基于模拟酶切的大豆7S球蛋白酶解改性探究

为高效筛选适用于改善大豆7S球蛋白酸溶特性的蛋白酶,该文利用PeptideCutter软件对7S进行模拟酶切,然后采用Compute pI/M_(w)软件预测生成肽段的等电点(isoelectric point,pI),从中挑选pI>pH 6.0或pI<pH 3.0的肽段建立肽库,结果发现在39种选定蛋白酶中能得到20个以上目标肽段的蛋白酶依次分别是蛋白酶K、胃蛋白酶、嗜热菌蛋白酶、胰凝乳蛋白酶和胰蛋白酶。实验验证表明,上述5种优势酶都可不同程度提高7S在pH 3.0~4.5下的蛋白溶解度(protein solubility,PS),其中蛋白酶K表现最佳,其制备的7S酶解产物的PS在pH 3.0~5.0下约为81%。进行电泳和Zeta电位分析发现与模拟酶切预测结果一致,5种优势酶可将7S中α′、α和β亚基完全降解成小分子肽,所得7S酶解产物等电点与对照7S相比向酸性方向偏移。但由于7S酶解过程的复杂性,当不同蛋白酶模拟酶切所得目标肽段数量相差不大时,预测结果不够准确。采用Turbiscan稳定性分析仪测定发现7S经蛋白酶K酶解改性后在酸橙汁(pH 3.86)中不易引起絮凝沉淀。该研究表明基于计算机模拟酶切指导7S酶解改性可大大提高水解用酶的筛选效率,所制备的7S酶解产物具有良好的酸溶特性,在酸性饮料中有应用前景。

大豆7S球蛋白结构特性与表面疏水性相关性研究

以具有代表性的6个大豆品种制备的大豆7S球蛋白为研究对象,采用ANS荧光探针法测定表面疏水性,Ellman试剂分析法测定巯基和二硫键含量,激光拉曼光谱和荧光光谱分析空间构象,探讨大豆7S球蛋白结构特性与表面疏水性的相关性。结果表明:大豆7S球蛋白的表面疏水性与二级结构的α-螺旋含量和β-折叠含量呈负相关,与二级结构的β-转角含量和无规则卷曲含量呈正相关;与色氨酸残基荧光峰λ_(max)呈正相关,与拉曼光谱色氨酸费米共振I_(1360)/I_(1340)值呈负相关,与拉曼光谱酪氨酸费米共振I_(850)/I_(830)值呈正相关,与暴露的酪氨酸残基克分子数呈正相关,与N_(暴露)和N_(包埋)的比值呈正相关;与暴露巯基含量、巯基暴露程度呈正相关,与游离巯基含量、二硫键含量、二硫键构象的相关性均不显著。

大豆7S球蛋白热力学特性、溶解性和溶液性质与表面疏水性相关性研究

以6个具有代表性的大豆品种制备的7S球蛋白为实验对象,采用ANS荧光探针法测定表面疏水性,采用差示扫描量热法分析热力学特性,采用体积排阻-凝胶色谱法分析溶液的相对分子质量及其分布,采用Zeta Plus电位及激光粒度分析仪分析流体动力学粒径及其分布并测定ξ-电位,研究大豆7S球蛋白热力学特性、溶解性和溶液性质与表面疏水性的关系。结果表明:大豆7S球蛋白的表面疏水性与变性温度、变性焓、ξ-电位绝对值均呈显著负相关;大豆7S球蛋白的溶解性与表面疏水性呈极显著负相关;大豆7S球蛋白溶液可溶性聚集物的平均相对分子质量、平均粒径与表面疏水性呈显著正相关。

糖基化反应对大豆7s球蛋白凝胶流变性质的影响

利用葡萄糖对大豆7s球蛋白进行湿法糖基化处理,制备出大豆7s球蛋白3种糖基化产物。通过旋转流变仪、质构仪和扫描电镜对大豆7s球蛋白及其3种糖基化产物凝胶的流变性、质构性及微观结构进行分析,研究糖基化反应对大豆7s球蛋白热致凝胶性的影响。结果显示:糖基化反应提高了大豆7s球蛋白的热稳定性,提前了大豆7s球蛋白的凝胶点,增加了大豆7s球蛋白凝胶的粘弹性,说明糖链的接入促进了大豆7s球蛋白凝胶网络的形成。

