大黄游离蒽醌对糖尿病大鼠心肌纤维化的作用

目的探讨大黄游离蒽醌(free anthraquinone from rhubarb,FAR)对糖尿病大鼠心肌CTGF和collagen表达及间质纤维化的影响。方法健康♂SD大鼠一次性腹腔注射STZ制备糖尿病大鼠模型,2周后随机分为模型对照组(DCM组)和大黄游离蒽醌干预组(FAR组),同时设立正常对照组(CON组);干预8周后检测大鼠空腹血糖;心脏质量指数;Masson染色观察心肌纤维化程度;RT-PCR法检测CTGF、procollagenⅠ和collagenⅢmRNA表达;免疫组化法检测CTGF蛋白含量;ELISA法检测collagenⅠ和collagenⅢ胶原含量。结果与CON组相比,DCM组大鼠空腹血糖、心脏质量指数、心肌纤维化程度以及CTGF、collagen I和collagenⅢ表达均明显升高;与DCM相比,FAR组心脏质量指数、心肌纤维化程度以及CTGF、collagenⅠ和collagenⅢ表达均明显下降。结论大黄游离蒽醌可通过调低糖尿病大鼠心肌组织CTGF的表达,减少心肌间质中collagen I和Ⅲ合成及沉积。

大黄游离蒽醌的制备与纯化

从中药大黄中提取总蒽醌 (结合和游离 2类 ) ,经水解后用化学试剂或大孔树脂制备总游离蒽醌 (含大黄素、大黄酸、芦荟大黄素、大黄酚和大黄素甲醚 ) ,进一步纯化得大黄酸和大黄素。

大黄游离蒽醌在正常和重症急性胰腺炎犬体内吸收动力学比较研究

目的研究重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)对大黄游离蒽醌吸收动力学参数的影响。方法选取11只健康Beagle犬随机分为正常组(6只)及SAP组(5只)。制备SAP动物模型,两组经手术建立门静脉取血通道,给予大黄游离蒽醌(20mg/kg)灌胃,采用高效液相色谱(high performance liq-uid chromatography,HPLC)法测定门静脉与股动脉血液血浆中5种大黄游离蒽醌(芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚及大黄素甲醚)浓度,应用MATLAB2007B软件计算吸收动力学参数,使用统计矩法获取药物吸收半衰期(t1/2ka)、吸收达峰时间(Tmax)、峰浓度(Cmax)、药时曲线下面积AUC(0-∞)及药物在肠血管隔室的平均滞留时间(mean residence time,MRT),计算相应药物从胃肠道转运进入血液的转运速率(ka)。结果两组门静脉、股动脉药物吸收成分种类相同。多数动物门静脉各时间点均检测到芦荟大黄素,均在定量范围之内;每只动物门静脉各时间点均检测到大黄酸,个别时间点低于定量限;部分动物门静脉各时间点检测到大黄素与大黄酚,多数高于定量限;仅在少数动物门静脉个别时间点检测到大黄素甲醚。两组股动脉多数时间点检测到大黄酸,但部分时间点大黄酸血药浓度结果低于定量限,仅少数时间点检测到较低浓度芦荟大黄素、大黄素与大黄酚,未检测到大黄素甲醚。SAP组45min股动脉大黄酸血药浓度及门静脉大黄酚Cmax高于正常组,差异有统计学意义(P<0.05);其余指标差异均无统计学意义。大黄酸AUC在正常组及SAP组动物分别占总游离蒽醌的59.32%和66.07%。结论 SAP对大黄游离蒽醌的吸收动力学参数无明显影响,肠道与肝脏可能对大黄游离蒽醌存在明显代谢或转化作用。

大黄游离蒽醌纳米乳的制备工艺及对白粉病和红蜘蛛的防治效果

【目的】进行大黄游离蒽醌纳米乳的制备,初步探讨其对白粉病和红蜘蛛的防治效果.【方法】采用滴定法制备大黄游离蒽醌O/W型纳米乳,分析其理化性质和稳定性;通过田间对比试验研究了该纳米乳对温室辣椒白粉病和田间茄子红蜘蛛的防治效果.【结果】大黄游离蒽醌纳米乳中游离蒽醌的含量为(962.54±25.13)μg/mL,平均粒径为(25.37±0.55)nm,常温避光贮存较稳定.大黄游离蒽醌纳米乳100倍液处理辣椒白粉病后的相对防效为(82.44±0.75)%,对茄子红蜘蛛的防治效果为(99.64±0.51)%,分别高于15%三唑酮和0.05%生物苄呋菊酯800倍液的效果.【结论】大黄游离蒽醌纳米乳250倍稀释液的防治效果与对照药剂相当,对供试植物无负面影响,应用前景好.

