大麻受体激动剂THC抑制肝癌细胞HepG2增殖和诱导其凋亡的实验研究

目的探讨激活大麻受体对肝癌细胞增殖和凋亡的作用,并对其机制进行初步研究。方法将HepG2细胞分成对照组、不同剂量大麻受体激动剂delta9-tetrahydrocannabinol(THC)处理组。MTT法测定THC对HepG2细胞增殖的影响;DNA梯度电泳法和流式细胞仪检测分析各组细胞凋亡情况;Westernblot法分析细胞大麻受体CB1、CB2、Caspase3和c-myc的蛋白表达;分光光度法检测Caspase3的活性。结果 HepG2细胞大麻受体CB1、CB2表达较L02正常肝细胞增高。THC能抑制HepG2细胞增殖,诱导HepG2细胞凋亡,上述效应具有剂量依赖性。THC可抑制HepG2细胞c-myc的表达,诱导HepG2细胞Caspase3的蛋白表达和活性。结论大麻受体激动剂THC能抑制肝癌细胞增殖,诱导肝癌细胞凋亡,此效应可能与其影响c-myc的表达和Caspase3的活性相关。

吲哚类大麻素受体选择性激动剂共同特征药效团模型的研究

大麻素受体与疼痛、炎症、骨质疏松等多种疾病紧密相关,是极具潜力的药物靶点。本研究分别选取吲哚类CB2选择性激动剂和CB1选择性激动剂为研究对象,采用Discovery studio 2019软件分别构建两种激动剂共同特征药效团模型,首次对这两种药效团模型进行比较分析。随后通过测试集和ROC曲线两种验证方法对CB2选择性激动剂药效团模型的可靠性进行验证和筛选,得到一个最佳模型,该模型可用于天然化合物数据库的筛选,为发现新型CB2选择性激动剂提供理论基础。

内生大麻素受体激动剂抑制异动症大鼠纹状体单胺类神经递质的释放

目的观察内生大麻素受体激动剂WIN 55,212-2对帕金森病左旋多巴相关异动症模型大鼠纹状体内单胺类神经递质释放的影响。方法采用脑内微透析和高效液相色谱在线递质测量法观察WIN 55,212-2腹腔内注射对异动症模型大鼠左旋多巴相关异动症状和纹状体内单胺类神经递质释放的影响。结果与溶剂注射相比,WIN 55,212-2注射显著抑制异动症模型大鼠左旋多巴皮下注射后的异动样症状(F1 263=44.071,P<0.001),同时明显减少纹状体内多巴胺的释放(F1 263=5.091,P<0.05)。结论纹状体内生大麻素受体可能通过抑制性的调节单胺类神经递质的释放来影响异动症模型大鼠的异动样症状。

大麻受体激动剂对肺癌A549细胞凋亡和增殖的影响

目的研究大麻受体激动剂(delta9-tetrahydrocannabinol,THC)对肺癌A549细胞凋亡和增殖的影响。方法 MTT法测定THC对A549细胞增殖的影响;苏木精-伊红染色、扫描电镜观察细胞的形态学变化;Western blot法分析大麻受体CB1、CB2的蛋白表达;DNA梯度电泳检测A549细胞凋亡;流式细胞仪分析细胞凋亡率变化。结果 THC预处理后,MTT检测表明THC对A549细胞增殖有明显抑制作用,随着药物浓度增大,抑制作用更加明显;苏木精-伊红染色、扫描电镜观察显示:肺癌A549细胞有典型的细胞凋亡形态;Western blot检测显示:A549细胞大麻受体CB1、CB2水平较正常气道上皮细胞株16HBE升高;DNA梯度电泳法及流式细胞仪检测显示:THC能抑制A549细胞生长,诱导其凋亡,并具有剂量依赖性。结论大麻受体激动剂THC能抑制肺癌细胞的增殖,并诱导肺癌细胞凋亡,此效应可能与大麻受体CB1、CB2作用有关。

