电针预处理对切口痛大鼠中脑导水管周围灰质5-HT_(7)受体表达的影响

目的:建立足趾部切口痛大鼠模型,探讨重复电针预处理对切口痛大鼠镇痛效果及其对中脑导水管周围灰质(periaqueductal gray,PAG)5-HT_(7)受体(5-HT_(7)R)表达的影响。方法:40只成年雄性SD大鼠按随机数字表法均等分为对照组(Control,Con组)、切口痛模型组(Incision pain,IP组)、正常+电针预处理组(Control+Electroacupuncture,Con+EA组)、模型+电针预处理组(Incision Pain+Electroacupuncture,IP+EA组)。IP组和IP+EA组大鼠右足趾部行疼痛造模,且造模前,Con+EA组和IP+EA组大鼠行右侧“足三里”穴和“环跳”穴电针刺激(2/10 Hz疏密波,刺激强度数值为1档,每日1次30 min),连续5天。于第1次电针预处理前2 h(T1)、术前2 h(T2)、术后4 h(T3)、术后24 h(T4)测定大鼠机械刺激缩足反射阈值(mechanical withdrawal threshold,MWT)和热缩足潜伏期(thermal withdrawal latency,TWL);酶联免疫吸附法检测脑脊液中5-HT浓度;免疫组化和免疫荧光方法分别检测大鼠PAG中c-Fos和5-HT_(7)R蛋白表达情况。结果:与Con组比较,IP组大鼠T3、T4时间点MWT和TWL均明显降低,脑脊液中5-HT浓度增加,PAG中c-Fos蛋白和5-HT_(7)R表达明显上调(P<0.05);Con+EA组和IP+EA组脑脊液中5-HT含量和PAG中5-HT_(7)R表达均上升(P<0.05)。与IP组相比,IP+EA组大鼠T3、T4时间点的MWT和TWL显著升高,PAG中c-Fos蛋白表达减少,5-HT_(7)R蛋白表达增加(P<0.05)。结论:电针预处理可能通过上调PAG中5-HT_(7)R蛋白表达发挥镇痛作用。

糖尿病大鼠中脑导水管周围灰质nNoS免疫阳性神经元的变化

糖尿病患者常并发慢性周围神经病变，表现为感觉异常。一氧化氮（NO）缺乏导致周围神经供血不足以及由此引起的感觉传导异常可能与之有关。但对于中枢神经是否参与感觉障碍？与糖尿病时感觉传导异常的关系如何，仍有许多未知。中脑导水管周围灰质（PAG）是内源性镇痛系统的关键结构，其背外侧区富含神经元型一氧化氮合酶（nNOS）神经元，参与感觉信息的传递，并介导内脏伤害性刺激的传导。本实验观察糖尿病大鼠PAGnNOS免疫阳性神经元的变化，试图了解PAG内NO是否参与糖尿病时感觉障碍的发生。

褪黑素对大鼠中脑导水管周围灰质内阿片肽释放的影响

本文采用推挽灌流技术、放射免疫测定法 ,观察褪黑素 (melatonin ,MEL)对大鼠中脑导水管周围灰质(PAG)推挽灌流液中 β 内啡肽 (β Ep)、亮氨酸脑啡肽 (L EK)含量的影响 ,以探讨MEL镇痛效应的中枢机制。结果显示 ,给药组大鼠腹腔注射 (ip)MEL 110mg/kg后 30～ 5 0min ,PAG灌流液中β Ep含量显著增加 ,而L EK含量未见显著变化 ;在推挽灌流同时用 5 0℃热水刺激甩尾法测定痛阈 ,可见ipMEL 110mg/kg后 40min ,大鼠痛阈显著升高。上述结果提示 ,MEL可促进PAG内 β Ep的释放 ,这可能是其发挥镇痛效应的中枢机制之一。

外周炎症性疼痛刺激诱导大鼠中脑导水管周围灰质胶质细胞激活及细胞因子的表达

目的观察完全弗氏佐剂(CFA)外周刺激后,大鼠中脑导水管周围灰质(PAG)中胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、小胶质细胞标记物(Iba)以及细胞因子IL-β、TNF-α的表达变化。方法结合行为学检测,反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)、Western blotting以及免疫组织化学的方法,观察了大鼠后爪注射CFA后疼痛感觉的变化,并检测了PAG中上述标记物和细胞因子在基因水平和蛋白水平的表达变化。结果注射CFA后,注射侧后爪出现热痛过敏和机械性触诱发痛;大鼠的热痛过敏14d基本恢复正常,但机械性触诱发痛持续到21d时仍未恢复正常;星形胶质细胞标记物GFAP在急性期和慢性期有显著增加;小胶质细胞的标记物CD14、细胞因子(IL-β、TNF-α)在急性期、亚急性期和慢性期均有增加。结论小胶质细胞的激活可能与炎性疼痛的起始相关,而星形胶质细胞可能与疼痛的维持相关,细胞因子表达的增加可能对痛觉过敏的发生起重要作用。