石油醚萃取结合pH沉淀法制备大黄游离蒽醌注射液

以大黄极细粉为原料,经酸化和超声波处理,回流提取制备大黄浸膏;采用石油醚萃取大黄游离蒽醌,调节pH值除去杂质得到纯品后制备大黄注射液;高效液相色谱检测大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量;氯化钠明胶法检测鞣质含量;同时根据药典(2005版)规定检查注射液的热源性、刺激性、LD50。结果表明注射液中大黄酸、大黄素甲醚、大黄素、芦荟大黄、大黄酚含量分别为0.223 6、1.788 2、0.834 2、0.491 3、5.401 3mg/mL;总蒽醌含量为8.738 6mg/mL;LD50为1.213 1g;鞣质含量低于0.05mg/L。动物试验表明该方法制备的注射剂符合注射要求。

一氧化氮合酶对大黄游离蒽醌提取物致小鼠腹泻的影响

目的研究大黄游离蒽醌的致泻作用及与NO的相关性。方法分别测定小鼠在给药后的排稀便时间和次数;在给小鼠预防性ip 40 mg.kg-1NO合酶抑制剂NAME后30 min,分别ig不同剂量的大黄游离蒽醌或等容量蒸馏水,30 min后处死小鼠,分别测定其胃、小肠及结肠内容物的重量和总蛋白,以及小肠和结肠内容物中K+、Na+、Cl-的含量。结果100、200 mg.kg-1游离蒽醌均可引起小鼠腹泻。L-NAME可显著对抗游离蒽醌致小鼠腹泻及增加小鼠胃、小肠及结肠的内容物、蛋白质浓度,调节电解质水平。结论大黄游离蒽醌的致泻作用与NO合酶通路的活性改变有关。

相向双频超声粗提大黄游离蒽醌的研究

使用了20、25 kHz相向双频超声波提取装置,利用染色法研究了不同频率、功率下超声的空化效应,并将双频超声应用于大黄游离蒽醌的粗提过程。结果表明,双频超声(20 kHz+25 kHz)的空化效应大于单频超声(频率分别为20和25 kHz);在温度(20±0.5)℃、提取时间20 min、相向双频超声组合(20 kHz,15 W+25 kHz,15 W),对大黄游离蒽醌的提取率为1.843 mg/g,高于同样条件下单频超声的提取率。

微波技术在大黄游离蒽醌浸提中的应用

目的 研究微波技术对大黄游离蒽醌浸出量的影响 ,并与传统提取方法做比较。方法 采用正交试验法考察微波输出功率、药材粒径、浸出时间 3个因素对提取效率的影响 ,优选大黄游离蒽醌的最佳浸出方案。以优选出的微波浸出方案为实验组 ,以常规煎煮法及乙醇回流法为对照组 ,进行平行实验。结果 药材粒径对大黄游离蒽醌浸出的影响高度显著 (P<0 .0 1) ,功率对大黄游离蒽醌浸出的影响显著 (P<0 .0 5 ) ,时间对大黄游离蒽醌的浸出有一定的影响 (0 .0 5 <P<0 .1)。微波浸提法对大黄游离蒽醌的提取效率明显优于常规煎煮法 ,同乙醇回流提取法相当。结论 微波浸提法是一种提取效率高、操作简便、省时的提取中草药活性成分的新方法 ,值得推广应用。

