大豆Bowman-Birk胰蛋白酶抑制因子单克隆抗体的制备与鉴定

为制备免疫学特性良好的大豆Bowman-Birk胰蛋白酶抑制因子(BBI)单克隆抗体(mAb),以50μg/只的免疫剂量将BBI免疫BALB/c小鼠,采用间接ELISA和间接竞争ELISA试验鉴定多抗血清效价和敏感性。选择血清效价和敏感性较优的小鼠进行细胞融合,多次筛选得到分泌BBI m Ab的稳定杂交瘤细胞株。采用体内诱生腹水法制备BBI mAb并对其免疫学特性进行鉴定。结果表明:1号小鼠经免疫后效价最高且敏感性最好,半数抑制浓度(IC50)为868.58 ng/mL。经细胞融合筛选得到5株杂交瘤细胞,其中3B7-B10 mAb效价达到1∶4.096×10^5以上,亚型为IgG1型,IC50为83.07 ng/mL,具有亲和力较高且特异性强的优点,表明所制备的mAb免疫学特性良好,能够为建立大豆及其制品中BBI的免疫学检测方法提供良好的抗体基础。

大豆胰蛋白酶抑制因子的研究进展

大豆胰蛋白酶抑制因子是大豆中的主要抗营养因子,是一种多肽类或蛋白质。该文对大豆胰蛋白酶抑制因子的种类,Kunitz型胰蛋白酶抑制因子和Bowman-Birk型胰蛋白酶抑制因子的结构和特性,大豆胰蛋白酶抑制因子的功能及提取纯化方法进行了综述,旨在为大豆胰蛋白酶抑制因子的进一步开发和利用提供参考。

大豆胰蛋白酶抑制因子的危害及其检测研究进展

大豆胰蛋白酶抑制因子是大豆中一类主要的抗营养因子,其主要危害表现在致使胰腺增生、肿大以及抑制动物生长等方面。近年来,针对大豆胰蛋白酶抑制因子的检测方法已成为研究热点。文章通过对大豆胰蛋白酶抑制因子的危害和现有的检测方法进行综述,旨在为大豆及其制品中胰蛋白酶抑制因子的监控以及建立大豆胰蛋白酶抑制因子快速、高效的检测方法提供参考。

大豆胰蛋白酶抑制因子的分离纯化

以脱脂豆粉为原料,经pH7.6磷酸溶液抽提、65℃热变性、硫酸铵分步沉淀等提取技术制备粗提液,之后再经过DEAE-52离子交换、亲和层析和葡聚糖凝胶过滤等纯化技术研究大豆胰蛋白酶抑制因子的分离纯化方法。结果表明,从脱脂豆粉中分离纯化的大豆胰蛋白酶抑制因子的比活力高达4 600 U.mg-1,提纯倍数为73.85。纯化的大豆胰蛋白酶抑制因子经SDS-PAGE电泳分析,呈现2条谱带,分子量分别为21.92和20.04 kDa,这2种蛋白均为大豆胰蛋白酶抑制因子。该法操作简便,分离纯化效果好,对大豆胰蛋白酶抑制因子的研究与生产有重要的参考价值。

大豆中胰蛋白酶抑制因子的生化性质和抗营养作用

生大豆中含有许多抗营养因子影响其营养价值与利用效果,其中最主要的是胰蛋白酶抑制因子。本文总结了大豆中两大类胰蛋白酶抑制因子,即Kunitz类和Bowman-Birk类抑制因子的主要生化性质,以及含大豆胰蛋白酶抑制因子的日粮对不同种类动物的饲喂效果和生理反应。另外还介绍了胰腺分泌的蛋白酶与抑制因子的识别与反应机理,以及大豆胰蛋白酶抑制因子阻碍动物生长和引起胰腺增大的作用方式。最后讨论了在研究胰蛋白酶抑制因子的抗营养作用时,需要注意的几个问题。

大豆胰蛋白酶抑制因子酶联免疫吸附测定方法的研究

本研究以纯化的大豆Kunitz胰蛋白酶抑制因子（KTI）为抗原，对兔子进行35天免疫得到了兔抗KTI血清。分别用辣根过氧化物酶（HRP）标记纯化的抗原与抗体，制备了标记适度的酶标抗原与酶标抗体。建立了3种检测KTI含量的酶联免疫吸附测定（ELISA）方法，即酶标抗原竞争、酶标抗体直接抑制和问接抑制法。结果表明，抑制率在20％～70％范围之内，3种方法得到的标准曲线均呈现良好的线性关系（r＞0．96），且检测下限均低于20ng／ml。根据得到的标准曲线，用酶标抗原竞争ELISA法测定了不同温度热处理的KTI中剩余活性部分的含量。结果表明，ELISA法与酶化学分析法的测定结果高度相关（r＝0．99），同时样品添加的回收率试验误差小于10％。酶标抗原竞争法还被用来测定了不同温度热处理的大豆和熟豆粕、全价饲料等几种大豆产品中KTI的含量。以上结果说明，用ELISA法检测生大豆和不同热加工形式的大豆产品中的剩余KTI含量是可行的。

