Sprague-Dawley大鼠胃肠道微生物区系的研究

为了揭示Sprague-Dawley大鼠胃肠道微生物群落组成情况,探究大鼠胃肠道不同区域的菌群差异,该研究采用16S rRNA基因序列技术,对Sprague-Dawley大鼠的胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠和直肠的肠腔内容物进行基因组测序和微生物组成分析。结果表明:Sprague-Dawley大鼠不同胃肠道区域的细菌群落组成不同;大肠样本的物种丰富度和多样性高于小肠样本;厚壁菌门是各肠道段的优势菌门,乳酸杆菌属是各肠道段的优势菌属;与小肠相比,大鼠大肠微生物菌群更稳定、多样。研究结果揭示了Sprague-Dawley大鼠的胃肠道微生物群落组成信息,为其作为动物模型的相关研究提供了理论依据。

锐钛矿型纳米二氧化钛经口暴露90天对Sprague-Dawley大鼠血常规指标的影响

二氧化钛(titanium dioxide,TiO 2)在食品领域的应用主要是作为食品添加剂[1-2],这已经得到了国际食品卫生及食品添加剂主管组织联合国粮农组织、世界卫生组织下的食品添加剂联合专家委员会、国际食品法典委员会(Codex Alimentarius Commission,CAC)、美国食品与药物管理局(Food and Drug Administration,FDA)、欧盟食品安全管理局(Euro-pean Food Safety Authority,EFSA)等的批准,其中美国FDA在2002年认可TiO 2为安全物质,对人体并无伤害。

成年Sprague-Dawley大鼠的睡眠结构和呼吸暂停分析

目的 :了解成年Sprague -Dawley大鼠生理状态下的睡眠结构以及清醒 /睡眠状态下的呼吸暂停情况。方法 :对每只SD大鼠进行 6h的睡眠呼吸监测。大鼠的皮质脑电、颈部肌电以及通过微压传感器记录到的呼吸信号经过多导生理仪放大 ,以波形形式在计算机上同步显示并储存。使用人机交互的方法进行脑电分期和呼吸暂停的判断。SAS软件分析数据。结果 :2 6只成年雄性SD大鼠的非快动眼睡眠期 (NREM)和快动眼睡眠期 (REM)分别占总睡眠时间的 (83 3± 7 1) %和 (16 2± 7 1) %。全部监测大鼠在睡眠中出现呼吸暂停 ,平均睡眠呼吸暂停指数 (AI)为 (11 5± 4 6 )次 /h。其中REM期的呼吸暂停最频繁。且叹息后呼吸暂停主要发生于NREM期 ,而自发呼吸暂停主要发生于REM期。结论 :成年SD大鼠具有与人类相似的睡眠结构 ,睡眠中发生的中枢性呼吸暂停现象及其表现特点也与人类SAS患者相似 ,可以作为研究睡眠呼吸暂停中枢发病机制的天然动物模型。

Sprague-Dawley大鼠外周血来源间充质干细胞的动员、分离培养及鉴定

目的：探讨Sprague—Dawley大鼠外周血来源间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSC）的动员、分离培养及鉴定方法，分析其表面标记和多向分化潜能，为运动创伤中的细胞治疗和组织工程产品培育提供新来源的、可以微创获得和自体细胞移植的种子细胞。方法：联合动员大鼠外周血MSC．采集腹主动脉外周血4ml。使用淋巴细胞分离液结合密度梯度离心方法分离外周血单核细胞，体外培养至第3代。于显微镜下观察其形态和生长状态。取第3代MSC，鉴定其表型并向成骨、成脂和成软骨诱导分化．以证明其干细胞的特性。结果：经淋巴分离液结合密度梯度离心方法分离培养的外周血单核细胞．3～5天可见少量长梭形细胞贴壁，7-9天见细胞成簇生长，并形成克隆集落。第3代细胞形态较均一．生长增殖良好；表达典型的MSC标记CD44和CD90，不表达造血干细胞标记CD34和CD45。成骨诱导21天后，茜素红和ALP染色阳性，有矿化结节形成。成脂诱导21天后，油红0染色阳性．细胞内有脂滴形成。细胞微团无血清成软骨诱导21天后。甲苯胺蓝染色阳性，细胞外有蛋白多糖分泌：免疫组织化学染色示，特异性软骨基质II型胶原表达阳性。结论：采用联合药物动员方法能促进干细胞向外周血释放，分离培养的外周血干细胞经鉴定为MSC，体外具备三系分化潜能，有望成为运动创伤中新的细胞治疗和组织工程产品培育的种子细胞来源。