大黄游离蒽醌固体分散体的制备及溶出研究

目的以聚乙烯吡咯烷酮(PVPK30)为载体,采用溶剂熔融法制备大黄游离蒽醌(FAQR)的固体分散体,提高其水溶性。方法将1∶2、1∶4、1∶8、1:12比例的FAQR和PVP加入适量无水乙醇溶解,减压除去乙醇,迅速冷却制备固体分散体,并比较各样品在水中的溶解性。结果采用溶剂熔融法制备的FAQR∶PVP(1∶4)固体分散体的溶解度为FAQR的3.6倍,T50缩短58.86%。结论采用溶剂熔融法制备FAQR∶PVP(1∶4)固体分散体能有效提高FAQR的水溶性。

大黄游离蒽醌对重症急性胰腺炎大鼠肠道免疫功能的影响及其作用机制

目的观察大黄游离蒽醌对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肠道免疫功能的影响,并探讨其作用机制。方法将24只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、大黄游离蒽醌组及生大黄水煎液组,每组6只。模型组、大黄游离蒽醌组及生大黄水煎液组经胰胆管逆行注射牛磺胆酸钠制作SAP模型,假手术组经胰胆管逆行注射等量灭菌生理盐水。大黄游离蒽醌组、生大黄水煎液组建模前12 h及建模2 h分别给予大黄游离蒽醌200 mg/kg和生大黄水煎液6.6 g/kg灌胃,假手术组、模型组不予处理。建模24 h,取各组肠系膜淋巴结(MLN),采用HE染色法观察MLN组织病理形态变化,ELISA法检测MLN组织匀浆上清液TNF-α、IL-1,免疫荧光法检测核苷酸结合寡聚化结构域样模式识别受体(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)表达,流式细胞仪检测CD4+、CD4+CD25+Foxp3+细胞及Th1、Th2细胞数量,计算Treg比例、Th1/Th2。结果与假手术组比较,模型组淋巴小结增大,皮质区增厚,皮质区淋巴小结数量增加;与模型组比较,大黄游离蒽醌组、生大黄水煎液组皮质区淋巴小结数量少、体积小;大黄游离蒽醌组、生大黄水煎液组淋巴小结大小相当。TNF-α、IL-1和NLRP3、ASC水平:模型组明显高于假手术组(P<0.05),游离蒽醌组及生大黄组明显低于模型组(P<0.05)。CD4+CD25+Foxp3+、CD4+、Treg比例:模型组明显高于假手术组(P均<0.05),除大黄游黄蒽醌组CD4+外,大黄游离蒽醌组、生大黄水煎液组均明显低于模型组(P均<0.05)。Th1、Th2及Th1/Th2:模型组Th1、Th1/Th2均高于假手术组(P均<0.05),Th2低于假手术组(P<0.05);大黄游离蒽醌组、生大黄水煎液组Th1、Th1/Th2较模型组均明显降低(P均<0.05),而Th2较模型组明显升高(P<0.05)。大黄游离蒽醌组、生大黄水煎液组上述各检测指标比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论大黄游离蒽醌能减轻SAP大鼠肠道的免疫炎性反应,其效果与生大黄水煎液相当;其机制可能是通过抑制炎性小体的表达和调节Th1/Th2失衡,干预SAP早期的免疫过激反应,继而调节机体的免疫平衡。

大黄游离蒽醌固体分散体的研究

目的通过制备固体分散体提高大黄游离蒽醌的水溶性。方法采用机械研磨法、低共熔熔融法、溶剂熔融法制备以聚乙二醇6000（PEG-6000）为载体材料的不同比例的固体分散体,并比较各种固体分散体在水中的溶解性。结果采用溶剂熔融法制备的PEG-6000：FAR（4：1）固体分散体的溶解性显著增加,且增溶效果优于其他制备方法和其他比例所得的固体分散体。结论 PEG-6000：FAR（4：1）采用溶剂熔融法制备的固体分散体能有效提高FAR的水溶性。