大豆胰蛋白酶抑制因子对獭兔胰腺组织学结构的影响

选择（42±4）日龄、平均体重为（711.4±108.8）g的健康美系獭兔断奶幼兔30只,公母比例为1∶1,根据性别、体重,将30只兔随机分为3组,每组10只,公母各半,单笼饲养。3个组日粮为等能等蛋白质设计,日粮中分别含有25%生大豆、25%化学钝化大豆、25%豆粕。胰蛋白酶抑制因子含量（实测值）分别为6.55、1.99和0.81 mg/g。试验6周后,从每一个组中随机选出3只公兔进行屠宰（（91±4）日龄、平均体重为1544.2 g±114.8 g）,宰前空腹46 h,取胰腺样品在10%中性甲醛液中固定,常规石蜡切片,HE染色,用于光学显微镜组织学观察。电子显微镜观察样品用2.5%戊二醛固定,常规树脂包埋,超薄切片,铀—铅染色。光学显微镜对胰腺组织结构观察结果表明,25%生大豆组幼兔胰腺间纤维性结缔组织增生,叶间水肿,局部腺组织消失,细胞水肿,边界模糊。电子显微镜对胰腺细胞观察结果表明,生大豆组幼兔的胰腺细胞核不规则,线粒体水肿,嵴消失,局部膜破裂,内质网减少,分泌颗粒极少或消失。25%生大豆组獭兔胰腺组织结构发生异常变化,而豆粕组和化学钝化大豆组正常。

大豆胰蛋白酶抑制因子对獭兔氮平衡和养分消化率的影响

试验选择(63±4)日龄、平均体重为(1150.5±124.0)g的健康美系獭兔20只,随机分为5组,每组4只兔,公母各半。试验日粮分别含有25%生大豆、25%化学钝化大豆、25%热处理大豆、25%豆粕和13%生大豆+12%豆粕。胰蛋白酶抑制因子含量(实测值)分别为6.55、1.99、1.73、0.81和3.97 mg/g。试验结果表明,25%生大豆组显著降低饲料氮表观消化率(P<0.05),显著增加粪氮排出(P<0.05),对尿氮无显著影响;化学钝化、热处理及生大豆+豆粕组粪氮、氮消化率同豆粕组间无显著差异(P>0.05)。饲料干物质、有机物质、无氮浸出物、粗脂肪、粗纤维表观消化率5组间无显著差异(P>0.05)。

大豆胰蛋白酶抑制因子对力克斯兔消化酶活性的影响

选择42±4日龄、平均体重为711.4±108.8 g健康美系力克斯断奶幼兔50只,公母比例为1∶1,根据性别、体重将50只兔随机分为5组,每组10只,5只公兔,5只母兔,单笼饲养。预试期1周。5个组日粮为等能等蛋白设计,日粮中分别含有25%生大豆、25%化学钝化大豆、25%热处理大豆、25%豆粕和13%生大豆+12%豆粕。胰蛋白酶抑制因子含量(实测值)分别为6.55、1.99、1.73、0.81和3.97 m g/g。试验6周末,从每1个组中随机选出3只公兔进行屠宰(91±4日龄,平均体重为1544.2±114.8 g),用于测消化酶活性的胰腺样和十二指肠内容物在液氮中速冻,然后转移至-20℃低温冰箱中保存。结果表明:家兔采食25%生大豆后,胰腺和十二指肠内容物胰蛋白酶活性被显著抑制(P<0.05),胰腺中脂肪酶活性降低,但未达显著水平(P>0.05)。胰腺和十二指肠淀粉酶活性,各组间无显著差异。