Sprague-Dawley大鼠自发性乳腺癌分子分型的动物实验研究

目的探讨Sprague-Dawley(SD)大鼠患有自发性乳腺癌的分子分型情况。方法选取20只无特定病原体级雌性4周SD大鼠。通过分析全部大鼠乳腺癌分子分型,找到自发性乳腺肿瘤相关分子分型特点。结果 Luminal A型(55.00%)乳腺癌大鼠显著高于Basal-like型、Luminal B型和Her-2过表达型(P均<0.05),其余三组差异无统计学意义(P均>0.05)。结论临床上除常规生化指标及影像学诊断以外,配合ER、Cerb B-2及PR检测对早期鉴别大鼠乳腺癌有积极意义。

4.5与7.5月龄雌性Sprague-Dawley大鼠骨代谢的变化

目的 :观察雌性SD大鼠 4 .5月龄和 7.5月龄时骨代谢的变化。方法 :4月龄雌性SD大鼠 2 0只 ,随机分 2组 ,饲养至 4 .5月龄和 7.5月龄时 ,用骨组织形态计量学分别测量胫骨上段 (PTM )、腰椎 (LV)及胫骨中段 (Tx)的静态参数和动态参数。结果 :与 4 .5月龄比较 ,7.5月龄大鼠PTM、LV、Tx的骨量无明显变化 ,但LV和Tx的骨形成参数标记周长百分数 (%L .Pm )、矿化沉积率 (MAR )及骨形成率BFR TV、BFR BV、BFR BS均降低。结论 :SD大鼠在 4 .5～ 7.5月龄时 ,松质骨和皮质骨的骨量变化不明显 ,但腰椎和胫骨中段的骨形成随月龄增加而降低。

喂养黄曲霉毒素污染的市售花生油对Sprague-Dawley大鼠的慢性作用

香港部分市场上出售的花生油经分析平均含黄曲霉毒素（AFTB1）110μg/kg。以5.5%的花生油作为脂肪源加到合成饲料中（该饲料含AFTB15～7μg/kg）,喂养断奶后的Sprague-Dawley大鼠,实验期22个月。对照组以不含AFTB1的玉米油作为脂肪源,其它成分与实验组同。两组各90只大鼠（60只雄、30只雌）。实验过程中,两组的饲料消耗和体重增长无差异。实验组中14只鼠于实验结束前死去。在第18个月宰杀的大鼠中,发现两只有肉瘤,发生部位一只是结肠壁,另一只是腹股沟皮下组织。结肠瘤是平滑肌肉瘤,具有突起的纺锤状肿瘤细胞和显著的有丝分裂活动。

