大麻素Ⅰ型受体拮抗剂的结构特征

以92个具有大麻素受体Ⅰ(CB1)拮抗活性的化合物为训练集,39个化合物为测试集,采用DiscoveryStudio V2.5(DS)软件中的3D构效关系药效团产生(QSAR Pharmacophore Generation)模块建立药效团模型.获得的最佳药效团模型的构成为一个氢键受体(HBA)、一个疏水基团(HY)和二个芳环中心(RA),采用费用函数(Cost function)评价药效团模型,该模型的Δcost为119.32,相关性为0.921,均方根偏差为0.730,Configuration cost为16.1229,表明模型能较好地预测化合物的活性.同时针对目前已知的近450个化合物的12种结构类型进行了探讨,所得结果为进一步设计CB1拮抗剂提供了理论依据.

海马体神经元内源性大麻素Ⅰ型受体与小清蛋白共表达的研究

内源性大麻素系统广泛分布于哺乳动物的中枢神经系统中,参与调节多种生理过程和行为反应。其中,大麻素Ⅰ型受体(Cannabinoid Receptor 1,CB1R)大量分布在表达生长激素抑制素、胆囊收缩素、多巴胺、5-羟色胺等神经递质受体的神经元末梢上。CB1R激活可抑制突触前膜神经递质的释放,逆行调控神经元的兴奋性。然而,对于中枢神经系统中另一类具有重要抑制性作用的小清蛋白(Parvalbumin,PV)阳性的γ-氨基丁酸能中间神经元是否表达CB1R,却鲜有报道。该文利用免疫荧光染色和激光共聚焦成像技术发现,小鼠海马体少量神经元存在PV与CB1R共表达,且PV/CB1R阳性神经元在海马体中的分布无雌雄差异。该结果能为进一步阐明PV与CB1R在功能上的相互作用提供一定参考价值,也将有助于更全面地了解内源性大麻素系统的调控作用。

王枫团队揭示雌雄小鼠脑内大麻素Ⅰ型受体mRNA的差异分布

中国科学院深圳先进技术研究院脑功能图谱与行为研究中心王枫研究团队在成年雌雄小鼠脑内大麻素Ⅰ型受体mRNA的差异分布研究取得进展。相应成果为"Liu X, Li X, Zhao G,et al.Sexual dimorphic distribution of cannabinoid 1 receptor mRNA in adult C57BL/6J mice[J].Journal of Comparative Neurology, 2020:1-14(成年C57BL/6J小鼠脑内大麻素Ⅰ型受体mRNA分布的雌雄二态性)"。

人源大麻素Ⅰ型受体基因真核表达质粒的构建及表达

目的构建人源大麻素Ⅰ型受体(human cannabinoid receptor 1,hCBⅠ)基因GV230真核表达质粒,并于HEK-293细胞中进行表达。方法以人脑皮质细胞的总RNA为模板,扩增获得hCBⅠ基因,克隆至真核表达载体GV230,构建重组表达质粒GV230-hCBⅠ,筛选阳性克隆,脂质体瞬时转染HEK293细胞。置倒置荧光显微镜下观察,并采用激光共聚焦显微镜(confocal laser scanning microscope,CLSM)和Western blot法检测hCBⅠ基因在HEK293细胞中的表达。结果重组表达质粒GV230-hCBⅠ经双酶切及测序鉴定,构建正确。转染48 h后,转染率约40%,CBⅠ蛋白主要于细胞膜分布及表达,且于相对分子质量约50 000处可见特异性条带。结论成功构建了重组真核表达质粒GV230-hCBⅠ,并于HEK293细胞中表达,为进一步研究CBⅠ的生物学功能奠定了基础。

大麻素Ⅰ型受体生理调节作用研究进展

大麻素Ⅰ型受体（cannabinoid type 1 receptor,CB1）是大麻素受体的一种,随着它的发现与克隆,越来越多证据表明CB1在内源性大麻素系统各种生理作用中起到重要作用。本文就CB1在生理调节方面作用以及与人类健康之间的关系进行综述,为今后CB1受体研究提供参考资料。