大鼠中脑导水管周围灰质微量注射孤啡肽对痛和针刺镇痛的影响

孤啡肽（orphaninFQ，OFQ）是新近发现的神经肽，结构与内阿片肽相似，但作用明显不同。本文采用脑核团内微量注射方法，在大鼠电刺激甩尾测痛模型上，观察OFQ在中脑导水管周围灰质（PAG）内对痛和针刺镇痛的影响。结果表明：PAG内微量注射OFQ可使大鼠痛阈降低，并明显对抗针刺镇痛；另外还发现，OFQ在PAG内还可以对抗μ受体激动剂羟甲芬太尼加强针刺镇痛的效应。本文结果提示，OFQ在PAG内加强动物的痛感受，对抗针刺镇痛。

抗阿片肽血清对大鼠中脑导水管周围灰质内催产素镇痛作用的影响

目的 :探讨中脑导水管周围灰质 (PAG)内催产素 (OT)与内源性脑啡肽、β 内啡肽在痛觉调制中的关系。方法 :以钾离子透入法引起大鼠甩尾反应的电流强度 (mA)为痛行为反应的指标 ,观察向PAG内注入抗甲 脑啡肽血清、抗β 内啡肽血清和OT对动物痛阈的影响。结果 :PAG内注入抗甲 脑啡肽血清、抗 β 内啡肽血清后 ,使大鼠痛阈明显降低 ;但在注射OT前预先注射抗甲 脑啡肽血清或抗 β 内啡肽血清不能完全阻断OT的镇痛效应。结论 :PAG内OT在痛觉调制中的作用不完全依赖于PAG内的内源性脑啡肽和 β

地佐辛预先给药对大鼠中脑导水管周围灰质c-fos表达的影响

目的:观察地佐辛预先给药对切口痛大鼠中脑导水管周围灰质c-fos蛋白表达的影响。方法:成年雄性Wistar大鼠,36只,随机分为3组(n=12),对照组(C组)仅给予麻醉而不手术;生理盐水组(S组):切口疼痛模型手术前15 min尾静脉注射0.9%氯化钠溶液2 ml;地佐辛组(D组):切口疼痛模型手术前15 min尾静脉注射地佐辛3 mg/kg 2 ml。于术前24 h(T_0)、术后2 h、6 h、24 h(T_(1-3))时测定机械缩足反射阈值(mechanical withdrawal threshold,MWT)和累积疼痛评分,T3时痛阈测定后处死大鼠,取大鼠全脑,采用免疫组化方法检测中脑导水管周围灰质神经元c-fos蛋白表达。结果:与C组相比较,S组和D组T1-3时MWT明显降低,累积疼痛评分升高,中脑导水管周围灰质神经元c-fos蛋白免疫阳性细胞数增高(P<0.05);与S组比较,D组T1-3时MWT升高,累积疼痛评分降低,中脑导水管周围灰质神经元c-fos蛋白免疫阳性细胞数下降(P<0.01)。结论:地佐辛预先给药可抑制中脑导水管周围灰质神经元c-fos蛋白表达,减轻大鼠切口痛。

高乌甲素在大鼠中脑导水管周围灰质的镇痛机制

目的观察高乌甲素(LA)能否通过上调中脑导水管周围灰质(PAG)中P2X3受体表达和功能,对烧伤疼痛产生镇痛作用。方法建立Ⅱ°烧伤大鼠模型,给予腹腔注射LA 6mg/kg·24h,Von Frey测痛仪检测机械痛阈值(MWT);Western blot检测P2X3受体蛋白表达;观察干预P2X3受体蛋白的表达和功能后对LA镇痛作用的影响。结果大鼠烧伤后MWT下降(P<0.001),经LA治疗后MWT上升(P<0.001),PAG中P2X3受体蛋白表达上调(P<0.001)。下调P2X3受体蛋白表达后减弱LA镇痛作用;P2X3受体激动剂和拮抗剂分别增强和减弱LA的镇痛作用。结论 LA通过上调PAG中P2X3受体表达和增强P2X3受体功能,促进机体内源性镇痛,对烧伤疼痛大鼠产生镇痛作用。