萝卜硫素调节腺苷酸活化蛋白激酶/沉默信息调节器1/过氧化物酶体增殖活化受体γ辅助活化因子1α信号通路对妊娠高血压大鼠妊娠结局的影响

目的 探究萝卜硫素(SFN)通过调节腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/沉默信息调节器1(SIRT1)/过氧化物酶体增殖活化受体γ辅助活化因子1α(PGC-1α)信号通路对妊娠期高血压疾病(HDP)大鼠妊娠结局的影响。方法 2021年3月至2022年6月,70只雌性大鼠受孕后分为对照组、HDP组、SFN-L组(SFN 5 mg/kg)、SFN-M(SFN 15 mg/kg)、SFN-H(SFN 30 mg/kg)、硫酸镁组(硫酸镁注射液100 mg/kg)、Compound C组(SFN 30 mg/kg+AMPK抑制剂Compound C 0.25 mg/kg),各组10只。在妊娠第13天起除对照组,其余各组妊娠大鼠尾静脉注射7 mg/kg L-NAME,连续注射4 d,建立HDP大鼠模型,对照组大鼠尾静脉注射0.9%氯化钠溶液。从造模成功后第1天(妊娠第17天)起,各给药组注射相应剂量的药物,对照组、HDP组注射0.9%氯化钠溶液,连续给药至妊娠第20天。检测妊娠第17天和第20天各组大鼠尾动脉压和24 h尿蛋白定量水平;试剂盒法检测大鼠血肌酐(SCr)和血尿素氮(BUN)水平;观察检测大鼠妊娠结局指标;HE染色观察胎盘组织和肾脏组织病理情况;蛋白质印迹法检测胎盘组织可溶性血管内皮生长因子受体-1(sFLT-1)、胎盘生长因子(PLGF)、内皮型一氧化氮合酶(eNOs)、磷酸化eNOs(peNOs)、磷酸化AMPK(p-AMPK)、AMPK、SIRT1、PGC-1ɑ蛋白水平。结果 HDP组大鼠血压[(152.52±4.79)mmHg比(101.63±4.15)mmHg]、24 h尿蛋白定量水平[(679.38±64.32)mg/L比(123.17±20.19)mg/L]、胎鼠病死率[(28.57±2.08)%比(0.96±0.11)%]、血清SCr和BUN水平、胎盘组织sFLT-1表达水平高于对照组(P<0.05),而胎鼠质量[(2.32±0.19)g比(4.75±0.43)g]、产仔数[(11.70±0.69)个比(7.10±0.57)个]、胎盘质量[(0.32±0.06)g比(0.58±0.12)g]、胎盘组织PLGF、p-eNOs、p-AMPK、SIRT1和PGC-1ɑ蛋白表达低于对照组(P<0.05),另外,HDP大鼠胎盘组织绒毛数量减少,胎盘结构缩小,部分绒毛显示纤维蛋白样坏死,肾脏组织内肾小球数目减少,结构异常;SFN-L组、SFN-M组、SFN-H组和硫酸镁组大鼠血压[(136.91±5.16)mmHg、(129.25±4.54)mmHg、(117.33±4.19)mmHg、(121.72±4.61)mmHg比(152.52±4.79)mmHg]、24 h尿蛋白定量水平[(595.91±53.05)mg/L、(532.23±49.76)mg/L、(461.16±35.15)mg/L、(482.74±39.58)mg/L比(679.38±64.32)mg/L]、胎鼠病死率、血清SCr和BUN水平、胎盘组织sFLT-1表达水平低于HDP组(P<0.05),胎鼠质量、产仔数、胎盘质量、胎盘组织PLGF、p-eNOs、p-AMPK、SIRT1和PGC-1ɑ蛋白表达高于HDP组(P<0.05),胎盘组织和肾脏组织结构异常程度减轻;AMPK抑制剂Compound C减弱了SFN对HDP大鼠血压、肾损伤和妊娠结局的保护作用。结论 SFN通过激活AMPK/SIRT1/PGC-1ɑ信号通路改善HDP大鼠妊娠结局。

苦参碱对缺血性脑卒中大鼠神经炎症的影响

目的探究苦参碱调节高迁移率族蛋白B1(HMGB1)-晚期糖基化终末产物受体(RAGE)信号通路对缺血性脑卒中(IS)大鼠神经炎症的影响。方法将75只SD大鼠随机分为模型组、苦参碱低剂量组(10 mg/kg)、苦参碱高剂量组(20 mg/kg)、苦参碱高剂量+晚期糖基化终末产物(AGE)血清蛋白组(20 mg/kg苦参碱+100 mg/kg AGE血清蛋白)和假手术组,每组15只。采用线栓法构建大鼠大脑中动脉闭塞模型。用Longa评分评估大鼠神经功能缺损;氯化三苯四氮唑染色检测脑梗死情况;苏木精-伊红染色观察海马组织病理变化;酶联免疫吸附测定海马组织白细胞介素(IL)1β、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。Western blot检测海马组织HMGB1、RAGE蛋白表达。结果苦参碱高剂量组Longa评分、脑梗死面积、IL-1β、IL-6、TNF-α、HMGB1和RAGE蛋白表达明显低于模型组和苦参碱低剂量组(P<0.05)。苦参碱高剂量+AGE血清蛋白组Longa评分、脑梗死面积、IL-1β、IL-6、TNF-α、RAGE蛋白表达明显高于苦参碱高剂量组[(2.93±0.30)分vs(1.10±0.12)分,(38.18±4.04)%vs(15.52±1.74)%,(78.57±8.33)pg/ml vs(39.27±4.76)pg/ml,(203.14±24.39)pg/ml vs(92.45±11.23)pg/ml,(243.53±26.81)pg/ml vs(150.49±18.79)pg/ml,0.73±0.07 vs 0.44±0.04,P<0.05]。结论苦参碱可能通过抑制HMGB1-RAGE信号通路减轻IS大鼠的神经炎症。