菠萝蛋白酶限制性酶解大豆7S球蛋白产物在猪肉肠中的应用

采用菠萝蛋白酶对大豆7S球蛋白进行限制性水解,将不同水解度的7S球蛋白酶解产物添加到猪肉肠中进行应用研究。以质构特性、肉肠得率为评价指标,比较了不同水解度和添加量的7S球蛋白酶解产物对猪肉肠品质的影响。采用正交试验,确定了猪肉肠专用蛋白的最佳工艺参数:7S球蛋白水解度为6%,添加量为1.5%。

大豆7S球蛋白凝胶光学性质的研究

本文深入地研究了大豆 7S球蛋白凝胶光学和流变学性质与蛋白质浓度、加热温度和加热时间的关系。结果表明 :在形成蛋白质凝胶 (蛋白质浓度≥ 7.5% )的前提下 ,低的蛋白质浓度有利于大豆 7S球蛋白形成透明性凝胶 ,但凝胶强度较低 ;温度 >85℃有利于蛋白凝胶透明性和强度的提高 ;加热 6 0min .较为适宜。扫描电子显微镜 (SEM)观察显示 :大豆 7S球蛋白透明凝胶具有有序微观结构 ;探讨了大豆 7S球蛋白形成透明凝胶机理。

大分子拥挤环境下大豆7S球蛋白糖基化研究

生命科学领域中的大分子拥挤环境作为反应介质进行Maillard反应制备大豆7S球蛋白-葡聚糖共价复合物。对液相体系中发生Maillard反应的各种影响因素进行系统研究,并采用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)技术证实大豆7S球蛋白和葡聚糖发生了共价结合,得出共价复合物制备的最优条件。结果表明:5%的7S球蛋白与15%的葡聚糖在pH7.0条件下,95℃反应6h后,形成了良好的大分子共价复合物。产物色泽良好,褐变程度较低,反应时间大大缩短。

葡聚糖对大豆7S球蛋白的物性修饰

通过大分子拥挤环境下液相体系中发生Maillard反应制备大豆7S球蛋白-葡聚糖共价复合物,采用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)技术证实大豆7S球蛋白和葡聚糖发生了共价结合。采用凝胶渗透色谱(GPC)、哈克流变仪、荧光分光光度计、紫外可见分光光度计系统研究了共价复合物的形成及葡聚糖共价键入后对蛋白特性的影响。结果表明:5%的7S球蛋白与15%的葡聚糖在pH7.0条件下,95℃反应6h得到的产物接枝度较高,大豆7S球蛋白和葡聚糖形成了大分子的共价复合物,产物乳化活性提升了约221.7%。

醇变性大豆7S球蛋白结构特征研究

利用不同体积分数乙醇溶液对大豆7S球蛋白进行变性。分别对醇变性大豆7S球蛋白溶解度、表面疏水性、二级结构和聚集形态进行分析。大豆7S球蛋白经醇溶液变性后，溶解度在乙醇体积分数为55％～65％时基本达到最低值；表面疏水性在乙醇体积分数为25％和65％时分别达到最大值和最小值。傅立叶红外光谱表明，在乙醇体积分数较低时，β-折叠结构能稳定存在；在乙醇体积分数较高时，β-折叠和α-螺旋之间结构发生转变，呈现较高螺旋态。凝胶电泳表明，7S球蛋白亚基间以非共价相互作用力为主；经醇变性后，导致聚集体产生，且7S球蛋白分子间非共价相互作用随乙醇体积分数增大呈有逐渐增大趋势。