降钙素基因相关肽受体及其活性修饰蛋白mRNAs在大鼠中脑导水管周围灰质的表达

目的 观察降钙素基因相关肽(CGRP)、降钙素受体样受体(CRLR)、孤儿受体RDC 1(RDC 1)和受体 活性修饰蛋白(RAMPs)等,在正常大鼠中脑导水管周围灰质(PAG)的表达。 方法 用实时定量逆转录聚合酶链 式反应(RT PCR)技术,以大鼠β actin为内参,分别记录CGRP、CRLR、RAMP1、RAMP2、RAMP3和RDC 1mRNAsPCR 产物的CT值,计算每一样品对应其内参的相对含量。 结果 大鼠PAG区域,脑组织CGRP、CRLR、RAMP1和 RAMP2mRNAs均出现特异性DNA扩增产物。其中CGRP和RAMP1mRNAs表达水平较高,CRLRmRNA次之, RAMP2mRNA较弱;而RAMP3和RDC 1未出现特异性DNA扩增产物。 结论 大鼠PAG区域脑组织存在CGRP, CRLR,RAMP1和RAMP2mRNAs的特异性表达;它们共同参与生理过程的调节。

大鼠中脑导水管周围灰质内GABA与阿片μ受体共存能神经元的观察

目的 观察中脑导水管周围灰质 (PAG)内是否存在γ-氨基丁酸 (GABA)与阿片μ受体 (MOR)共存神经元 .方法免疫荧光组织化学双重染色技术 ,染色结果在激光扫描共聚焦显微镜下观察 .结果 GABA阳性神经元主要见于 PAG中、尾段内侧区和腹外侧区 ,阳性神经元多散在分布并多为小型 ,中型者较少 ;散在分布的 MOR阳性神经元主要见于 PAG中、尾段的腹外侧区 ,多为中、小型神经元 ;散在并同时呈GABA和 MOR双重染色阳性的中、小型神经元主要见于PAG中、尾段的腹外侧区 .结论 PAG内有 GABA与 MOR共存的神经元 ,提示内源性阿片物质对 PAG内的

氟桂利嗪对偏头痛模型大鼠中脑导水管周围灰质区NF-κB蛋白表达的影响

目的:探讨氟桂利嗪治疗偏头痛的可能作用机制。方法:应用大鼠电刺激偏头痛模型,观察给予氟桂利嗪后中脑导水管周围灰质NF-κB蛋白表达的变化。结果:空白组、假手术组、电刺激组,氟桂利嗪组、生理盐水对照组每张切片的NF-κB阳性神经元数分别为111.7±15.7、112.9±10.7、508.7±30.8、209.2±18.5、502.7±33.1。结论:电刺激大鼠上矢状窦区硬脑膜后,在中脑导水管周围灰质区出现了NF-κB细胞的激活,氟桂利嗪使其表达降低。

一氧化氮合酶神经元在大鼠中脑导水管周围灰质和中缝核簇内的定位研究

研究用一氧化氮合酶组织化学方法对大鼠中脑导水管周围灰质和中缝核簇一氧化氮合酶阳性神经元的精确定位分布进行了系统的观察。一氧化氮合酶阳性神经元胞体和纤维主要密集分布于中脑导水管周围灰质吻段的背外侧核以及中段和尾段的腹外侧核 ,中缝背核以及线形核内也观察到大量的一氧化氮合酶阳性胞体和纤维 ,在中缝正中核和中缝隐核内可见中等量的一氧化氮合酶阳性神经元胞体和纤维 。

伤害性刺激、电针镇痛后大鼠中脑导水管周围灰质生长抑素mRNA的表达

目的：研究生长抑素（ＳＯＭ）镇痛效果的作用机制。方法：用原位杂交结合计算机图像分析，观察正常大鼠中脑导水管周围灰质（ＰＡＧ）内ＳＯＭ神经元的基因表达；伤害性刺激、单纯针刺和电针镇痛（ＥＡ）对ＰＡＧ内ＳＯＭ多肽合成的调控，以探讨伤害性刺激和电针对ＰＡＧ内ＳＯＭ在基因转录水平的激活影响。结果：正常情况下ＰＡＧ内有一定的ＳＯＭｍＲＮＡ表达，伤害性刺激和单纯电针后ＳＯＭｍＲＮＡ表达增强，ＥＡ后进一步增强。结论：（１）ＳＯＭ可能参与痛觉调制；（２）ＳＯＭ可能参与ＥＡ。