蒲公英提取物对脑出血大鼠的治疗作用及机制研究

目的研究蒲公英提取物对自发性脑出血(ICH)大鼠的治疗作用及核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶1(HO-1)信号通路的影响。方法通过脑定位注射Ⅳ型胶原酶诱导建立48只ICH大鼠模型,随机分为模型组、蒲公英提取物组、Nrf2抑制剂(ML385)组和蒲公英提取物+ML385组,每组12只,另选12只大鼠作为假手术组。以药物分组处理后,进行大鼠神经功能损伤评分;检测大鼠血脑屏障功能、海马神经元细胞凋亡率、血清环氧化酶2(COX-2)、白细胞介素6(IL-6)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及脑组织过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、活性氧、丙二醛水平和Nrf2/HO-1信号通路蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠神经功能缺损评分、伊文思蓝渗出量、海马神经元细胞凋亡率、血清COX-2、IL-6、iNOS水平、脑组织活性氧、丙二醛水平显著升高(P<0.05),CAT、GSH-Px、Nrf2、HO-1蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。与蒲公英提取物组比较,蒲公英提取物+ML385组大鼠神经功能评分[(2.54±0.23)分vs(1.43±0.19)分]、伊文思蓝渗出量[(22.15±3.61)ng/mg vs(6.54±1.24)ng/mg]、海马神经元细胞凋亡率[(31.97±5.26)%vs(3.51±0.94)%]、血清COX-2[(5.82±1.16)ng/ml vs(1.34±0.42)ng/ml]、IL-6[(1.47±0.31)ng/ml vs(0.43±0.14)ng/ml]、iNOS[(59.91±10.36)U/ml vs(13.94±3.78)U/ml]、脑组织活性氧[(4.70±0.45)U/kg vs(1.70±0.51)U/kg]、丙二醛水平[(3.72±0.52)nmol/mg vs(1.17±0.34)nmol/mg]显著升高(P<0.05),CAT[(2.54±0.59)U/mg vs(5.68±1.04)U/mg]、GSH-Px[(8.01±0.86)U/mg vs(16.97±3.03)U/mg]、Nrf2(0.67±0.13 vs 1.07±0.19)、HO-1(0.55±0.07 vs 0.86±0.10)蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论蒲公英提取物可通过激活Nrf2/HO-1信号通路增强ICH大鼠抗氧化活性,阻止炎症和氧化应激反应进展,抑制海马神经元细胞凋亡,修复血脑屏障功能,改善大鼠神经功能。