非选择性大麻素受体激动剂WIN55，212—2对心肺复苏后大鼠体内炎症因子水平改善及预后的影响

目的明确非选择性大麻素受体激动剂WIN55，212—2对心肺复苏后大鼠体内炎症因子水平及预后的影响，探讨可能的机制。方法30只SD大鼠分别诱导室颤，持续6min后开始机械胸外心脏按压，8min后进行电除颤。成功复苏后30min，动物被随机分为3组：①药物处理＋正常温度组（WIN＋Normo）；②药物处理组（WIN）；③对照组。药物组与对照组分别给予WIN55，212—2和生理盐水，按照1．0mg／（kg·h）速率静脉滴注给药。所有动物的环境温度均保持相同，药物处理＋正常温度组采用一个额外的加热灯泡使得该组和对照组体温维持在（37±0．2）℃。监测复苏后4h各组大鼠白细胞介素-6（IL-6）以及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的水平，并记录复苏后72h各组动物的存活情况。结果药物处理组大鼠IL-6（98．40±8．80）pg／mL以及TNF-α（40．36±9．21）pg／mL的水平较对照组[（120．30±15．20）pg／mL和（68．29±9．58）pg／mL]及药物处理＋正常温度组[（118．50±16．60）pg／mL和（64．33±10．19）pg／mL]明显下降，大鼠神经系统缺陷评分（NDS）及存活率较另外两组明显升高（P〈0．05）。结论在大鼠心肺复苏模型中，静脉注射WIN55，212—2能够降低IL-6与TNF-α的水平，并改善复苏后NDS和72h存活率。但当该药物产生的低温作用消失时，其对于大鼠体内炎症因子及预后的影响也随之明显减弱。故WIN55，212—2所致的心肺复苏后保护作用可能与其产生的降温作用有关。

鞘内注射大麻素受体激动剂与右美托咪定在大鼠骨癌镇痛中的相互作用

目的研究鞘内注射大麻素受体激动剂(WIN 55,212-2)与右美托咪定在大鼠骨癌痛模型中的镇痛作用,并了解其相互作用。方法选取120只6周雌性SD大鼠,在七氟烷麻醉下于胫骨注入大鼠乳腺癌MRMT-1细胞(1×105)建立骨癌痛模型,运用放射线和HE染色法判断骨癌形成。注入MRMT-1后第10天,将大鼠按随机数字表法分为两组:WIN 55,212-2(W组)和右美托咪定组(D组)。W组(n=40)分为对照组和WIN 55,212-2的1μg、3μg、10μg和30μg组。D组(n=32)分为对照组和右美托咪定的3μg、10μg、30μg组。通过von Frey纤维细丝测定大鼠机械缩爪阈值(MWT),观察鞘内注WIN 55,212-2和右美托咪定的镇痛效果。用等辐射分析法(n=32)分析两种药物的相互作用。结果放射线、病理学结果表明注入MRMT-1肿瘤细胞后成功建立骨癌模型,注入肿瘤细胞后大鼠MWT明显减小,产生骨癌疼痛(机械性痛觉超敏)。与对照组相比,WIN 55,212-2和右美托咪定能剂量依赖性的增加MWT(P<0.05),而等辐射分析法显示两种药物是相加作用。结论鞘内注射大麻素受体激动剂与右美托咪定有效抑制大鼠骨癌痛,两种药物的镇痛效果是相加作用。