大豆7S球蛋白透明凝胶形成机理研究

深入研究了大豆 7S球蛋白凝胶透明性和流变学性质与pH值、加热温度、蛋白质浓度、NaCl浓度的关系。结果表明 :在pH <3.5或pH >6 .5、蛋白质浓度 >7.5 %、低NaCl浓度 (<5 0mmol/dm3) ,有利于大豆 7S球蛋白形成透明性凝胶 ,但凝胶强度较低 ;温度 >85℃有利于蛋白凝胶透明性和强度的提高。电子显微镜观察显示 :大豆7S球蛋白透明凝胶具有有序微观结构 ;探讨了大豆 7S球蛋白形成透明凝胶机理。可为进一步研究大豆蛋白凝胶的光学性质和研制透明的大豆蛋白产品提供理论依据。

糖基化方法对于大豆7S球蛋白糖基化反应及产物的影响

针对传统的两种糖基化接枝方法和改进方法从糖基化反应程度进行系统比较,并对产物氨基酸组成进行分析,以期进一步揭示蛋白质糖基化方法对于糖基化反应过程及产物的影响机制。本文利用干热法、湿热法和加压辅助湿热三种糖基化方法,对大豆7S球蛋白和葡聚糖的糖基化产物从反应程度、氨基酸组成等方面进行研究,结果表明:三种制备方法的反应程度高低顺序依次为:湿热法>加压辅助湿热法>干热法,说明压力能够对Maillard反应的进行具有一定的抑制作用,可以控制反应向理想阶段进行。大豆7S球蛋白和葡聚糖的糖基化主要发生在蛋白质肽链上的赖氨酸和精氨酸侧链上的自由氨基,干热法与其它两种方法相比糖链更有易于和精氨酸侧链上的自由氨基发生共价交联,而湿热法和加压辅助湿热法相比糖链更易于和赖氨酸侧链上的自由氨基发生共价交联。

大豆7S球蛋白与葡聚糖共价键合纳米凝胶的制备与表征

基于蛋白质与多糖的Maillard反应与自组装制备一种新型的绿色的具备核壳结构的纳米凝胶。利用干热反应制备大豆7S球蛋白与葡聚糖的共价接枝物(soy β-conglycinin-dextran conjugates,SDC),通过对SDC热处理使其自组装成大豆7S球蛋白-葡聚糖纳米凝胶(soy β-conglycinin-dextran nanogels,SDN),对其形貌、结构及性质进行分析,并利用多糖的空间位阻效应抑制蛋白质宏观过度聚集的理论指导,探讨尺寸均一SDN的形成机制。形貌学与zeta电位分析表明SDN为具备核壳结构的球状粒子,其外壳由亲水性的葡聚糖构成,内核由凝胶化的蛋白构成;表面疏水性分析表明内核蛋白的三级结构发生转变,疏水基团暴露,从而形成多个疏水空腔;稳定性分析表明SDN具有高度的pH稳定性与储存稳定性,对疏水活性物质的输送载体构建具有重要的借鉴意义。

大豆7S球蛋白的MTGase条件对其表面疏水性与功能特性、溶液性质的影响及相关性分析

本文以微生物转谷氨酰胺酶(MTG)酶添加量(10、20、30、40、50 U/g)、pH(3.0、4.0、5.0、6.0、7.0)、温度(40、45、50、55、60℃)为单因素交联处理大豆7S球蛋白,采用ANS(1-苯胺基-8-萘磺酸)荧光探针法测定表面疏水性,马尔文粒度仪测定平均粒径、Zeta电位,测定了乳化性、乳化稳定性,分析单因素处理对交联效果的影响,并探讨了大豆7S球蛋白表面疏水性与其乳化性、乳化稳定性和溶液性质的相关性。结果表明:酶添加量为20 U/g,pH7.0,温度55℃时,对其表面疏水性、乳化性、乳化稳定性和平均粒径改善作用明显,表面疏水性值为1268.7,乳化性值为225.05 min,乳化稳定性值为86.66%,平均粒径99.03 nm;通过相关性分析,大豆7S球蛋白的表面疏水性与乳化性成正相关,与乳化稳定性无相关性;与平均粒径成显著正相关,与Zeta电位成负相关,相关系数分别为0.718(P=0.003)、0.304(P=0.270)、0.860(P=0.005)、-0.727(P=0.02)。