大黄游离蒽醌对J774A.1巨噬细胞焦亡的影响及机制研究

该研究以脂多糖(LPS)+三磷酸腺苷(ATP)刺激的J774A.1巨噬细胞建立细胞焦亡体外模型,探讨大黄游离蒽醌(free total rhubarb anthraquinones,FTRAs)对细胞焦亡的干预机制。体外培养J774A.1巨噬细胞,实验分组为空白对照组、不同质量浓度脂多糖(LPS,0.25、0.5、1μg·mL^(-1))+ATP(1.25、2.5、5 mmol·L^(-1))组,通过CCK-8法检测细胞活力、碘化丙锭(PI)凋亡细胞染色法、乳酸脱氢酶(LDH)及白细胞介素(IL)-18和肿瘤坏死因子(TNF)-α释放,建立巨噬细胞焦亡体外模型。之后将J774A.1巨噬细胞随机分为6组:空白对照组,LPS+ATP组,FTRAs高剂量单独作用组,FTRAs低、中、高剂量预保护组。检测上述细胞焦亡的表型特征和关键指标作为评判FTRAs对LPS+ATP诱导的细胞焦亡的影响依据。Western blot法和RT-PCR法检测半胱氨酸蛋白酶(caspase)-1/11细胞焦亡通路相关蛋白和mRNA表达水平,阐明其抗焦亡效应的分子机制。结果显示巨噬细胞焦亡体外模型以0.50μg·mL^(-1)LPS+5.00 mmol·L^(-1)ATP的刺激条件效果最佳。FTRAs预保护细胞24 h,能够提高焦亡条件下细胞的活力、减轻细胞的受损程度、降低PI染色阳性率并减少LDH、IL-18和TNF-α的释放。FTRAs能够明显抑制GSDMD蛋白的活化,并且显著下调焦亡通路特征分子TLR4、NLRP3、cleaved-caspase-1、cleaved-caspase-11的蛋白表达,但是对ASC蛋白无明显影响。FTRAs还能够明显抑制caspase-1、caspase-11和GSDMD的mRNA表达。这些研究结果表明,FTRAs对LPS+ATP诱导的细胞焦亡模型具有抑制作用,且FTRAs通过调控经典和非经典细胞焦亡信号通路,减少炎性炎症因子的产生,发挥抗焦亡效应。

大黄游离蒽醌对犬重症急性胰腺炎早期肠损伤的保护作用

目的:探讨单次灌胃大黄游离蒽醌对重症急性胰腺炎性肠损伤的保护作用。方法:采用逆行胰管注入5%牛磺胆酸钠制备犬重症急性胰腺炎模型,将动物随机分为假手术组、模型组、给药组,造模后6 h给药组动物灌胃大黄总游离蒽醌20 mg.kg-1,手术前、给药前、给药后不同时间点取血测定外周血液中血清淀粉酶活性、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量和内毒素含量变化,给药前、给药后不同时间点取血测定门静脉中二胺氧化酶活性变化。结果:给药组与模型组相比,给药后0到6 h血清淀粉酶活性无明显降低,外周血中α肿瘤坏死因子(TNF-α)水平在给药后5 h显著降低(P<0.05),门静脉血中二胺氧化酶活性显著降低(P<0.05),但外周血液中内毒素含量反而显著升高(P<0.05)。结论:大黄游离蒽醌可通过减轻机体炎症反应和肠上皮细胞损伤、改善肠道微循环,来发挥对重症急性胰腺炎性肠损伤的保护作用。

大黄游离蒽醌对重症急性胰腺炎大鼠肝脏的影响

目的探讨大黄游离蒽醌对重症急性胰腺炎(sever acute pancreatitis,SAP)致大鼠肝损伤的保护作用。方法将雄性SD大鼠54只,随机分为假手术组(A组)、SAP模型组(B组)和SAP模型+大黄游离蒽醌组(C组),采用逆行胰胆管注射3.5%的牛磺胆酸钠制备大鼠SAP模型,于造模前12h及造模后2h以大黄游离蒽醌(20g/kg)2ml灌胃制备给药组,分别于术后6,12,24h处死大鼠后采集大鼠肝组织,HE染色观察肝脏病理组织学改变,ELISA法测定肝组织匀浆中肿瘤坏死因子-α(tumor necrotic factor-a,TNF-α)和白细胞介素-1(interleukin-1,IL-1)水平,髓过氧化物酶法检测肝组织匀浆髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活性。结果与A组相比,B组大鼠肝组织匀浆液的TNF-α、IL-1和MPO水平在三个时间点均显著高于A组(P<0.05);C组大鼠肝组织匀浆液TNF-α、IL-1和MPO水平在6h时显著低于B组(P<0.05),在24h时低于B组,但差异无显著性(P>0.05)。结论大黄游离蒽醌可减轻早期重症急性胰腺炎所致的肝损伤,提示大黄游离蒽醌可能在重症急性胰腺炎所致的肝损伤中发挥着重要作用。