基质细胞衍生因子-1/CXC族细胞因子受体4轴在缺氧预处理骨髓间充质干细胞移植促进Sprague-Dawley大鼠急性心肌梗死心脏功能恢复中的作用

目的观察缺氧预处理的同种异体骨髓间充质干细胞(MSCs)移植入受体后,基质细胞衍生因子(SDF)-1/CXC族细胞因子受体(CXCR)4轴在促进Sprague-Dawley(SD)大鼠急性心肌梗死(AMI)心脏功能恢复中的作用。方法对SD大鼠的MSCs进行体外培养、鉴定,并行缺氧预处理。128只SD大鼠被随机分入MSCs移植组(MSCs组)、缺氧预处理MSCs移植组(预处理MSCs组)、AMI组、假手术组,每组32只。MSCs组、预处理MSCs组和AMI组大鼠均予冠状动脉左前降支结扎造成AMI 10min后,预处理MSCs组大鼠在梗死区域、梗死区边缘局部共注射5×105/\mL经缺氧预处理的MSCs,MSCs组大鼠注射5×105/\mL MSCs,AMI组大鼠注射相同容量的0.9%氯化钠溶液。假手术组大鼠仅行开胸处理。造模前和造模后28d采用超声心动图测量左心室舒张末期内径(LVDd)、左心室收缩末期内径(LVDs)、左心室射血分数(LVEF)3项反映心脏功能的指标。分别于造模后1、7、14和28d每组各处死8只大鼠取其心脏组织行免疫组织化学、常规病理染色,计算心肌梗死面积百分比、梗死区心室壁厚度和心室肌内微血管密度(MVD)。采用实时定量PCR和免疫激光共聚焦定性、定量测定各组心肌组织内SDF-1和CXCR4的表达。结果造模后28d时超声心动图检测结果显示,预处理MSCs组、MSCs组、AMI组的LVDd和LVDs均显著长于假手术组(P值均<0.05),LVEF均显著低于假手术组(P值均<0.05);预处理MSCs组、MSCs组的LVDd和LVDs均显著短于AMI组(P值均<0.05),LVEF均显著高于AMI组(P值均<0.05);预处理MSCs组的LVDd和LVDs均显著短于MSCs组(P值均<0.05),LVEF均显著高于MSCs组(P<0.05)。造模后28d,预处理MSCs组、MSCs组的心肌梗死面积百分比均显著小于AMI组(P值均<0.05),预处理MSCs组显著小于MSCs组(P<0.05);预处理MSCs组、MSCs组左心室前壁厚度均显著厚于AMI组(P值均<0.05),预处理MSCs组显著厚于MSCs组(P<0.05)。造模后28d,预处理MSCs组、MSCs组、AMI组心肌梗死区的MVD定量和AMI组梗死边缘区的MVD定量均显著低于假手术组(P值均<0.05),预处理MSCs组、MSCs组梗死边缘区的MVD定量均显著高于假手术组(P值均<0.05),预处理MSCs组、MSCs组心肌梗死区和梗死边缘区的MVD定量均显著高于AMI组(P值均<0.05),预处理MSCs组心肌梗死区和梗死边缘区的MVD定量均显著高于MSCs组(P值均<0.05)。造模后1、7、14和28d,预处理MSCs组、MSCs组和AMI组的SDF-1和CXCR4蛋白荧光强度均显著高于假手术组(P值均<0.05),预处理MSCs组、MSCs组均显著高于AMI组(P值均<0.05),预处理MSCs组均显著高于MSCs组(P值均<0.05)。结论SD大鼠AMI区局部注射缺氧预处理的MSCs或MSCs后可使SDF-1和CRCR4在受损组织局部表达上调,同时心功能得到改善。SDF-1/CRCR4轴在心肌梗死区局部表达上调可能是缺氧预处理MSCs或MSCs移植后改善心脏功能的重要途径之一。

基于超高效液相色谱-质谱联用技术的慢性肾脏病骨代谢异常大鼠血清代谢组学研究

目的 通过超高效液相色谱-质谱(UHPLC-MS)联用技术探索慢性肾脏病骨代谢异常(CKD-BD)大鼠血清代谢组学变化。方法 该研究于2021年1月至2022年4月进行,选择16只8周龄SPF级SD雄性大鼠经过1周适应性喂养后,采用随机数字表法分为两组,每组8只。健康对照(NC)组:使用普通大鼠饲料喂养90 d;CKD-BD组:采用高磷高腺嘌呤饲料喂养60 d之后更换高磷饲料喂养30 d后处死,并通过生化检测及骨形态计量学方法对模型进行验证。造模成功后通过UHPLC-MS比较CKD-BD组大鼠与NC组大鼠血清代谢产物变化,通过多元统计分析等方法鉴定两组间差异代谢物,并通过生物信息学方法对差异代谢产物进行功能注释。结果 与NC组大鼠相比,CKD-BD组大鼠血肌酐、血磷显著升高,血钙显著降低(P<0.01)。骨形态计量学检测NC组大鼠骨矿化沉积率(MAR)为(1.90±0.61)μm/d,CKD-BD组大鼠MAR为(2.80±0.73)μm/d,差异有统计学意义(P<0.05)。NC组大鼠骨形成率/骨体积(BFR/BV)为(0.41±0.20)%/d,CKD-BD组大鼠BFR/BV为(1.25±0.41)%/d,差异有统计学意义(P<0.05)。代谢组学检测结果提示,与NC组相比,CKD-BD组糖基磷脂酰肌醇锚定蛋白合成等通路上调。自噬、胆汁酸合成分泌、胆固醇代谢、牛磺酸和次级牛磺酸代谢、甘油磷脂代谢等通路下调(P<0.05)。结论 通过UHPLC-MS技术比较CKD-BD大鼠与正常大鼠血清代谢产物,发现CKD疾病状态下血清代谢产物发生变化,CKD-BD组糖基磷脂酰肌醇锚定蛋白合成通路上调,与自噬相关的代谢通路下调,这些可能参与了CKD-BD发生。