大豆中抗营养因子——致甲状腺肿素、凝血素、胰蛋白酶抑制剂祛除方法初探

介绍了致甲状腺肿素、凝血素、胰蛋白酶抑制剂这3种大豆中微量含有的抗营养因子,并对其去除方法作初步研究与探讨。

茶多酚钝化大豆胰蛋白酶抑制因子(STI)的研究

探索钝化豆类中胰蛋白酶抑制因子(STI)的生物抑制方法。通过测定胰蛋白酶活性来间接反映大豆STI的活性。在探明STI对胰蛋白酶抑制效果的基础上,进行了茶多酚(TP)在不同浓度、pH值、温度和时间条件下对鲜豆奶中的STI及STI标准品(KSTI及BBI)的钝化效果。结果表明:鲜豆奶中的STI和STI标准品均对胰蛋白酶活性具有很强的抑制作用;当鲜豆奶试液、KSTI及BBI的添加浓度分别为0.5 mg/ml、28.0μg/ml和21.0μg/ml时,对胰蛋白酶活性的抑制程度最大,抑制率分别为86.67%、100.00%和97.94%;当TP试液与鲜豆奶试液的比例为1∶2(体积比)时,TP对STI的钝化效果最好,抑制率为52.30%;当TP∶KSTI为25∶1(质量比)、作用温度45℃、pH4.5、作用时间90 min时,TP对KSTI的抑制率达83.15%;当TP∶BBI为20∶1(质量比)、作用温度40℃、pH4.5、作用时间60 min,TP对BBI的抑制率达76.58%。

大豆胰蛋白酶抑制因子对力克斯幼兔生长性能和毛品质的影响

选择平均体重为711.4±108.8 g美系力克斯断奶幼兔50只,根据性别和体重随机分为5组,每组10只,公母各半,单笼饲养。5组日粮中分别含有25%生大豆、25%化学钝化大豆、25%热处理大豆、25％豆粕和13％生大豆+12％豆粕,试验期为6周。每2周称体重1次,并称饲料重,计算平均日增重和采食量;试验末测定幼兔被毛长度、细度和密度。研究结果表明,在断奶幼兔日粮中添加25％生大豆(日粮TI=6.55 mg／g)可显著抑制幼兔生长,使饲料增重比提高(P<0.05),采食量略有增加(P>0.05);化学钝化处理大豆组和加热处理大豆组幼兔的生长、饲料增重比均显著优于生大豆组(P<0.05),同25%豆粕组间无显著差异(P>0.05)。幼兔日粮中添加13%生大豆(日粮TI=3.97 mg／g),对幼兔生长、采食和饲料增重比无显著影响(P>0.05)。5组间毛品质无显著差异(P>0.05)。

不同制油工艺过程中大豆胰蛋白酶抑制因子活性变化比较研究

本研究分别对压榨、预榨—浸出和直接浸出三种大豆制油工艺进行工艺测定 ,通过测定各工序大豆样品的胰蛋白酶抑制因子 (TIs)活性 ,研究比较不同制油工艺过程对大豆TIs活性的影响。结果表明 :压榨和预榨—浸出工艺中的蒸炒工序对TIs活性影响最大 ,TIs失活率分别在 90 %和 95%以上 ;而直接浸出工艺因各厂家现行操作条件差异较大 ,TIs活性变化趋势不一 ,成品粕中TIs活性亦有较大差异。以预榨—浸出工艺成品粕的TIs活性为最低 ,压榨饼的TIs活性变异最大 ,可见 ,我国现行大豆制油工艺的预榨—浸出法最为成熟、统一 ,直接浸出法则不够稳定 ,而压榨法最不规范。

酶法钝化大豆中胰蛋白酶抑制因子的研究

采用国家标准GB 21498—2008检测钝化后大豆中胰蛋白酶抑制因子的活性。四因素四水平正交试验设计结果表明,最优的钝化工艺条件为:温度为45℃、pH 3.5、酸性蛋白酶用量为0.005μL/g、底物浓度为4%,在此条件下钝化完全,抑制率达97.8%。

大豆胰蛋白酶抑制因子的研究进展

大豆中含有许多抗营养因子影响动物的消化吸收率,其中最主要的是胰蛋白酶抑制因子。文章介绍了大豆中两类胰蛋白酶抑制因子——Kunits类和Bowman-Birk类抑制因子的理化性质、抗营养作用的机理,以及它们对不同阶段家禽的影响,并对钝化胰蛋白酶抑制因子的处理方法进行了综述。

不同制油工艺过程中大豆胰蛋白酶抑制因子活性变化比较研究

大豆饼粕是最重要的饲料蛋白质原料，其品质的优劣直接影响饲料质量。大豆饼粕品质主要取决于氨基酸的可利用率和抗营养因子的活性，这均与大豆制油工艺过程中的热处理程度有关。加热处理不足，则不能有效破坏大豆中的抗营养因子；加热处理过度，则会破坏氨基酸，降低氨基...

大豆胰蛋白酶抑制因子钝化方法的研究概况

大豆胰蛋白酶抑制因子是大豆中的主要抗营养因子，它的存在不利于大豆的开发和利用，因此，钝化大豆胰蛋白酶抑制因子对提高大豆的营养价值是有重要意义的。本文综述了三种钝化方法：物理钝化法、化学钝化法和生物钝化法，并对其钝化效果进行了比较与评价。