高效液相色谱-串联质谱法测定大黄醛中杂质大黄素和丹蒽醌含量

蒽醌类化合物存在于天然,也可人工合成。天然蒽醌常存在于高等植物和低等植物地衣类和菌类的代谢产物中,具有止血、利尿、泻下等作用。该研究建立了高效液相色谱-串联质谱法,测定大黄醛中杂质大黄素与丹蒽醌的含量。样品经乙腈提取后,采用Poroshell 120 EC-C18(4.6*150 mm, 4um)色谱柱,流动相A为0.1%(体积分数)甲酸,流动相B为乙腈进行梯度洗脱,单次分析时间为20 min。采用多反应监测(MRM)方式,离子源为ESI(+),确定母离子及子离子参数,优化相应质谱参数后进行采集。结果表明,该方法下,杂质大黄素、丹蒽醌与空白溶剂和样品无干扰现象,大黄素与丹蒽醌方法检出限(S/N3)均为0.06 mg/kg,方法定量限(S/N10)均为0.12 mg/kg,在4.5、7.5、15、22.5 mg/kg四个添加水平上回收率分别为111.9%、120.2%,各加标水平平行测定结果的相对标准偏差(RSD)为3.2%、2.6%,且在22.5~150 μg/L范围内线性关系良好,相关系数(r)均大于0.998。考察柱温、流动相初始比例、流速条件的改变对实验结果的影响,最终显示该方法操作简单,准确度高,重复性好,精密度好且方法条件耐用性好。

大黄素非金属选择性氧化制备大黄酸

以芦荟大黄素为原料,经过TEMPO氧化系统氧化成大黄醛,再被过氧化氢氧化成终产物大黄酸。通过研究反应温度、反应时间、原料配比、溶剂的加入量等因素对产物得率的影响,优化各步反应的工艺条件,得出合成大黄酸的最佳工艺条件。这种新的氧化方法除了能减少反应步骤从而使反应过程更有效,还能避免由于使用铬、锰等重金属造成的后处理复杂和污染环境等问题,而且无论原料含量高还是低,都能获得高含量的产物,产物纯度可达98%。

肝微粒体孵育体系中大黄酸及其代谢活化产物的检测方法研究

目的：优化和建立大黄酸及其代谢活化产物检测方法,并应用于大黄酸肝微粒体代谢活化研究。方法：肝微粒体孵育样品以含3%甲酸的甲醇酸化并沉淀蛋白后,用API 4000LC-MS/MS对大黄酸和其活性代谢物大黄酸乙酰葡糖醛酸进行定性、定量分析。使用Agela Venusil XBP C18column（50×2.1 mm,3μm）色谱柱,流动相为0.1%甲酸水-乙腈梯度洗脱。ESI离子源在负离子模式下进行测定,多反应离子监测,用于定量分析的离子对为m/z 283.0→239.5（大黄酸）和459.0→283.0（大黄酸葡糖醛酸）。结果：大黄酸乙酰葡糖醛酸在PBS、甲醇中都不稳定,以含3%甲酸的甲醇处理后,大黄酸乙酰葡糖醛酸在样品溶液中稳定性良好。大黄酸和大黄酸乙酰葡糖醛酸的线性范围分别为100～25 000 nmol·L-1和10～5 000 nmol·L-1,日内和日间RSD均〈10.7%,准确度在95.8%～112%之间。最适宜孵育时间优化为40 min。结论：本实验所建立的肝微粒体体系中大黄酸及其代谢活化产物大黄酸乙酰葡糖醛酸的测定方法简便、可行,为进一步研究大黄酸的代谢活化提供了基础。