Ⅱ型大麻受体激动剂JWH133对大鼠局灶性脑缺血—再灌注损伤的神经保护作用

目的探讨Ⅱ型大麻受体(CB2)激动剂JWH133预处理对大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤后作用的机制。方法将健康成年雄性SD大鼠40只随机分为假手术组、脑缺血-再灌注模型组(模型组)、JWH133给药组和溶剂对照组。用改良Zea Longa线栓法建模。Longa评分法评价神经功能,TTC染色法测定缺血侧脑组织及周围血清中白细胞介素(IL)-6和IL-1β水平,TUNEL免疫荧光染色检测大鼠神经元凋亡情况。结果 4组试验大鼠均不同程度出现神经行为功能异常,但JWH133给药组大鼠的神经行为功能恢复明显优于其他3组(P<0.05)。脑切片染色显示,3个手术组大鼠均出现供血区白色梗死灶,但JWH133给药组白色梗死灶较模型组和溶剂对照组缩小(P<0.05)。模型组大鼠脑组织及血清中IL-6、IL-1β水平较假手术组显著升高,JWH133给药组治疗后2种炎性因子水平均有不同程度降低,与溶剂对照组对比均有显著性差异(P<0.05)。TUNEL染色显示,假手术组几乎无凋亡细胞,模型组及溶剂对照组凋亡细胞数量显著增加,JWH133给药组凋亡神经细胞显著减少。结论 JWH133预处理通过抑制脑缺血-再灌注损伤过程发挥神经保护作用,其机制可能与降低IL-6、IL-1β水平及发挥抗凋亡作用有关,尚待进一步探讨。

大麻碱受体激动剂WIN55212-2与依西美坦协同抗肿瘤作用的发现

目的发现与大麻碱受体激动剂甲磺酸西地那非(WIN55212-2)具有协同抗肿瘤活性的药物,为提高肿瘤患者生活质量提供潜在的药物联合策略。方法采用肿瘤细胞增殖和活力检测的高通量测试方法,在3个大麻碱受体1(CB1R)高表达组织的肿瘤细胞系HepG2、DU145和HCT-8,筛查CB1R受体激动剂WIN55212-2分别与25种抗肿瘤药物联合使用时的抗肿瘤活性,对于初步显示有协同的药物联合再通过集落形成实验、3D肿瘤球增殖抑制试验进行确证。在此基础上,采用流式细胞仪检测协同有效的药物联合对细胞凋亡和周期分布的影响。结果发现3种药物在与WIN55212-2组合使用时显示有一定的协同抗肿瘤活性,其中依美西坦(exemestane)与WIN55212-2联合协同效果最佳,并在集落形成和3D肿瘤球增殖抑制试验中表现出浓度依赖性的协同抗肿瘤活性(联合指数CI<1)。与exemestane单用相比,exemestane与WIN55212-2联用显著增加HepG2细胞凋亡率(P<0.01),并引起HepG2细胞发生G2/M期阻滞。结论本研究首次发现将exemestane与WIN55212-2联用在HepG2细胞上具有协同抗肿瘤活性,这可能与其促进细胞凋亡和诱导细胞周期阻滞有关。

大麻素2型受体激动剂JWH133对人永生化角质形成细胞体外增殖以及细胞因子表达影响的研究

目的探讨JWH133对人永生化角质形成细胞CHaCaT细胞)体外增殖以及经肿瘤坏死因子(TNF)-α诱导后细胞因子表达的影响。方法首先用不同浓度JWH133(15、30、60μmol/L)分别作用于HaCaT细胞。采用CCK-8法检测JWH133作用12、24、36 h后对HaCaT细胞体外增殖的影响,流式细胞仪检测JWH133对HaCaT细胞凋亡率的影响。其次采用抗体芯片检测技术分别检测20 ng/ml TNF-α组、20 ng/ml TNF-α.+30μmol/L JWH133组中细胞因子表达的变化,并采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验CELISA)法进行定量分析,以验证抗体芯片检测结果的可靠性。结果15、30、60μmol/L JWH133作用12、24、36 h后对HaCaT细胞体外增殖均有不同程度的抑制作用。随着时间延长和JWH133浓度的增加,JWH133对HaCaT细胞体外增殖的抑制作用均逐渐增强(F=187.1、2678.9,P<0.05)。60μmol/LJWH133作用24h后,凋亡率由(4.34±0.07)%(阴性组〕增加至(21.77±0.40)%(JWH133组)(P<0.05)。20 ng/ml TNF-α能够诱导HaCaT细胞不同程度增加白细胞介素19CIL”19)、IL-22、IL-23等细胞因子的高表达,而30μmol/L JWH133处理后可降低上述细胞因子的表达。结论大麻素2型受体激动剂JWH133可抑制HaCaT细胞体外增殖、促进凋亡,且能够抑制TNF-α诱导的HaCaT细胞中一些重要免疫分子的表达。