维生素A对大豆7S球蛋白致仔猪肠上皮细胞屏障功能损伤的影响

以仔猪肠上皮细胞(IPEC-J2)为研究对象,用大豆7S球蛋白作为诱导因素,通过检测细胞活力、细胞跨膜电阻(TEER)、荧光素钠渗透率、细胞膜完整性相关指标与紧密连接蛋白的mRNA表达情况,探究维生素A(V_(A))对大豆7S球蛋白致IPEC-J2细胞屏障功能损伤的影响。结果显示:5.0 mg·mL^(-1)大豆7S球蛋白导致IPEC-J2活力、TEER与ZO-1、Claudin-1、Occludin的mRNA表达量极显著(P<0.01)降低,而荧光素钠渗透率和细胞培养液中碱性磷酸酶(ALP)、乳酸脱氢酶(LDH)、二胺氧化酶(DAO)、肠型脂肪酸结合蛋白1(IFABP1)的含量极显著(P<0.01)升高;添加0.1和1μmol·L^(-1)V_(A)极显著提高了细胞活力(P<0.01),0.1~10μmol·L^(-1)V_(A)显著(P<0.05)缓解了大豆7S球蛋白导致的TEER、荧光素钠渗透率、细胞膜完整性相关指标与紧密连接蛋白mRNA表达的变化;10000μmol·L^(-1)V_(A)反而加剧了这些影响。总体上,0.1~10μmol·L^(-1)V_(A)能通过保护细胞活力和细胞完整性、影响紧密连接蛋白的mRNA表达对大豆7S球蛋白导致的IPEC-J2细胞屏障功能损伤发挥保护作用,而10000μmol·L^(-1)V_(A)反而加重了这种损伤。

Box-Behnken响应面优化大豆7S球蛋白含促溶剂的反胶束提取工艺

本试验选取蔗糖和三氯蔗糖作为反胶束提取大豆7S球蛋白的促溶剂,以大豆7S球蛋白为研究对象,通过单因素试验,运用Box-Behnken响应面进行优化试验设计,研究了含有促溶剂的反胶束体系提取大豆7S球蛋白的最佳前萃和后萃条件。结果表明:蔗糖浓度0.04 mol/L、W 0为22、pH为8.7、电解质浓度0.2 mol/L、萃取温度55℃、萃取时间50 min、固液比为1.5 g/L的条件下,蛋白前萃率最高为83.21%;电解质浓度0.8 mol/L、pH为12.0、萃取温度55℃、萃取时间20 min的条件下,蛋白后萃率最高为90.5%;最终蛋白总萃取率为75.31%;SDS-凝胶电泳图显示经含促溶剂的反胶束纯化后大豆7S球蛋白不仅纯度得到了提高,而且蛋白分子的亚基折叠结构也得到恢复。结论:促溶剂的添加可以显著提高反胶束的蛋白萃取率,而且还可以维持7S球蛋白亚基的正常结构。

脉冲强光对大豆7S球蛋白理化特性、结构变化及潜在致敏性影响的研究

目的研究脉冲强光处理对大豆7S球蛋白理化特性、分子结构变化及潜在致敏性的影响。方法以分离纯化的大豆7S球蛋白为实验材料,采用Folin酚法、激光粒度仪法、圆二色谱法、荧光分光光度法、紫外分光光度法、酶联免疫吸附法探究脉冲强光处理后的7S球蛋白理化性质、结构特性及潜在致敏性的变化。结果与对照相比(0 s),脉冲强光处理能够提高大豆7S球蛋白的溶解性、乳化活性和乳化稳定性,降低7S球蛋白的平均粒径;脉冲能量500和700 J时,随着脉冲时间的增加,α-螺旋含量呈先减少后增加趋势,β-折叠含量呈先增加后减少的趋势,而能量900J时,α-螺旋含量显著减少(P<0.05),β-折叠含量变化不显著;内源荧光强度显著下降(P<0.05),表明表面疏水性显著增加(P<0.05),紫外吸光强度增加,表明脉冲强光处理使7S球蛋白的结构发生改变。随着脉冲能量和脉冲时间的增加,7S球蛋白抗原抑制率呈先下降后上升的趋势,且脉冲能量700J时,其抑制率最低,为46.13%,这可能是7S球蛋白结构的改变导致其抗原表位发生变化。结论脉冲强光处理能够改善大豆球蛋白的理化特性,且通过构象的变化影响其潜在致敏性,为脉冲强光在低致敏大豆蛋白食品中的应用提供一定的理论参考。