MJ15对大麻素Ⅰ型受体的阻滞及反相激动作用的研究

目的:观察MJ15对大麻素Ⅰ型(cannabinoid receptorsⅠ,CB1)受体的阻滞及反相激动作用。方法:制备小鼠输精管和豚鼠回肠平滑肌的离体标本,观察CB1受体激动剂WIN55212-2以及阻滞剂利莫那班(SR141716A)和MJ15对其收缩特性的影响。结果:CB1受体激动剂WIN55212-2(10-10～10-6 mol.L-1)可抑制电刺激所引起小鼠输精管的收缩作用,呈现明显的剂量依赖性,而SR141716A和MJ15(10-7 mol.L-1)能阻滞WIN55212-2的抑制作用;CB1受体激动剂WIN55212-2可抑制豚鼠回肠和小鼠输精管平滑肌的收缩,而SR141716A和MJ15能促进豚鼠回肠和小鼠输精管平滑肌的收缩。结论:MJ15是CB1受体的阻滞剂,同时具有反相激动作用。

rno-miR-129-5p对大鼠大麻素Ⅰ型受体基因3′-非编码区双荧光素酶活性的影响

[目的]探究rno-miR-129-5p对含有大鼠大麻素Ⅰ型受体(CB1R)基因3′-非编码区(UTR)双荧光素酶报告载体的调控作用。[方法]以大鼠前额叶皮层脑区和海马脑区cDNA为模板,利用聚合酶链式反应(PCR)扩增出含有rno-miR-129-5p与CB1R基因3′-UTR结合位点的目的片段。利用重叠延伸的方法将两个靶序列CAAAAA分别突变为CAGGCC,并将CB1R 3′-UTR和CB1R-mut 3′-UTR插入到pmiR-RB-Report^(TM) vector载体中。将rno-miR-129-5p mimic或其Negative control(NC)与野生型和突变型双荧光素酶报告载体共转染至PC12细胞后,检测其荧光素酶活性。[结果]成功构建了包含CB1R基因3′-UTR野生型双荧光素酶报告载体pmiR-CB1R 3′-UTR和突变型双荧光素酶报告载体pmiR-CB1R-mut 3′-UTR。荧光素酶活性检测发现rno-miR-129-5p mimic可以下调野生型报告载体的活性(P<0.05),而对突变型没有影响。[结论]初步证明CB1R基因3′-UTR是rno-miR-129-5p的作用靶点。

缺氧对大鼠下丘脑Ⅰ型大麻素受体表达和摄食量的影响

目的研究缺氧大鼠下丘脑Ⅰ型大麻素受体（cannabinoid receptor typeⅠ,CB1）的表达变化及其与摄食量的关系。方法 54只雄性SD大鼠按随机数字表法分为3组（每组18只）：平原对照组、缺氧1 d组和缺氧7 d组。缺氧组大鼠置模拟海拔5 000 m低压舱中,平原对照组大鼠置平原饲养。记录各组大鼠摄食量,蛋白免疫印迹法和免疫组化法观察各组大鼠下丘脑CB1受体和c-Fos蛋白表达变化。结果与平原对照组[（15.5±2.7）g]大鼠相比,缺氧1 d组大鼠摄食量[（4.9±0.7）g]显著减少（P〈0.05）,同时大鼠下丘脑CB1和c-Fos阳性细胞数量和蛋白表达量显著减少;缺氧1 d组大鼠弓状核（arcuate nucleus,ARC）、下丘脑腹外侧区（later hypothalamic area,LH）和下丘脑腹内侧核（ventromedial hypothalamic nucleus,VMH）CB1受体、c-Fos表达较平原对照组显著降低;随着缺氧时间的延长,动物摄食量逐日增加,缺氧3~7 d时的摄食量与平原对照组大鼠相当;缺氧7 d组大鼠下丘脑CB1受体和c-Fos阳性细胞数量和蛋白表达量与平原对照组大鼠比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论急性缺氧大鼠摄食减少可能与弓状核、下丘脑腹外侧区和下丘脑腹内侧核CB1受体和c-Fos表达减少相关。

