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题名黑曲霉脂肪酶:基因克隆、表达及体外复性
被引量:4
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作者
舒正玉
杨江科
徐莉
闫云君
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机构
华中科技大学生命科学技术学院
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出处
《微生物学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第3期443-446,共4页
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基金
国家"863"计划项目基金(No.2003AA214061)
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文摘
根据黑曲霉F044脂肪酶N-端氨基酸序列,运用生物信息学方法,找到与黑曲霉脂肪酶基因同源的候选基因A84689。根据该基因序列,设计引物直接PCR扩增得到黑曲霉脂肪酶全长基因anl。anl全长1044bp,含3个内含子,编码297个氨基酸(含信号肽27个氨基酸),与其它脂肪酶基因没有明显同源性。将编码成熟脂肪酶的anl连接到pET28a载体上得到重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21(De3),诱导表达并纯化出目的蛋白。通过大量稀释和DEAESepharoseFastFlow层析相结合的方法,变性后的纯化蛋白在体外实现再折叠复性。
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关键词
黑曲霉
脂肪酶
基因克隆
大肠杆菌
大量表达
包涵体
复性
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Keywords
Aspergillus niger, Lipase, Gene cloning, Escherichia coli, Over-expression Inclusion, Refolding
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分类号
Q78
[生物学—分子生物学]
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