大黄游离蒽醌致泻作用机制研究

目的:评价两种一氧化氮合酶抑制剂对大黄游离蒽醌致大鼠腹泻作用的影响,以探讨大黄泻下作用相关机制。方法:应用实验大鼠在体肠道单向灌流模型,分别考察正常对照组、大黄游离蒽醌低剂量组、大黄游离蒽醌高剂量组、大黄游离蒽醌高剂量联用L-NAME组及大黄游离蒽醌高剂量联用地塞米松组的致泻作用。通过记录灌入量和流出量,测量灌流肠段的表面积,检测流出液的总蛋白、葡萄糖以及Na+、K+及Cl-含量进行评估。结果:大黄游离蒽醌10μg/ml在体灌流能显著提高大鼠肠道流出液的蛋白质浓度、钠以及氯离子浓度;L-NAME10μg/ml和地塞米松5μg/ml均可显着对抗这种作用,与大黄游离蒽醌10μg/ml有统计学差异。在体灌流大黄游离蒽醌2μg/ml和大黄游离蒽醌10μg/ml均有增加流出液的量以及减少葡萄糖吸收的趋势,但与正常对照组比较没有显着差异。结论:大黄游离蒽醌致腹泻作用与其抑制一氧化氮合酶特别是诱导型一氧化氮合酶的活性有关,其详细作用机制有待进一步深入研究。

平衡透析法测定大黄游离蒽醌大鼠血浆蛋白结合率的研究

目的:研究5种大黄游离蒽醌(FRAs)共存条件下的大鼠血浆蛋白结合率(PBR)。方法:以体外方式,用平衡透析法模拟5种大黄游离蒽醌体内与血浆蛋白结合的过程,并以高效液相色谱法测定低、中、高三个浓度混合大黄游离蒽醌在透析袋内血浆中的质量浓度与透析袋外缓冲液中的质量浓度,计算血浆蛋白结合率。结果:5种大黄游离蒽醌与大鼠血浆均呈现高蛋白结合率(>80%),且在实验浓度下,大黄酸和大黄素的血浆蛋白结合率与其浓度成反比,大黄素甲醚的血浆蛋白结合率与其浓度成正比。结论:5种大黄游离蒽醌成分间存在竞争性抑制,其竞争能力与化合物脂溶性和酸性有关。

复方大黄腹膜透析液中5种游离蒽醌含量的HPLC测定

目的建立复方大黄腹膜透析液中5种游离蒽醌的含量测定方法。方法采用反相高效液相色谱法,LiChroCARTHPLC-KartuscheRP-18e(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱,流动相为甲醇-0.1%磷酸(85:15),流速1.0mL·min-1,检测波长225nm。结果方法中5种游离蒽醌平均回收率(n=6)分别为100.9%,RSD=2.21%(大黄素);99.8%,RSD=2.43%(大黄酸);97.3%,RSD=2.25%(芦荟大黄素);100.9%,RSD=1.94%(大黄酚);101.5%,RSD=1.78%(大黄素甲醚)。结论建立了一种操作简便、重现性良好的高效液相色谱法控制复方大黄腹膜透析液中有效成分含量。