Sprague-Dawley大鼠肺发育中miR-431的连续表达研究

目的探讨miR-431在肺发育形态学中的潜在作用。方法根据肺发育分期,选择Sprague-Dawley大鼠孕16 d(E16)、孕19 d(E19)、孕21 d(E21)、生后1 d(P1)、生后3 d(P3)、生后7 d(P7)、生后14 d(P14)及生后10周(P10周)成年大鼠的肺组织作为观察点,利用苏木精-伊红染色(HE)及透射电镜方法进行肺组织形态学观察;利用荧光原位杂交和实时荧光定量PCR技术检测肺发育关键时期(E19、E21及P3)肺组织中miR-431的表达情况。结果 E19组胎肺组织发现关键事件板层小体及Ⅱ型肺泡上皮细胞的出现;随胎龄增加板层小体数量增加,并出现聚集与排出;生后肺泡形成迅速发生,间质变薄,微血管系统逐渐成熟。荧光原位杂交及实时荧光定量PCR结果均显示随着胎龄的增加,miR-431的表达量逐渐降低(P<0.05)。结论获得系统而连续的肺发育形态学资料。miR-431在肺发育过程中可能起重要的负向调控作用,为后续进一步研究肺发育及相关性疾病的机制提供基础和方向。

CCl4诱导的肝纤维化大鼠模型肝小叶内卵圆细胞总体积与轮廓数密度变化的体视学分析

目的 定量研究CCl4诱导的肝纤维化大鼠肝小叶内卵圆细胞(HOC)总体积和轮廓数密度的变化。方法 将11只雄性健康SD大鼠随机分为对照组(n=5)、肝纤维化组(n=6),每周2次皮下注射CCl4与橄榄油混悬液,每次3 mL/kg。在肝纤维化造模5周后取材,从每只大鼠肝脏随机抽选5个大小约1 mm3的肝组织块分别制作1张Epon812环氧树脂包埋超薄切片,运用体视学方法结合透射电子显微镜技术,对大鼠肝小叶内的HOC总体积和轮廓数密度进行定量研究,另从每只大鼠剩余肝脏等距随机抽选4个2 mm厚的肝组织块并分别制作2张石蜡包埋的Masson染色切片,按照肝纤维化Metavir分期标准定性评估每只大鼠的肝纤维化程度。计量资料两组间比较采用成组t检验。结果 体视学定量研究显示,对照组肝小叶内HOC总体积为(15.40±7.63) mm3,肝纤维化组肝小叶内HOC总体积为(146.80±114.00) mm3,与对照组比较,肝纤维化组大鼠肝小叶内HOC总体积显著增加了8.53倍(t=-2.551,P=0.031);对照组肝小叶内HOC轮廓数密度为(56.20±40.40),肝纤维化组肝小叶内HOC轮廓数密度为(566.50±317.00),与对照组比较,肝纤维化组大鼠肝小叶内轮廓数密度显著增加了9.08倍(t=-3.539,P=0.006);定性观察研究结果显示,肝纤维化大鼠肝纤维化分期按照Metavir评分标准达到Ⅱ~Ⅲ期,大鼠窦周隙内肝星状细胞增生部位周围伴随着HOC的大量增生。结论 CCl4诱导肝纤维化大鼠肝小叶内HOC显著增生。