外周型Ⅰ型大麻素受体选择性拮抗剂的研究进展

Ⅰ型大麻素受体(cannabinoid 1 receptor,CB1R)是肥胖症治疗药物研发的最重要靶标之一,然而以利莫那班为代表的CB1R拮抗剂因中枢作用产生的副作用限制了其临床应用。不透过血脑屏障的外周型CB1R选择性拮抗剂在保留第1代CB1R拮抗剂减肥效应的同时,避免了其中枢相关的副作用,成为当前CB1R拮抗剂类新型减肥药物研发的方向。本文综述了外周型CB1R选择性拮抗剂的研究进展。

Ⅰ型大麻素受体对脊髓损伤小鼠和小胶质细胞活化的影响

目的:探讨Ⅰ型大麻素受体(CB1R)对脊髓损伤小鼠和小胶质细胞活化的影响。方法:36只SPF级C57BL/6雌性小鼠,随机分为对照组、模型组和药物组,通过改良Allen's法,构建小鼠脊髓损伤模型。分别于术后第1天、第7天和第14天,进行行为学评价。术后第14天处死小鼠,Western blotting法检测脊髓组织髓鞘碱性蛋白(MBP)、脑源性神经营养因子(BDNF)和神经生长因子(NGF)蛋白表达。酶联免疫吸附法测定小鼠血清IL-6、IL-17和TNF-α含量。免疫荧光双染检测脊髓组织钙离子结合调节因子(IBA)-1和ED-1阳性细胞表达。结果:与对照组比较,模型组小鼠术后BMS评分和斜板倾斜度明显降低,血清IL-6、IL-17和TNF-α含量、脊髓组织MBP、BNDF和NGF蛋白含量及IBA1/ED1双阳性细胞均明显升高(P<0.05);与模型组比较,药物组小鼠术后BMS评分、斜板倾斜度、脊髓组织MBP、BNDF和NGF蛋白含量均明显升高,血清IL-6、IL-17和TNF-α含量以及脊髓组织IBA1/ED1双阳性细胞均明显降低(P<0.05)。结论:CB1R通过抑制小胶质细胞活化和炎症反应,降低脊髓损伤。

大麻素受体激动剂WIN55,212-2抑制脑缺血再灌后胶质瘢痕的形成

脑缺血再灌注后出现的胶质瘢痕,主要是由增殖的激活星形胶质细胞构成。研究证实胶质瘢痕不利于神经再生,由其构成的物理化学性屏障一方面会阻碍轴突再生,另一方面由激活星形胶质细胞产生的神经发育抑制因子也会阻碍中枢神经系统功能的恢复。研究表明内源性大麻素对星形胶质细胞增殖具有调控作用。为研究脑缺血再灌注损伤后外源性大麻素受体激动剂WIN55,212-2对胶质瘢痕的影响,本文使用大鼠中动脉闭塞模型,通过免疫组织化学法对样本中的激活星形胶质细胞标记物Vimentin、星形胶质细胞标记物GFAP、硫酸软骨素蛋白聚糖标记物Neurocan、以及Notch-1信号通路配体Jagged-1分子的表达进行检测。为研究药物的作用靶点,本文联合使用了大麻素Ⅰ型受体拮抗剂rimonabant。结果表明:WIN55,212-2在大麻素Ⅰ型受体的介导下,通过减少星形胶质细胞的增殖,显著降低激活星形胶质细胞上Jagged-1的表达水平,抑制了胶质瘢痕的形成。