大豆7S球蛋白-大枣多糖复合物的制备、表征及抗原性

为了降低大豆的抗原性,通过糖基化反应制备了大豆7S球蛋白-大枣多糖(7S-JP)复合物.采用非对称场流分离技术在线联用紫外可见光检测器、多角度光散射检测器和示差折光检测器(AF4-UVMALS-dRI)研究糖基化反应温度、时间和物料比对7S-JP复合物结构的影响,对7S-JP复合物的回转半径、摩尔质量和构象进行表征;采用间接竞争酶联免疫吸附法探究7S-JP复合物的抗原性.AF4-UV-MALS-dRI结果表明:在反应温度为70℃、反应时间为20 min时,7S与JP糖基化反应效果最佳;当7S与JP的质量比为1∶3时,形成的7S-JP复合物结构紧密,有利于破坏其空间抗原表位,抗原抑制率为(69.1±0.99)%.

大豆11S和7S球蛋白提取工艺优化研究

以低温脱脂大豆粉为原料,对比大豆蛋白分离提取方法,对大豆11S和7S球蛋白提取工艺进行优化研究,并采用SDS-PAGE凝胶电泳测定提取纯度。提取大豆11S和7S球蛋白优化工艺如下:在调节pH到6.4之前,浸提液中添加0.08 mmol/L NaHSO3,5 mmol/L CaCl2,pH6.2提取大豆11S球蛋白。上清液调节pH4.8离心提取大豆7S球蛋白。结果表明,优化工艺对比传统方法有效提高了两种球蛋白提取率和纯度,提取率11S达82.8%,7S达73.2%;提取纯度11S达78.3%;7S达71.1%。

大豆7S与11S球蛋白分离方法的研究

文章就提取分离低温脱脂大豆粕中大豆7S和11S球蛋白的方法进行了研究。利用SDS-PAGE凝胶电泳来评定不同pH值对分离大豆7S球蛋白和大豆11S球蛋白的纯度的影响。实验结果表明,浸提大豆蛋白的最佳工艺参数为磷酸盐缓冲液浓度为0.02 mol/L、料液比1∶16、浸泡温度45℃、pH值为8.5,可得到最高浸提率为89.55%。分离大豆11S球蛋白的最适pH值为6.2,纯度达75.76%;分离大豆7S球蛋白的最适pH值为4.7,纯度达72.99%。

高效排阻液相色谱法分析大豆7S和11S球蛋白的分子质量和纯度

本文采用SE-HPLC法定量分析大豆7S和11S球蛋白的分子质量和纯度。首先,对SE-HPLC的色谱条件进行优化,最佳的SE-HPLC色谱条件是:洗脱液(水/乙腈)70/30,洗脱液流速1.0 m L/min,进样量10μL。其次,绘制分子质量分析的标准曲线,分子质量标准曲线方程为Log(M)=-0.222 1 x+3.878 9,线性相关系数为R^2=0.996 9。以10倍信噪比确定定量限,得到7S(y=299.59x+3.771 2,R^2=0.979 2)和11S(y=197.08x+4.148 5,R^2=0.986 1)纯度分析标准曲线方程。最后根据分子质量和纯度分析的标准曲线方程计算大豆7S和11S球蛋白的分子质量和纯度。将所提纯的7S和11S样品的分子质量与7S和11S标品特征峰分子质量进行比对,表明所提纯样品为7S和11S。本试验所制得7S和11S的纯度分别达到86.3%和92.0%。