探究电针廉泉穴对脑卒中后吞咽困难大鼠神经功能缺损的影响

目的探讨电针廉泉穴对脑卒中后吞咽困难(PSD)大鼠神经功能缺损的影响及潜在对瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)信号通路的调节机制作用。方法选用SPF级SD雄性大鼠60只,随机分为正常组12只(仅浅插栓线,未导致脑内动脉闭塞),余48只制作PSD模型,将造模成功的36只大鼠随机分为模型组、治疗组和治疗+咖啡酸组,每组12只。记录大鼠吞咽潜伏期和吞咽次数,生物信号采集器检测舌下神经放电、舌肌阈强度和收缩幅度,酶联免疫吸附测定血清P物质含量,甲苯胺蓝染色检测舌下神经核尼氏体数目,免疫组织化学检测舌下神经核TRPV1、五羟色胺(5-HT)、磷酸化p38、神经元型一氧化氮合酶(nNOS)蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组大鼠吞咽潜伏期、吞咽次数、舌下神经放电积分面积、舌肌收缩幅度、血清P物质含量、舌下神经核尼氏体数目、TRPV1及5-HT蛋白表达水平下降,舌肌阈强度和舌下神经核磷酸化p38、nNOS蛋白表达水平增加(P<0.05);与模型组比较,治疗组大鼠舌肌单收缩幅度、舌肌强直收缩幅度、血清P物质含量、舌下神经核尼氏体数目、TRPV1及5-HT蛋白表达水平增加[2.36±0.26 vs 1.77±0.22、3.46±0.36 vs 2.15±0.18、(3.92±0.38)ng/ml vs(1.69±0.17)ng/ml、(33.60±3.65)个vs(24.60±2.34)个、(19.85±2.11)%vs(9.79±1.07)%、(22.43±2.34)%vs(10.85±1.13)%,P<0.05]。结论电针廉泉穴可能通过激活TRPV1信号通路改善PSD大鼠神经功能缺损。

Anle138b对oAβ_(1-42)诱导大鼠海马神经元线粒体功能损伤的影响

目的探究Anle138b对慢性β淀粉样蛋白(Aβ)诱导的海马神经元线粒体功能损伤的影响。方法取出生24 h以内的SD乳鼠,原代培养海马神经元,待细胞成熟将其分为对照组(不进行任何处理)、oAβ_(1-42)组(100 nmol/L oAβ_(1-42)处理7 d)、oAβ_(1-42)+Anle138b组(100 nmol/L oAβ_(1-42)+100 nmol/L Anle138b共处理7 d)、Anle138b组(100 nmol/L Anle138b处理7 d)。各组处理结束后,应用流式细胞术检测活性氧(ROS)和线粒体膜电位(Δψm)阳性细胞的变化。结果析因设计的方差分析显示,oAβ_(1-42)和Anle138b的主效应明显(F_(oAβ1-42)=14.149、38.209,F_(Anle138b)=1.942、24.871,P<0.01),oAβ_(1-42)和Anle138b之间有交互性作用(F_(交互)=18.425、21.904,P<0.01)。单独效应分析显示,用oAβ_(1-42)处理时,Anle138b的处理效应明显(F=16.483、19.148,P<0.01);不用Anle138b处理时,oAβ_(1-42)的处理效应明显(F=14.149、38.209,P<0.01)。结论Anle138b可以减轻oAβ_(1-42)引起的海马神经元氧化应激和线粒体损伤,抑制oAβ_(1-42)对海马神经元的损伤。

亚甲基蓝改善脑炎性衰老大鼠认知功能及机制探索

目的 探讨亚甲基蓝(MB)改善脑炎性衰老大鼠认知功能及机制。方法 选用健康12月龄SD大鼠38只,随机分为健康对照组8只,脂多糖组、MB溶剂组和MB组各10只。建立脂多糖诱导的脑慢性炎性衰老模型,MB经皮下缓释泵注射1周[0.5 mg/(kg·d)]。采用T型迷宫实验和新物体识别实验测试大鼠的空间学习记忆;使用免疫荧光染色检测大鼠海马CA1区小胶质细胞和星形胶质细胞的激活;应用酶联免疫吸附测定试剂盒检测炎性因子白细胞介素(IL)1β和IL-6的释放;检测海马CA1区神经元死亡数量。结果 脂多糖组和MB溶剂组探索新、旧物体时间比较无显著差异(P>0.05),MB组探索新物体时间显著多于旧物体[(22.50±4.32)s vs(11.60±3.01)s,P=0.000]。与健康对照组比较,脂多糖组和MB溶剂组新臂交替选择率、神经元核抗原(NeuN)表达显著降低,离子钙接头蛋白1(Iba-1)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达和IL-1β、IL-6表达显著升高(P<0.05)。与MB溶剂组比较,MB组新臂交替选择率、NeuN表达显著升高,Iba-1、GFAP表达和IL-1β、IL-6表达显著降低(P<0.05)。结论MB皮下给药能显著抑制脂多糖诱导的脑炎性衰老对空间学习记忆的损害,其机制可能与MB对炎性小胶质细胞的抑制以及海马体神经元保护紧密相关。