高脂喂养SD大鼠体内花生四烯酸乙醇胺水平及Ⅰ型大麻素受体表达的变化

目的探讨高脂饮食诱导肥胖SD大鼠脂肪代谢紊乱对内源性大麻素系统(endocannabinoid system,ECS)的影响及其机制。方法建立高脂饮食诱导肥胖SD大鼠模型,每周称量大鼠体重;采用酶比色法测定大鼠血清中总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)和低密度脂蛋白(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)水平;高效液相色谱法检测大鼠血浆中大麻内源性配体花生四烯酸乙醇胺(anandamide,AEA)的含量;Western blot法检测大鼠附睾脂肪组织中Ⅰ型大麻素受体(cannabinoid receptorⅠ,CB1)的表达。结果大鼠经高脂饮食持续喂养8周,体重均不同程度增加;血清中TC、TG、LDL-C和血浆中AEA水平均显著升高(P<0.05);附睾脂肪组织中CB1的表达量也显著增加(P<0.05)。结论通过高脂饲料成功诱导SD大鼠的TC、TG和LDL-C升高,使大鼠产生高脂血症;大鼠血清AEA水平和血浆中CB1表达的显著变化表明肥胖大鼠体内ECS在肥胖过程中发生了显著改变,本研究在一定程度上建立了ECS与肥胖之间的联系。

大鼠癫痫持续状态后海马CA1区锥体细胞层神经元突触CB1R超微结构变化

目的探讨大鼠癫痫持续状态(SE)后海马CA1区大麻素Ⅰ型受体(CB1R)在突触的表达变化。方法取3月龄大鼠分为实验组和对照组,每组6只,建立氯化锂-匹罗卡品大鼠癫痫模型。SE后4周,每组3只大鼠灌注固定,取海马切片,行CB1R免疫组化检测,在显微镜下观察海马CA1区CB1R表达特征;每组剩余3只灌注固定,取海马行CB1R免疫电镜检测。结果CB1R免疫组化DAB显色显示,对照组大鼠海马CA1区CB1R呈点状分布,主要分布在锥体细胞层,SE后4周,实验组大鼠海马CA1区的点、线状分布,较对照明显增加;免疫电镜染色结果显示,对照组大鼠海马CA1区CB1R主要分布在抑制性突触前膜,而在兴奋性突触呈现少量分布。SE后4周,抑制性突触前膜CB1R较对照组明显在增加,而兴奋性突触前膜CB1R表达较对照组无明显变化。结论SE后4周,大鼠海马CA1区CB1R表达增加,并且这种增加主要发生在锥体细胞层抑制性突触前膜。

P0和3个月龄大鼠海马CB1R的差异性表达

目的探讨P0大鼠和成年大鼠海马大麻素Ⅰ型受体(cannabinoid type 1 receptor,CB1R)表达特点。方法取P0和3个月龄大鼠各3只,灌注固定,取海马切片,行CB1R免疫组化检测,在显微镜下观察海马CB1R表达特征,行CB1R和胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)免疫双标荧光检测,在激光共聚焦显微镜下观察,明确CB1R表达细胞种类。结果CB1R免疫组化DAB显色,在P0期大鼠海马,CB1R呈片状分布,主要分布在锥体细胞层神经元胞体,而在3个月龄大鼠海马,CB1R呈点状分布,主要分布在锥体细胞层;CB1R和GFAP免疫双标显示,在P0期大鼠海马,CB1R主要分布在锥体细胞层神经元胞体,在CA1区各层呈现点状分布,星形胶质细胞无CB1R表达,在3个月龄大鼠海马,CB1R呈点状主要分布在锥体细胞层,星形胶质细胞无CB1R表达。结论刚出生SD大鼠和成年SD大鼠海马CB1R表达存在差异,从出生至成年,大鼠海马CB1R可能存在从神经元胞体向神经突触的迁移。

