基于高效液相色谱法同步测定药对大黄-黄芪胶囊主要蒽醌类成分的含量

目的建立同步测定药对大黄-黄芪胶囊主要蒽醌类成分含量的高效液相色谱法(HPLC)。方法采用HPLC检测药对大黄-黄芪胶囊中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素和大黄酚的含量。色谱条件:Supersil ODS2色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),柱温35℃,流动相为甲醇(A)-0.1%磷酸水溶液(B),流速1.0 mL/min,梯度洗脱方式为0~70 min(50%~75%A)、70~90 min(75%A),流速为1.0 mL/min,检测波长为254 nm。在上述色谱条件下进行专属性试验、线性关系考察、仪器精密度试验、稳定性试验、重复性试验、加样回收试验及样品含量测定。结果芦荟大黄素、大黄酸、大黄素和大黄酚的浓度分别为0.25~36.25 mg/mL(R=0.9908),0.50~53.50 mg/mL(R=0.9942)、0.25~45.00 mg/mL(R=0.9912)、0.50~62.00 mg/mL(R=0.9937),浓度与峰面积呈良好的线性关系。仪器精密度试验、稳定性试验、重复性试验的相对标准偏差(RSD)均<3%。4种蒽醌类成分的平均回收率为98.97%~102.45%,RSD为0.26%~3.92%。芦荟大黄素、大黄酸、大黄素和大黄酚的含量分别为(0.821±0.062)mg/g、(1.753±0.159)mg/g、(1.303±0.109)mg/g、(2.909±0.251)mg/g。结论采用HPLC同步检测药对大黄-黄芪胶囊中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素和大黄酚的含量,结果准确可靠、操作简便、重复性好,可用于大黄药材及其复方制剂药对大黄-黄芪胶囊主要蒽醌类成分的含量测定。

基于网络药理学和分子对接探讨大黄-黄芪药对防治糖尿病肾病的作用机制

目的:基于网络药理学和分子对接探讨大黄-黄芪药对防治糖尿病肾病(diabetic kidney disease,DKD)的作用机制。方法:在中药系统药理学数据库与分析平台(traditional Chinese medicine systems pharmacology database and analysis platform,TCMSP)中检索大黄、黄芪的有效成分及靶点。在GeneCards、Drugbank、在线人类孟德尔遗传数据库(online mendelian inheritance in man,OMIM)检索DKD相关靶点。利用Venny 2.1.0软件筛选有效成分相关靶点和疾病靶点的交集,并绘制韦恩图。通过Cytoscape 3.9.1软件构建“中药-有效成分-交集靶点-DKD”网络图,并进行拓扑分析筛选关键成分。将交集靶点输入String数据库获取蛋白质互作(protein-protein interaction networks,PPI)关系,利用Cytoscape 3.9.1软件构建PPI网络,并采用拓扑分析插件CytoNCA筛选核心靶点。运用R语言软件对交集靶点进行基因本体(gene ontology,GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)信号通路富集分析。利用Atuodock软件对关键成分和核心靶点进行分子对接。结果:大黄-黄芪药对有效成分27个,作用靶点212个,DKD疾病靶点3513个,有效成分与疾病的交集靶点156个。“中药-有效成分-交集靶点-DKD”网络拓扑分析得到槲皮素、山柰酚、7-O-甲基异木糖醇、芒柄花素、异鼠李素等为关键成分。PPI网络拓扑分析筛选到肿瘤蛋白P53(tumor protein P53,TP53)、蛋白激酶B1(protein kinase B1,AKT1)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)等为核心靶点。GO分析共富集到2752个条目,包含生物过程2512条,分子功能168条,细胞组分72条。KEGG共富集到186条信号通路。分子对接显示,核心靶点与有效成分具有较好的结合能力。结论:大黄-黄芪药对通过多成分、多靶点、多通路发挥抗氧化应激、抗炎、抗纤维化等作用治疗DKD,为进一步分子机制研究提供依据。

