常添加大豆胰蛋白酶抑制剂(Soybean Trypsin Inhibitors,SBTI)以提高家禽的生产效率。然而,大豆胰蛋白酶抑制剂(SBTI)在促进家禽生长的同时,也可能对其肠道健康产生不利影响。本文分析了大豆胰蛋白酶抑制剂(SBTI)的来源及作用机理,并系统评估了其对家禽生长性能和肠道健康的影响,提出了一套安全使用策略。

大豆胰蛋白酶抑制剂对鲢丝氨酸蛋白酶的作用

研究了大豆胰蛋白酶抑制剂(STI)对鲢肌肉中肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶(MBSP)引起的肌原纤维蛋白降解作用的影响。大豆胰蛋白酶抑制剂经高度纯化后加入肌原纤维中以判断它对MBSP的抑制效果。在不添加STI的情况下,55℃加热30min即可观察到肌球蛋白重链的分解,延长加热时间则可检测到肌动蛋白及原肌球蛋白的降解。相反,在终浓度为0.75μg·mL-1的STI存在下,包括肌球蛋白重链在内的肌原纤维蛋白降解均能得到有效抑制,表明STI是MBSP的特异性抑制剂。由于肌球蛋白重链及肌动蛋白的完整性是构成鱼糜制品凝胶强度的主要因素,因此,STI的添加有可能提高鲢鱼糜制品的凝胶强度。

四氧嘧啶型糖尿病模型小鼠糖耐量和肝糖原与大豆胰蛋白酶抑制剂的干预

背景:研究提示大豆胰蛋白酶抑制剂(soybean trypsin inhibitor,SBTI)对治疗糖尿病,调节胰岛素失调可能有一定效果。目的:观察SBTI对四氧嘧啶糖尿病模型小鼠血糖、糖耐量及肝糖原的影响。方法:采用腹腔注射四氧嘧啶方法制备小鼠糖尿病模型,将造模成功的32只小鼠随机等分为4组,另取正常8只小鼠作为对照组。造模后,SBTI-L、SBTI-H组每日分别灌胃0.27,0.80mg/kgSBTI溶液,格列本脲组每日灌胃优降糖0.16g/kg,模型组和对照组每日灌胃生理盐水,持续给药2周。给药第0,7,14天,采用葡萄糖氧化酶法测定小鼠空腹血糖和糖耐量,改良蒽酮法测定小鼠肝糖原含量。结果与结论:与模型组比较,格列本脲组、SBTI-L组、SBTI-H组血糖明显下降(P<0.05),糖耐量升幅明显减小(P<0.05),肝糖原含量明显增加(P<0.05),且SBTI-L组、SBTI-H组较格列本脲组起效快,作用时间长,以SBTI-H组效果最明显。表明SBTI有明显的降血糖、改善糖耐量、提高肝糖原含量的作用。

超声波对大豆胰蛋白酶抑制剂活性及二级结构的影响

研究了Kunitz型大豆胰蛋白酶抑制剂(KSTI)和Bowman-Birk型大豆胰蛋白酶抑制剂(BBTI)经超声波处理后的活性、巯基含量、远紫外圆二色谱的变化。发现KSTI和BBTI的单一吸收负峰在200nm波长处,KSTI的[θ]200nm=-2545deg·cm2·d/mol,, 其二级结构由22.5%β折叠,16.25%β转角和61.4%无规卷曲组成;BBTI的[θ]200nm= -797deg·cm2·d/mol,由52.6%β折叠和47.4%无规卷曲组成。用65%振幅的超声波场处理11 min 后,KSTI 的[θ]200nm值变为-1827 deg·cm2·d/mol,处理20min后,其β转角和无规卷曲的含量分别下降至10.8%和54%,而β折叠的含量则增加至35.2%,同时有约71.5%的二硫化键转变成巯基,对胰蛋白酶的抑制活性则被钝化55%;而BBTI的二级结构则表现稳定,65%振幅的超声波场处理20min后,[θ]200nm值只改变为-700 deg·cm2·d/mol,其β折叠、无规卷曲结构以及对胰蛋白酶的抑制活性基本上不受影响,仅有5.29%的二硫键转化成巯基。超声波可能是通过影响KSTI的二硫键,使其二级结构发生变化,从而影响其活性。