大麻素受体2激动剂AM1241抑制大鼠脊髓损伤后纤维瘢痕形成

目的探讨AM1241对大鼠脊髓损伤后纤维瘢痕形成的作用及其机制。方法选取雌性6~8周龄Sprague-Dawley大鼠144只,分为4组:①假手术组(n=24)只移除椎板以暴露硬脊膜,不切开硬脊膜,术后给予生理盐水3 mL/kg;②载体组(n=40)建立大鼠脊髓背侧半切损伤模型,术后给予生理盐水3 mL/kg;③AM1241组(n=40)在载体组基础上给予大麻素受体2(cannabinoid receptor 2,CBR2)激动剂(AM1241,3 mg/kg)治疗;④AM1241+AM630组(n=40)在术后AM1241治疗前30 min给予CBR2拮抗剂(AM630,3 mg/kg)。各组药物均腹腔注射,1次/d,连续14 d。采用免疫荧光染色、Western blot、ELISA等方法评估AM1241对大鼠纤维瘢痕形成的抑制作用,同时采用行为学、电生理检测AM1241对大鼠神经功能的影响。结果与载体组比较,AM1241组大鼠脊髓损伤后,主要纤维瘢痕成分的表达降低,脊髓损伤后,纤维瘢痕面积减少,给予CBR2拮抗剂AM630后逆转了上述现象,差异均有统计学意义(P<0.05)。tubulinβⅢ免疫荧光染色、行为学评估、电生理实验结果显示:AM1241组促进了脊髓神经元细胞的存活,改善了脊髓损伤后的神经功能,包括Basso-Beattie-Bresnahan(BBB)评分[载体组(15.38±0.38)vs AM1241组(18.38±0.50)vs AM1241+AM630组(15.50±0.33),P<0.05]、斜板实验角度[载体组(54.25±1.25)°vs AM1241组(64.25±1.05)°vs AM1241+AM630组(54.75±0.49)°,P<0.05]等;ELISA实验结果显示:AM1241组抑制M1型巨噬细胞标记物iNOS、TNF-α、IL-1β的表达(P<0.05),增强M2型巨噬细胞标记物CD206、Arg-1的表达(P<0.05),降低促纤维化因子TGF-β1的表达(P<0.01);而应用CBR2拮抗剂AM630后逆转了上述作用。结论刺激大鼠CBR2能减少脊髓损伤后纤维瘢痕、改善神经功能,这一作用可能是通过影响巨噬细胞极化来实现的。

基因多态性与胰高血糖素样肽1受体激动剂疗效的相关性研究进展

目的:了解基因多态性与胰高血糖素样肽1(GLP-1)受体激动剂疗效的相关性,为GLP-1受体激动剂疗效相关基因多态性的研究和临床个体化用药提供参考。方法:以"胰高血糖素样肽1受体激动剂""基因多态性""艾塞那肽""利拉鲁肽""液泡蛋白分选受体1""大麻素受体1""GLP-1受体""Glucagon-like peptide-1 receptor agonist""Exenatide""Liraglutide""SORCS1""Cannabinoid type 1 receptor""GLP-1 receptor""Genetic polymorphism""Type 2 diabetes""Insulin resistance"等为中英文关键词,在中国知网、万方、维普、Pub Med、Springer Link等数据库中组合查询1991年1月-2019年3月发表的相关文献,对GLP-1受体激动剂相关的遗传因素和基因多态性的研究进展进行总结。结果与结论:共检索到相关文献307篇,其中有效文献33篇。GLP-1受体激动剂与液泡蛋白分选受体1(SORCS1)基因、GLP-1受体(GLP-1R)基因和大麻素受体1(CNR1)基因相关。目前研究表明,基因多态性与GLP-1受体激动剂改善胰岛功能、改善胰岛素抵抗和控制体质量效果相关。但此类研究多为小样本研究,需要更大的样本来确认SORCS1、GLP-1R、CNR1基因多态性与GLP-1受体激动剂疗效的关系,且其他GLP-1受体激动剂(如利司那肽、阿必鲁泰、度拉鲁肽和索玛鲁肽等)和已发现的基因位点多态性的相关性还未知,而与GLP-1受体激动剂疗效相关的新的基因位点还未发现,这可为今后开展相关研究提供方向。