松果菊苷对雨蛙素诱导的急性胰腺炎大鼠模型胰腺及肝损伤的影响与机制

目的通过建立急性胰腺炎(AP)大鼠模型,研究松果菊苷(ECH)对雨蛙素诱导的AP大鼠模型胰腺及肝损伤的改善作用及机制。方法24只SD大鼠随机分为空白组(Con组)、对照组(Con+ECH组)、AP组和AP+ECH组4组,每组各6只。AP模型构建前7 d给予10 mg/kg ECH腹腔注射,雨蛙素末次给药24 h后,腹主动脉取血,分离血清行ALT、AST、乳酸脱氢酶(LDH)、GGT、ALP、Alb、TBil、胆碱酯酶(ChE)、血淀粉酶(Amy)、脂肪酶(LPS)等生化检测;HE染色检测胰腺和肝组织病理学改变;透射电镜观察胰腺和肝组织微观结构改变;ELISA检测肝组织匀浆中IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10水平;免疫组化分析胰腺和肝组织中TNF-α和p-p65 NF-κB水平;Western Blot检测肝组织中NF-κB通路蛋白表达水平。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用SNK-q或Dunnett’s T3检验。结果与Con组相比,AP组大鼠ALT、AST、GGT、LDH、ALP、TBil、AMY、LPS指标均明显增高(P值均<0.01);肝组织匀浆液IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α水平均增加(P值均<0.01)。ECH干预降低AP大鼠ALT、AST、GGT、LDH、ALP、TBil、AMY、LPS水平,并能抑制IL-1β、IL-6、TNF-α的分泌。HE染色观察可见ECH干预后胰腺组织中腺泡细胞空泡变性和炎性细胞浸润较AP组减轻,肝细胞坏死较AP组减轻。透射电镜检查镜下见ECH干预后肝和胰腺细胞内线粒体肿胀程度较AP组减轻。ECH干预后能部分逆转AP大鼠胰腺和肝组织中p-p65 NF-κB、TNF-α的表达增加。此外,AP大鼠肝组织中MyD88、p-IκBα、p-IKKα、p-p65表达上调,而ECH干预后能部分逆转。结论松果菊苷可通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB途径来改善AP诱发的胰腺和肝损伤。

基于PI3K/AKT/mTOR信号通路探讨大黄煎剂对轻微型肝性脑病大鼠脑组织炎症损伤的保护机制

目的 探讨大黄煎剂保留灌肠对轻微型肝性脑病(MHE)大鼠模型脑组织炎症损伤的改善作用及可能机制。方法 60只SD雄性大鼠按完全随机方法分为空白组(CON组,n=6)和慢性肝硬化造模组(n=54)。12周后慢性肝硬化造模成功并经Morris水迷宫测试确认符合MHE模型大鼠40只,采用完全随机方法分为模型组(MOD组,n=8)、乳果糖组(LT组,n=8)、大黄煎剂低剂量组(RD1组,n=8)、大黄煎剂中剂量组(RD2组,n=8)和大黄煎剂高剂量组(RD3组,n=8)。其中CON组和MOD组大鼠用生理盐水保留灌肠,2 mL/只,1次/d;LT组大鼠用乳果糖按22.5%剂量保留灌肠,2 mL/只,1次/d;RD1组、RD2组、RD3组大鼠分别用大黄煎剂按2.5、5.0、7.5 g/kg三种剂量保留灌肠,2 mL/只,1次/d。所有大鼠治疗10 d后,进行Morris水迷宫测试,分析大鼠的空间学习记忆能力。分析大鼠行为学状态;检测大鼠血清ALT、AST、IL-1β、IL-6、TNF-α和血氨水平;观察大鼠肝组织和脑组织病理学变化;检测大鼠脑组织磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的mRNA和蛋白表达水平。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果 与MOD组比较,RD1组、RD2组和RD3组大鼠逃避潜伏期时间显著缩短(P值均<0.01),ALT、AST、IL-1β、IL-6、TNF-α和血氨水平明显降低(P值均<0.05),肝细胞、脑细胞变性、坏死和炎症程度减轻,脑组织PI3K、AKT、mTOR的mRNA和蛋白表达水平均降低(P值均<0.05),且RD3组治疗效果优于RD1组和RD2组。结论 大黄煎剂保留灌肠能够改善MHE大鼠认知功能及脑组织炎症损伤,其作用机制可能与调控PI3K/AKT/mTOR信号通路有关。