大黄游离蒽醌对脂肪干细胞移植治疗大鼠急性胰腺炎的影响

背景:研究表明大黄游离蒽醌能够保护肠黏膜细胞结构和功能的稳定,但尚未有将其与脂肪干细胞联合治疗大鼠急性胰腺炎的报道。目的:观察并探讨大黄游离蒽对脂肪干细胞移植治疗大鼠急性胰腺炎的影响及其机制。方法:体外快速复苏并培养购自中国医学科学院的冻存鼠脂肪干细胞,随后采用MTT比色法测定脂肪干细胞的细胞存活率并行PKH-26标记。将北京维通利华动物实验技术有限公司提供的SD大鼠随机平均分为4组,病理模型组大鼠采用肠壁穿刺逆行胰胆管注射体积分数5%牛黄胆酸钠建立急性胰腺炎病理模型,然后尾静脉注射0.5 mL的L-DMEM完全培养液;大黄游离蒽组建模后给予大黄游离蒽醌200 mg/kg灌胃;脂肪干细胞组建模后尾静脉注射0.5 mL细胞浓度1×10~7 L^(-1)脂肪干细胞;联合治疗组建模后同时给予以上2种干预。各个实验组中所有干预治疗措施每日进行1次且连续治疗3 d。结果与结论:(1)与理模型组的大鼠相比,大黄游离蒽醌组和脂肪干细胞组大鼠血清淀粉酶活性以及白细胞介素6水平显著降低(P <0.05),胰蛋白酶原激活肽水平显著升高(P <0.05);经过脂肪干细胞移植和大黄游离蒽醌灌胃处理联合治疗,上述3指标水平较大黄游离蒽醌组和脂肪干细胞组进一步降低(P<0.05);(2)苏木精-伊红染色结果显示,此2个单独治疗组大鼠胰腺组织中脂肪变性、出血、细胞坏死及炎症细胞浸润等病理变化程度均有明显减轻,联合治疗组中大鼠的病理变化的缓解程度则更为明显;(3)荧光显微镜下观察可见,PKH-26标记的阳性细胞数联合治疗组最多,脂肪干细胞组次之,而在大黄游离蒽组及病理模型组则未见(P <0.05);(4)TUNEL法检测可见,与病理模型组比较,2个单独治疗组中胰腺组织中的细胞凋亡数明显降低,联合治疗组进一步降低(P <0.01);(5)RT-PCR和Western blot法检测显示,病理模型组大鼠胰腺组织转化生长因子β1及Smad2/3基因和蛋白表达最高,联合治疗组最低(P <0.01),而2个单独干预组均较病理模型组显著较低(P <0.05);(6)结果证实,大黄游离蒽干预联合脂肪干细胞移植治疗大鼠急性胰腺炎可以有效改善模型大鼠急性胰腺炎的血液生化指标水平;并可明显地缓解急性胰腺炎模型大鼠炎症反应程度和胰腺组织形态学病变以及胰腺细胞的凋亡,这可能与降低转化生长因子β/Smad信号通路有关。

大黄游离蒽醌致泻作用机制研究

目的:评价两种一氧化氮合酶抑制剂对大黄游离蒽醌致大鼠腹泻作用的影响,以探讨大黄泻下作用相关机制。方法:应用实验大鼠在体肠道单向灌流模型,分别考察正常对照组、大黄游离蒽醌低剂量组、大黄游离蒽醌高剂量组、大黄游离蒽醌高剂量联用L-NAME组及大黄游离蒽醌高剂量联用地塞米松组的致泻作用。通过记录灌入量和流出量,测量灌流肠段的表面积,检测流出液的总蛋白、葡萄糖以及Na+、K+及Cl-含量进行评估。结果:大黄游离蒽醌10μg/ml在体灌流能显著提高大鼠肠道流出液的蛋白质浓度、钠以及氯离子浓度;L-NAME10μg/ml和地塞米松5μg/ml均可显着对抗这种作用,与大黄游离蒽醌10μg/ml有统计学差异。在体灌流大黄游离蒽醌2μg/ml和大黄游离蒽醌10μg/ml均有增加流出液的量以及减少葡萄糖吸收的趋势,但与正常对照组比较没有显着差异。结论:大黄游离蒽醌致腹泻作用与其抑制一氧化氮合酶特别是诱导型一氧化氮合酶的活性有关,其详细作用机制有待进一步深入研究。

大黄游离蒽醌对重症急性胰腺炎大鼠肾损伤的影响

目的:探讨重症急性胰腺炎对肾脏的影响,并观察大黄游离蒽醌对肾脏的保护作用。方法:雄性大鼠72只,随机分为假手术对照组、重症急性胰腺炎模型组、生大黄水煎液干预组和大黄游离蒽醌干预组4个组,生大黄组和大黄游离蒽醌组在胰腺炎建模前12h和建模后2h分别给予生大黄水煎液和大黄游离蒽醌灌胃。各组分别于术后6h、12h和24h后三个时间点处死大鼠取肾脏组织,HE染色法观察肾脏组织的病理组织学改变,酶联免疫吸附法测定肾脏组织匀浆中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1(IL-1)水平,髓过氧化物酶法检测肾脏组织匀浆髓过氧化物酶(MPO)活性。结果:胰腺炎模型组与假手术组相比三个时间点TNF-α(0.358±0.016 vs 0.190±0.005 P<0.05;0.390±0.010 vs 0.204±0.005 P<0.05;0.396±0.005 vs 0.198±0.003 P<0.05)和IL-1(0.334±0.004 vs 0.179±0.004 P<0.05;0.342±0.005 vs 0.176±0.003P<0.05;0.365±0.005 vs 0.174±0.004P<0.05)水平,以及肾组织MPO酶活性(0.860±0.014 vs 0.539±0.009 P<0.05;0.867±0.010 vs 0.610±0.005 P<0.05;0.870±0.013 vs 0.545±0.009 P<0.05)均明显升高,差异有显著性。生大黄组和大黄游离蒽醌组与胰腺炎组相比较均显著抑制12h和24h肾组织TNF-α(0.286±0.008 vs 0.390±0.010 P<0.05;0.295±0.008 vs 0.396±0.005 P<0.05)和IL-1(0.254±0.005 vs 0.342±0.005 P<0.05;0.267±0.004 vs 0.365±0.005 P<0.05)水平,显著抑制6h和12h肾组织MPO酶活性(0.730±0.008 vs 0.860±0.014 P<0.05;0.730±0.010 vs 0.867±0.010 P<0.05);生大黄组和大黄游离蒽醌组之间的差异无显著性。结论:大黄水煎液和大黄游离蒽醌均能抑制胰腺炎时机体的炎症反应从而减轻对肾脏的损伤作用,大黄游离蒽醌与大黄水煎液的疗效相当。