覆盆子化学成分的分离鉴定及其新型大麻素2型受体激动剂的筛选和抗骨质疏松作用评价

目的 以大麻素2型受体(cannabinoid receptor type 2,CB2R)为靶点,从补肾中药覆盆子中分离、鉴定、筛选得到具有激动CB2R的激动剂,并探讨其抗骨质疏松作用的机制。方法 以激动CB2R活性为导向进行分离并筛选,采用正相硅胶柱色谱、凝胶柱色谱、大孔树脂、重结晶和半制备型高效液相色谱对二氯甲烷层和醋酸乙酯层浸膏进行分离,结合化合物理化性质和核磁共振波谱对分离得到的化合物进行结构鉴定。通过双荧光素酶方法筛选出具有可特异性激动CB2R的化合物,并通过测定转染CB2R的人胚胎肾细胞HEK293-CB2内环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,c AMP)积聚水平和CB2R蛋白表达情况来验证筛选的化合物对CB2R的特异性激动活性,最后评价筛选得到的化合物对破骨细胞骨代谢方面的调节作用。结果 以激动CB2R为活性导向进行分离和筛选,共得到24个化合物,分别鉴定为山柰酚(1)、木犀草苷(2)、银椴苷(3)、金丝桃苷(4)、橙皮素(5)、刺芒柄花素(6)、槲皮素(7)、对羟基苯甲酸(8)、迷迭香酸(9)、对羟基苯甲酸乙酯(10)、水杨酸(11)、没食子酸(12)、咖啡酸(13)、原儿茶酸(14)、鞣花酸(15)、香草酸(16)、loliolide(17)、对羟基苯甲酸甲酯(18)、ethyl dioxindole-3-acetate(19)、苦莓苷F1(20)、科罗索酸(21)、委陵菜酸(22)、山楂酸(23)、野鸦椿酸(24)。双荧光素酶筛选体系从24个化合物中筛选得到2个新的CB2R激动剂(化合物5和8)。c AMP和蛋白免疫印迹表明筛选得到化合物5和8对CB2R具有特异性激动活性和较好的亲和力,可显著抑制破骨细胞的活性并影响其骨吸收功能。结论 化合物2、5、6、9、13、14、17、19为首次从中药覆盆子中分离得到。2个新的CB2R激动剂(化合物5和8)能特异性地激动CB2R并增加CB2R蛋白的表达,抑制给药刺激后HEK293-CB2细胞内c AMP的积累;以CB2R依赖性对破骨细胞功能的正常发挥产生影响。

四氢大麻酚THC抑制肝癌细胞Bel-7402增殖和诱导其凋亡的研究

目的探讨激活大麻受体对肝癌细胞增殖凋亡的作用,并对其机制进行初步研究。方法将细胞分成对照组,不同剂量大麻受体激动剂delta-tetrahydrocannabinol(THC)处理组。MTT法测定THC对Bel-7402细胞增殖的影响;DNA梯度电泳法和流式细胞技术检测分析各组细胞凋亡情况;Western blot法检测大麻受体CB1、CB2、Caspase-3和c-myc的表达水平,分光光度法检测细胞的活性。结果 Bel-7402细胞中大麻受体CB1、CB2较L02正常肝细胞明显增强。THC能抑制Bel-7402细胞增殖,诱导Bel-7402细胞凋亡,上述效应具有浓度依赖性。THC能抑制Bel-7402细胞中c-myc的表达,诱导Bel-7402细胞中的Caspase蛋白表达和活性。结论大麻受体激动剂THC能抑制肝癌细胞增殖,诱导肝癌细胞凋亡,并与caspase和c-myc蛋白表达相关。