大豆胰蛋白酶抑制剂对带鱼鱼糜蛋白降解及其凝胶特性的影响

为提高带鱼鱼糜制品品质,以鱼糜蛋白组成、TCA-溶解肽含量及其凝胶强度等为指标,研究大豆胰蛋白酶抑制剂(STI)对带鱼鱼糜蛋白降解及其凝胶特性的影响。结果表明,带鱼鱼糜蛋白的降解与温度显著相关,随温度升高,肌原纤维蛋白重链(MHC)逐渐降解,TCA-溶解肽含量增加,在70℃时达到最高值(1.3μmol酪氨酸·g^(-1))。添加STI能够一定程度抑制带鱼鱼糜凝胶劣化样品和凝胶化样品中肌原纤维蛋白的降解,降低TCA-溶解肽含量。当STI添加量为0.10‰时,凝胶劣化样品和凝胶化样品的TCA-溶解肽含量达到最低值,分别为0.13和0.30μmol酪氨酸·g^(-1),凝胶强度达到最高值,分别为414.74 g·mm和1 262.28 g·mm,而失水率分别下降为5.44%和3.76%;电镜微观结构显示,此时凝胶结构更致密、均匀,但凝胶白度值轻微下降。因此,STI可有效提高带鱼鱼糜制品品质,从而为生产高品质的带鱼鱼糜制品提供参考和依据。

不同还原剂对大豆胰蛋白酶抑制剂的钝化研究

研究了二巯基苏糖醇(DTT)、亚硫酸钠(Na2SO3)和半胱氨酸(Cys)对大豆胰蛋白酶抑制剂活性的影响。实验在温度80℃,pH7.5条件下反应,并以BAPNA为底物,采用改进的方法测定DTT对大豆蛋白酶抑制剂的钝化作用,最后用SDS-PAGE方法和凝胶排阻色谱法研究其蛋白酶钝化敏感性。通过改进的BAPNA法得出还原剂钝化大豆胰蛋白酶抑制剂由大到小顺序依次为:DTT>Na2SO3>Cys,并通过SDS-PAGE进一步证实了比色法得出的结论。而凝胶排阻色谱法说明了还原剂对大豆胰蛋白酶抑制剂作用使得抑制剂中二硫键被打断,抑制剂结构发生改变,有新的物质生成。所以,得出大豆胰蛋白酶抑制剂的稳定性与二硫键的存在有关。

响应面法对大豆胰蛋白酶抑制剂粗提工艺的优化

目的:对大豆胰蛋白酶抑制剂粗提工艺进行优化。方法:以提取液pH值、热变性温度和硫酸氨饱和度作为影响大豆胰蛋白酶抑制剂提取率的因素,通过单因素试验选取因素与水平,根据Box-Behnken中心组合试验设计原理,在单因素试验基础上采用三因素三水平响应面分析法,依据回归分析确定各工艺条件的主要影响因素,以大豆胰蛋白酶抑制剂提取率为响应值作响应面分析。结果:胰蛋白酶抑制剂提取的最佳工艺条件为提取液pH5.1、热变性温度72.8℃、硫酸氨饱和度54.5%,在此条件下,胰蛋白酶抑制剂的提取率达到86%。结论:采用响应面分析法可以对大豆胰蛋白酶抑制剂粗提工艺进行优化。

两种大豆胰蛋白酶抑制剂的抑制活性及二级结构分析比较

研究了I型Kunitz大豆胰蛋白酶抑制剂(I-KSTI)和Bowman-Birk大豆胰蛋白酶抑制剂(BBTI)对胰蛋白酶的抑制活性及其二级结构的组成差异。发现I-KSTI及 BBTI对胰蛋白酶的抑制曲线分为两部分:活性急剧下降部分和缓慢下降部分。使胰蛋白酶的活性降为原来的一半时的I-KSTI和BBTI浓度为1.5μg/ml 和1.2μg/ml。使胰蛋白酶活性趋向于零(完全钝化)时的I-KSTI浓度为13.5μg/ml,而BBTI则为9μg/ml。两种抑制剂的存在不改变胰蛋白酶的Km值,但其Vmax随抑制剂浓度的增加而下降。表明其对胰蛋白酶的抑制作用是一种非竞争性抑制作用。远紫外圆二色谱的研究发现I-KSTI和BBTI的单一吸收负峰在200nm波长处,I-KSTI的克分子椭圆度[θ]200nm=-2545deg·cm2/d mol,其二级结构由22.5%β折叠,16.25%β转角和61.4%无规卷曲组成;BBTI的[θ]200nm=-797deg·cm2/d mol,由52.6%β折叠和47.4%无规卷曲组成。

枯草杆菌蛋白酶水解大豆胰蛋白酶抑制剂的研究

采用改进的BAPNA法探讨了枯草杆菌蛋白酶对大豆胰蛋白酶抑制剂的水解作用 ,通过实验确定了最适反应条件为 :反应温度 4 0～ 60℃、pH值 7.5～ 8.5、酶活力≥ 4 00 0 0units/mL以及 4 0min的反应时间 .