大黄游离蒽醌对重症急性胰腺炎大鼠肾损伤的影响

目的:探讨重症急性胰腺炎对肾脏的影响,并观察大黄游离蒽醌对肾脏的保护作用。方法:雄性大鼠72只,随机分为假手术对照组、重症急性胰腺炎模型组、生大黄水煎液干预组和大黄游离蒽醌干预组4个组,生大黄组和大黄游离蒽醌组在胰腺炎建模前12h和建模后2h分别给予生大黄水煎液和大黄游离蒽醌灌胃。各组分别于术后6h、12h和24h后三个时间点处死大鼠取肾脏组织,HE染色法观察肾脏组织的病理组织学改变,酶联免疫吸附法测定肾脏组织匀浆中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1(IL-1)水平,髓过氧化物酶法检测肾脏组织匀浆髓过氧化物酶(MPO)活性。结果:胰腺炎模型组与假手术组相比三个时间点TNF-α(0.358±0.016 vs 0.190±0.005 P<0.05;0.390±0.010 vs 0.204±0.005 P<0.05;0.396±0.005 vs 0.198±0.003 P<0.05)和IL-1(0.334±0.004 vs 0.179±0.004 P<0.05;0.342±0.005 vs 0.176±0.003P<0.05;0.365±0.005 vs 0.174±0.004P<0.05)水平,以及肾组织MPO酶活性(0.860±0.014 vs 0.539±0.009 P<0.05;0.867±0.010 vs 0.610±0.005 P<0.05;0.870±0.013 vs 0.545±0.009 P<0.05)均明显升高,差异有显著性。生大黄组和大黄游离蒽醌组与胰腺炎组相比较均显著抑制12h和24h肾组织TNF-α(0.286±0.008 vs 0.390±0.010 P<0.05;0.295±0.008 vs 0.396±0.005 P<0.05)和IL-1(0.254±0.005 vs 0.342±0.005 P<0.05;0.267±0.004 vs 0.365±0.005 P<0.05)水平,显著抑制6h和12h肾组织MPO酶活性(0.730±0.008 vs 0.860±0.014 P<0.05;0.730±0.010 vs 0.867±0.010 P<0.05);生大黄组和大黄游离蒽醌组之间的差异无显著性。结论:大黄水煎液和大黄游离蒽醌均能抑制胰腺炎时机体的炎症反应从而减轻对肾脏的损伤作用,大黄游离蒽醌与大黄水煎液的疗效相当。

大黄游离蒽醌抑制NLRP3/Caspase-1通路改善大鼠重症急性胰腺炎肝损伤的研究

目的:探究大黄游离蒽醌通过抑制NLRP3/Caspase-1通路对大鼠重症急性胰腺炎(SAP)肝损伤的保护作用。方法:雄性SD大鼠随机分为正常对照组、SAP模型对照组、大黄游离蒽醌22.5、45、90 mg/kg组和生大黄900 mg/kg组。除正常对照组外,3.5%牛磺胆酸钠逆行注射到胰胆管内制备SAP大鼠模型,正常对照组注射等体积生理盐水。各药物组灌胃给药,12 h/次,共3次,末次给药2 h后处死动物取材。另按照方案给药3次后,观察大鼠7 d死亡率。HE染色观察胰腺和肝脏的病理变化;检测血清淀粉酶(AMS)、脂肪酶(LPS)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)活力;ELISA法检测肝组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6和IL-18的水平;蛋白免疫印迹法检测肝组织TLR4、NLRP3、Pro-caspase-1和Caspase-1的蛋白表达。结果:SAP模型对照组大鼠7 d死亡率为41.67%,大黄游离蒽醌45、90 mg/kg组大鼠能够降低SAP模型大鼠的死亡率。与正常对照组相比,SAP模型对照组大鼠胰腺、肝脏病理评分显著增高,血清AMS、LPS、ALT和AST活力以及肝组织TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-18含量显著上升(P<0.01),肝组织TLR4、NLRP3、Pro-caspase-1和Caspase-1蛋白表达显著上调(P<0.01)。与SAP模型对照组相比,大黄游离蒽醌45、90 mg/kg组可明显降低胰腺和肝脏病理学评分,明显降低血清AMS、LPS、ALT和AST活力及肝组织TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-18含量(P<0.05或P<0.01),肝组织TLR4、NLRP3、Pro-caspase-1和Caspase-1蛋白表达均显著下调(P<0.01)。结论:大黄游离蒽醌对SAP继发肝损伤具有保护作用,其机制可能与抑制NLRP3/Caspase-1通路的表达,减少肝组织促炎细胞因子的产生有关。