大麻素受体1对肥胖大鼠胰岛素抵抗的影响

目的:探讨大麻素受体1(CB1受体)对肥胖大鼠胰岛素抵抗的影响。方法:32只雄性SD大鼠给予高脂鼠饲料喂养8周,制作肥胖大鼠模型。以给予普通鼠饲料喂养的6只大鼠作为正常组。将肥胖大鼠随机分为4组,S(模型组)、AW、W、A组,每组大鼠8只。正常组、模型组腹腔内注射等量生理盐水,W、A、AW组分别腹腔内注射CB1受体激动剂WIN55212-2、CB1受体抑制剂AM251、AM251+WIN55212-2;1次/d。2周后,测定大鼠血胰岛素、胰岛素原、C-肽水平,计算胰岛素原/C-肽、胰岛素原/胰岛素;进行高葡萄糖钳夹实验,计算相关参数,包括第1、2时相胰岛素分泌量(1PH和2PH)、胰岛素最大分泌量(MIS)及稳态葡萄糖输注率(GIR60-90)。结果:注药2周后,与正常组比较,模型组血胰岛素、胰岛素原、C-肽、胰岛素原/C-肽、胰岛素原/胰岛素及2PH、MIS水平升高,1PH及GIR60-90水平下降(P<0.05)。W组上述指标变化方向与模型组相同,但变化幅度大于模型组(P<0.05);A组上述指标变化方向与模型组相反,各指标水平与正常组比较,差异无统计学意义(P>0.05);AW组上述指标水平与模型组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:CB1受体激动可加重肥胖大鼠胰岛素抵抗,抑制CB1受体可逆转此效应。

大麻素受体及其配体对骨量和骨改建的调节作用

内源性大麻素(CB)系统至少有2种受体,在体内均存在相应的配体和特定的合成及代谢通路,均属G蛋白偶联超家族成员。CB1受体主要分布在中枢神经系统,CB2受体主要分布于外周免疫细胞表面,两者受激动均可产生特定的生理反应。研究表明一些CB类物质可在体内抑制类风湿性关节炎的炎症病变。近来对CB受体基因敲除的小鼠研究显示,CB1受体、CB2受体及其配体,其激动剂可在体内外调节破骨细胞及成骨细胞的功能,从而对骨量和骨改建起调节作用。进一步研究其时骨细胞的作用机制,可为临床应用该类药物提供理论依据。

激活CB_(2)受体对MPP+诱导BV2小胶质细胞iNOS和Arg-1表达的影响

目的探讨激活大麻素Ⅱ型受体(CB_(2)受体)对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)处理的BV2小胶质细胞M1/M2表型转化的影响。方法培养BV2小胶质细胞,将其分为对照组、MPP+组、JWH133(CB_(2)受体激动剂)+MPP+组、AM630(CB_(2)受体抑制剂)+MPP+组、JWH133+AM630+MPP+组。应用免疫印迹法检测各组诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和精氨酸酶-1(Arg-1)蛋白的表达。结果与对照组相比,MPP+组BV2小胶质细胞iNOS蛋白表达明显上升(F=9.825,q=6.346,P<0.01);JWH133预处理抑制MPP+诱导的iNOS蛋白的上调(q=5.714,P<0.01),此抑制作用可被AM630逆转(q=4.154,P<0.05)。与MPP+组相比,JWH133预处理显著上调Arg-1蛋白表达水平(F=5.800,q=5.520,P<0.01),此作用可被AM630所阻断(q=4.155,P<0.05)。结论激活CB 2受体可抑制MPP+处理的BV2小胶质细胞M1极化,并且促进BV2小胶质细胞从M1型转化为M2型。