大黄-黄芪不同剂量配比对慢性肾功能衰竭大鼠肠粘膜和肠道菌群移位的影响

目的:探讨大黄-黄芪不同剂量配比对慢性肾衰竭大鼠肠粘膜和肠道菌群移位的影响。方法:选取已建立慢性肾衰模型的大鼠分为模型组、贝那普利(5 mg/kg)组、大黄(1.5 g/kg)组、大黄-黄芪1:1(3.0 g/kg)组、大黄-黄芪1:2(4.5 g/kg)组、大黄-黄芪1:4(7.5 g/kg)组、大黄-黄芪1:6(10.5 g/kg)组。用显色基质鲎试剂终点显色法、生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法、蛋白免疫印迹法和细菌平板计数法分别检测血浆内毒素、血清D-乳酸、回肠组织中occludin蛋白相对表达量及肠道菌群移位量。结果:(1)慢性肾衰模型组大鼠较假手术组大鼠内毒素、肠道细菌移位率显著升高,occludin蛋白相对表达量显著降低,D-乳酸水平显著升高;(2)与模型组比较,各给药组大鼠内毒素含量显著降低,大鼠脏器肠道菌群移位率除大黄-黄芪1:2组外,各给药组细菌移位率降低显著差异,occludin蛋白相对表达量显著升高,D-乳酸值有所降低;(3)与大黄组比较,大黄-黄芪不同剂量配比组中大黄-黄芪1:4组降低内毒素作用最为显著。结论:慢性肾衰会使大鼠肠粘膜发生损伤,肠通透性增加,血浆内毒素和肠道菌群发生移位;大黄-黄芪不同剂量配比可以改善慢性肾衰大鼠的肠粘膜损伤,降低肠粘膜通透性,使内毒素和肠道菌群移位得到抑制,其中以大黄-黄芪1:4组改善作用显著。

大黄黄芪不同配伍比例对慢性肾衰竭大鼠24hUPQ、Scr、BUN及肾脏形态学的影响

目的:探讨大黄黄芪不同配伍比例对慢性肾衰竭大鼠24h尿蛋白定量、血清肌酐和尿素氮以及肾脏形态学的影响。方法:SD大鼠采用5/6肾切除法建立慢性肾功能衰竭模型,随机分为正常组、假手术组、模型组、贝那普利组、大黄黄芪(1:1、1:4、1:6)组,连续灌胃给药40天,收集24h尿液量测定24h尿蛋白并测定血清肌酐和尿素氮浓度,光镜下观察肾组织并对病变进行分类评分。结果:1大鼠5/6肾切除后90d,慢性肾衰大鼠模型成功;2大黄黄芪(1:1)、大黄黄芪(1:4)和大黄黄芪(1:6)能明显减低慢性肾衰大鼠24h尿蛋白定量、血清肌酐和血清尿素氮水平,改善慢性肾衰大鼠的肾小管空泡变性和炎性坏死程。3相对于大黄黄芪(1:6)组,大黄黄芪(1:1)组降低大鼠血清Scr和BUN的作用具有统计学意义(P<0.05),肾脏病变改善效果最好。结论:大黄黄芪配伍能有效改善慢性肾衰大鼠蛋白尿的情况,增强肾小球的滤过功能,减轻肾脏病变程度,以大黄黄芪(1:1)组作用显著。

Inhibitory effect of emodin and Astragalus polysaccharide on the replication of HBV

AIM: To evaluate the anti-viral effect of emodin plus Astragalus polysaccharide (APS) in hepatitis B virus (HBV) transgenic mice.METHODS: Sixty HBV transgenic mice (HBV TGM) whose weight varied between 18 and 24 g were randomly divided into 3 groups, with 20 mice in each group. Group A was the normal control, where the mice were treated with physiological saline; group B was the positive control where the mice were treated with lamivudine solution (100 mL/kg per day). Group C was the experimental group where the mice were treated with physiological saline containing emodin and APS (57.59 mg/kg per day and 287.95 mg/kg per day, respectively). The mice were treated daily for 3 wk. After 1 wk recovery time, the mice were sacrifi ced and serum as well as liver tissues were collected for ELISA and histological examination.RESULTS: After 21 d treatment, HBV DNA levels in group B and group C significantly declined when compared with group A (P < 0.05). However, a signif icant increase in HBV DNA content was observed in group B, whereas this phenomenon was not observed in group C. A reduction in the contents of HBsAg, HBeAg and HBcAg in the mice from group B and C was observed when compared with group A.CONCLUSION: Emodin and APS have a weak but persistent inhibitory effect on HBV replication in vivo, which may function as a supplementary modality in the treatment of hepatitis B infection.