大黄鱼头肾细胞系瞬时转染方法的选择及优化

[目的]为了选择适合大黄鱼头肾细胞(LYCK)的转染试剂并优化转染条件,用于开展后期大黄鱼细胞生物学研究。[方法]分别将LipofectamineTM2000、FuGENE HD、X-tremeGENE 9及X-tremeGENE HP与带有加强型绿色荧光蛋白(EGFP)编码基因的质粒pEGFP-N1转染LYCK细胞。[结果]48 h后通过倒置荧光显微镜观察EGFP的表达情况,发现4种转染试剂中X-tremeGENE HP的转染效果(转染效率~1%,细胞生存率>80%)优于其他三种(转染效率<1%,细胞生存率<50%)。在此基础上进一步优化转染条件发现:当DNA质量(μg)和X-tremeGENE HP体积(μL)的比例为1∶7时,转染效率~10%且细胞生存率>60%。转染试剂联用的方法证实,X-tremeGENE HP和LipofectamineTM2000联用转染效率(转染效率~3%)高于其他混合转染组(转染效率<1%)。[结论]综合考虑转染效果、细胞毒性及经济效益,选用X-tremeGENE HP作为转染介质,DNA质量与X-tremeGENE HP体积比例为1∶7时,能够在LYCK细胞中实现最佳转染效果,这一结果为在利用LYCK细胞开展大黄鱼相关免疫基因研究提供了有效的技术手段。