大鼠癫痫持续状态后海马神经传递环路CB1R表达特征

目的探讨癫痫持续状态后不同时间点,大鼠海马各区CB1R表达变化。方法使用氯化锂-匹罗卡品诱导大鼠癫痫持续状态(SE),分别于SE后1 w、2 w、3 w、4 w,取大鼠海马切片,行大麻素1型受体(CB1R)免疫组化染色,测量CA1区放射层、CA3区透明层,以及分子层CB1R平均光密度值(MIOD),所有数值进行统计学分析。同时取SE后4 w海马切片,行NeuN和GFAP染色,观察SE后4 w,海马神经元和星形胶质细胞变化。结果在CA1区放射层,SE后各时间点CB1R表达均高于对照(P<0.05),CB1R表达在SE后4 w,高于SE后1 w、2 w、3 w(P<0.05);在CA3区透明层,SE后各时间点CB1R表达均高于对照(P<0.05),CB1R表达在SE后4 w,高于SE后1 w(P<0.05);在海马分子层,SE后各时间点CB1R表达均高于对照(P<0.05),但是CB1R表达在SE后1 w、2 w、3 w、4 w之间无统计学差异(P>0.05)。SE后4 w,CA1区锥体细胞层神经元明显丢失,并且星形胶质细胞增生肥大。结论大鼠SE后4W具有硬化海马特征。SE后大鼠CA1区放射层、CA3区透明层,以及分子层CB1R表达增加,CA1区放射层和CA3区透明层CB1R在SE后4 w增加最明显,分子层CB1R在SE后1 w增加且趋于稳定。

大鼠星形胶质细胞CB1R体内外差异表达

目的:探讨大鼠脑在体和培养中星形胶质细胞大麻素Ⅰ型受体(cannabinoid type 1 receptor,CB1R)表达特点。方法:取3月龄大鼠脑海马切片,进行胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和CB1R荧光免疫荧光双标染色;同时取刚出生大鼠鼠脑进行原代、传代培养,获取高纯度星形胶质细胞,行GFAP和CB1R免疫荧光双标染色。所有标本在激光共聚焦显微镜下,观察星形胶质细胞CB1R表达状况。结果:大鼠在体海马切片染色显示,CB1R呈点状分布于海马CA1区,尤其以锥体细胞层明显,GFAP标记的星形胶质细胞CB1R呈阴性表达;而培养中的GFAP标记阳性的星形胶质细胞,CB1R呈阳性表达,且主要集中在细胞核周围分布。结论:在体海马和细胞培养中的星形胶质细胞CB1R表达不同,与生理状态比较,细胞培养状态下星形胶质细胞CB1R表达存在明显改变。

下丘脑室旁核CB1R介导急性内脏痛的机制研究

目的探讨下丘脑室旁核(paraventricular nucleus,PVN)大麻素Ⅰ型受体(cannabinoid receptor 1,CB1R)在急性乙酸内脏痛模型中发挥的作用及意义,为临床合理用药提供理论依据。方法选用40只雄性C57小鼠,随机分成5组(n=8),预先通过PVN微量注射给药,建立小鼠急性乙酸内脏痛模型,观察乙酸致小鼠扭体反应次数变化,扭体反应峰值期,采用免疫荧光染色,检测各组小鼠PVN内c-Fos表达水平。结果①乙酸模型组小鼠60 min内的扭体反应次数明显多于正常对照组,说明急性乙酸内脏痛模型建立成功。②与PVN微量注射生理盐水和CB1R拮抗剂AM-251相比,PVN微量注射CB1R激动剂WIN55212-2后,乙酸模型组小鼠在60 min内的扭体反应次数明显减少,并在15~30 min扭体反应达到峰值,小鼠PVN内c-Fos表达明显减少。③与PVN微量注射生理盐水相比,PVN内微量注射CB1R拮抗剂AM-251后,乙酸模型组小鼠在60 min内的扭体反应次数和PVN内c-Fos表达无明显差异,但在15 min内扭体反应达到峰值。结论PVN内预先微量注射CB1R激动剂WIN55212-2可通过抑制PVN内神经元活性减轻小鼠急性乙酸内脏痛。