CB2选择性激动剂作为器官移植免疫抑制剂的前景

目前大麻素以其自身的抗炎效应,被应用于一些自身免疫性疾病。研究表明这种抗炎性质主要源于大麻素对免疫细胞的抗增生、抗分化和促凋亡作用。从理论上讲,这种作用将缓解器官移植后产生的排斥反应,可被当作免疫抑制剂。同时大麻素具有抗肿瘤作用,可降低由于长期使用免疫抑制剂而带来的肿瘤发生率。但由于大麻素的精神效应致使其无法长期应用于临床。那么无精神效应的大麻素——Ⅱ型大麻素受体选择性激动剂(后文简称CB2SA),将可能作为一种新型的免疫抑制剂应用于器官移植。

THC受体基因的克隆为开发新型神经药物打开方便之门

自从25年前弄清△~9-四氢大麻酚(△~9-THC)的结构以来,药物公司花了不少精力来研究其在人体中的作用方式.这方面的努力将达到兴盛期,因为目前已发现并克隆到编码△~9-THC受体的基因.这一发现为中枢神经的研究以及调节人体疼痛、胃口、睡眠、学习、情绪以及心智缺陷(如幻觉、记忆丧失及时空错念等)

建立大麻素1型受体激动剂的细胞筛选模型

大麻素受体是中枢神经系统表达丰富的G蛋白偶联受体,也是治疗炎症、疼痛及药物滥用潜在的药物靶点。大麻素受体主要包括大麻素1型受体(cannabinoid type 1 receptor, CB1R)、大麻素2型受体(cannabinoid type 2receptor, CB2R)及其他受体。CB1R在调节中枢记忆、认知和运动等方面发挥关键作用,因此筛选具有激动CB1R活性的化合物具有治疗神经系统疾病的潜在价值。本研究使用的载体质粒将CB1R胞内第三环(intracellular loop3, ICL3)基因序列置换为环状绿色荧光蛋白(circular-permutated enhanced green fluorescent protein, cpEGFP)。慢病毒包装后感染HEK 293T细胞,经嘌呤霉素筛选获得高表达CB1R-cpEGFP的稳定细胞株。当激动剂与CB1R结合后,膜受体构象发生改变,膜受体内cpEGFP的发色团去质子化产生绿色荧光,通过检测荧光强度评价激动CB1R的活性物质。本研究利用CB1R激动剂花生四烯酸-2′-氯乙酰胺(arachidonyl-2′-chloroethylamide, ACEA)作为阳性对照评价模型的可靠性。研究发现, ACEA可激活细胞模型受体,表现为荧光强度增加,这种效应能够被CB1R特异性拮抗剂利莫那班(rimonabant)阻断,导致荧光消失。本研究利用荧光探针成功构建CB1R激动剂细胞筛选模型。

大麻素受体激动剂预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨大麻素（CB）受体激动剂WIN55，212-2预处理对大鼠局灶性脑缺血的保护作用。方法采用大鼠大脑中动脉栓塞（MCAO）致局灶性脑缺血模型，将50只雄性SD大鼠随机分为5组：对照组（Con组），行线栓法致大脑中动脉栓塞（MCAO）前24h腹腔注射生理盐水（NS）0．3ml；WIN55，212-2预处理组（WIN1～3），分别于MCAO前24h腹腔注射WIN55，212-20．3，1和3mg／kg；DMSO组，于MCAO前24h腹腔注射二甲基亚砜（DMSO，WIN55，212．2的溶剂）0．3ml。观察MCA0120min再灌注24，48和72h后神经功能评分（NFS）和再灌注72h脑梗死容积百分比。结果WIN55，212-2预处理组大鼠NFS明显高于DMSO组和Con组（P〈0．05），脑梗死容积百分比明显小于DMSO组和Con组（P〈0．05）。WIN2组和WIN3组的脑梗死容积百分比明显小于WIN1组，NFS明显高于WIN1组（P〈0．05），WIN2组和WIN3组的NFS和脑梗死容积百分比差异无统计学意义（P=0．928），但3mg／kgWIN55，212-2可引起大鼠明显嗜睡和倦怠。结论CB受体激动剂WIN55，212—2预处理能诱导脑缺血耐受，对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤具有保护作用，并具有一定的剂量相关性。