大豆胰蛋白酶抑制剂对南极磷虾类胰蛋白酶的抑制动力学

为了探讨大豆胰蛋白酶抑制剂(STI)对南极磷虾(Euphausia superba)类胰蛋白酶的抑制动力学,采用邹氏不可逆抑制动力学法,测定了STI对该酶的微观速度常数。结果表明:南极磷虾类胰蛋白酶的Km和Vmax分别为0.155 mmol/L,8.44μmol/(L.min)。酶活力随着STI溶液浓度增大而减小,其IC50约为2.8μg/mL;低浓度的STI溶液对酶的抑制作用为竞争性慢可逆抑制。正向微观速度常数k+0为0.184 mmol/(L.min),逆向微观速度常数k-0为0.039 4 min-1,随着STI溶液浓度的逐渐增大,该酶最终将完全失活。本研究旨为该酶的抑制技术研究提供实验数据。

山东产野生大豆胰蛋白酶抑制剂的初步研究

该实验建立了HPLC测定大豆胰蛋白酶抑制剂(STI)活性的方法,并对山东产野生大豆(G.soja)与同地区产的黑豆和黄豆(G.max)的胰蛋白酶抑制活性差异进行了比较。用耦合了胰蛋白酶的亲合色谱柱对野生大豆的STI进行分离纯化,紫外分光光度法比较3种大豆的STI含量;PCR结合TA克隆技术对野生大豆STI中的Kunitz型(KSTI)蛋白基因编码区的氨基酸顺序进行初步测定。结果发现,山东产野生大豆的STI活性和含量均高于同地区产的黑豆和黄豆;山东产野生大豆的KSTI蛋白基因编码区的氨基酸顺序与已知的Tia型基本一致,仅第59位氨基酸由于单核苷酸的置换发生了Ser→Thr的转变,此位置位于活性中心附近。研究表明,山东产野生大豆胰蛋白酶抑制活性较强,且含量高。

Bowman-Birk型大豆胰蛋白酶抑制剂研究进展

阐述Bowman-Birk型大豆胰蛋白酶抑制剂(BBI)的分子结构、作用机制,并对其在医药领域、饲料工业及植物抗虫害等方面的研究进展进行了综述和展望。

大豆胰蛋白酶抑制剂的分离纯化

采用盐析、等电点沉淀、DEAE-Cellulose-32离子交换柱层析纯化大豆胰蛋白酶抑制剂,电泳测定其相对分子量为20.1ku,BAEE(苯甲酰-L-精氨酸乙酯)法测定抑制比为0.9∶1。纯化后的SBT(I大豆胰蛋白酶抑制剂)可以作亲和层析纯化丝氨酸蛋白酶的配基。

大豆胰蛋白酶抑制剂抑制肺癌PG细胞生长及诱导细胞调亡的研究

目的研究大豆胰蛋白酶抑制剂(SBTI)在体外对人肺癌PG细胞生长抑制作用和对细胞周期的影响。方法采用MTT法检测SBTI对人肺癌PG细胞的增殖抑制作用;流式细胞仪检测SBTI对人肺癌PG细胞周期的影响;电子显微镜观察SBTI对细胞调亡的作用。结果 SBTI对人肺癌PG细胞的生长有明显抑制作用;SBTI可以将人肺癌PG细胞阻滞于S期;SBTI可以促使人肺癌PG细胞出现明显的染色质浓缩和凋亡小体,诱导人肺癌PG细胞的凋亡。结论大豆胰蛋白酶抑制剂能抑制人肺癌PG细胞生长、诱导人肺癌PG细胞调亡的作用,其作用的机制为阻滞人肺癌PG细胞于S期,促使人肺癌PG细胞出现明显的染色质浓缩和凋亡小体,实验为大豆胰蛋白酶抑制剂抗肿瘤效应提供了实验依据。

不同辐照下大豆胰蛋白酶抑制剂荧光的小波分析

用db4小波分析了不同剂量的60Co-γ辐照下大豆胰蛋白酶抑制剂(KSTI)的荧光发射谱.结果表明:随着辐照剂量的增加,KSTI蛋白分子破碎程度加深,光谱噪声加重,因此要获得KSTI光谱相关信息,需要对不同的光谱数据进行不同层次的小波分解和重构.

高压脉冲电场对大豆胰蛋白酶抑制剂的钝化效果

研究了高压脉冲电场对大豆胰蛋白酶抑制剂的钝化效果。结果表明:随着脉冲强度和脉冲处理时间的延长,大豆胰蛋白酶抑制剂活性下降,但效果不太显著。当脉冲电场和加热联合使用时,可以明显地钝化大豆胰蛋白酶抑制剂的活性,尤其是先脉冲处理后加热钝化效果更为显著。