青藤碱对偏头痛模型大鼠中脑导水管周围灰质区NF-κB和COX-2表达的影响

目的研究青藤碱对偏头痛大鼠中脑导水管周围灰质区(PAG)核转录因子-κB(NF-κB)和环氧化酶-2(COX-2)表达的影响,探讨青藤碱治疗偏头痛的可能机制。方法 60只健康SD大鼠随机分成对照组、模型组、尼美舒利组、青藤碱低、中、高剂量组,复制硝酸甘油型偏头痛大鼠。尼美舒利为阳性对照组,在制模、药物干预后,免疫组化检测大鼠PAG区NF-κB和COX-2阳性表达。结果 1与对照组比较,模型组PAG区NF-κB、COX-2表达明显增多,差异有统计学意义(P<0.01);2与模型组比较,尼美舒利组和青藤碱高剂量组PAG区NF-κB、COX-2表达明显减少,差异有统计学意义(P<0.01);3与尼美舒利组比较,青藤碱高剂量组PAG区NF-κB、COX-2表达无明显差异(P>0.05)。结论 NF-κB、COX-2参与了偏头痛发病过程;青藤碱能较好地缓解硝酸甘油型偏头痛大鼠行为学变化,推测其作用机制可能是通过抑制PAG区NF-κB和COX-2的表达。

吗啡镇痛耐受大鼠中脑导水管周围灰质μ受体和δ受体协同表达下调

目的:测定吗啡镇痛耐受大鼠中脑导水管周围灰质(PAG)中μ受体和δ受体mRNA和蛋白表达的变化,以进一步探索吗啡耐受的发生机制。方法:健康成年♂Wistar大鼠32只,随机平均分为生理盐水对照组(NS组,n=16)和吗啡组(MS组,n=16)。采用盲法进行给药和疼痛行为测定。每天早、晚两次皮下注射(sc)药物并于上午注射前、后30 min测定大鼠的热甩尾潜伏期(TFL)作为痛阈指标。NS组和MS组分别sc生理盐水1 ml·kg-1和吗啡10 mg·kg-1,连续注射7 d,d8早晨各组分别取8只处死,剩余大鼠(分别记为NSN组和MSN组)d8早、晚两次sc纳洛酮0.4 mg·kg-1,并在d9处死。以TFL恢复至基础水平作为出现吗啡耐受的标准。采用免疫组织化学染色方法和实时定量PCR法分别检测PAG中μ和δ受体的蛋白表达和mRNA表达。结果:观察期两组大鼠的体重增加量在组间差异无显著性。两组大鼠每天注射前测定的TFL差异无显著性。MS组在d1 sc吗啡后TFL明显升高(P<0.05);在d2应用吗啡后,TFL升高达到最高值,且明显高于d1用药后水平(P<0.05),随后该组应用吗啡后的TFL逐渐降低,直至d7用药后TFL降至基础水平(P>0.05)。应用纳洛酮后,MSN亚组的TFL与NS组、NSN亚组以及基础值相比差异无显著性。连续应用吗啡7 d后,MS组PAG中μ和δ受体的蛋白表达和mRNA表达均较NS组显著降低(P<0.05)。结论:PAG中μ受体和δ受体共同参与了吗啡耐受机制,而且吗啡耐受大鼠PAG中μ受体和δ受体发生了协同表达下调。

大鼠中脑导水管周围灰质向三叉神经脊束核尾侧亚核的5-羟色胺能投射

大鼠中脑导水管周围灰质(PAG)向三又神经脊束核尾侧亚核(Sp 5 C)投射的起源细胞在其吻、中、尾三个部分的分布不同,且由尾段向吻段有从腹侧向背侧移行的趋势。尾段的HRP逆标细胞主要位于PAG的腹外侧区、内侧区腹侧部;中段的标记细胞较多,主要见于腹外侧区、背侧区和背外侧区腹侧部,尚可见一些顺行标记的终末;吻段的标记细胞主要位于背外侧区,在上丘深层、Cajal氏中介核、Darkschewitsch氏核内,也可见标记细胞。标记细胞和终末均主要位于注射侧的PAG内。PAG向Sp 5 C投射的5-羟色胺(5-HT)样神经元主要位于PAG的中、尾段的腹外侧区和内侧区腹侧部。中段的双标细胞占全部双标细胞数的57％,尾段占41％,吻段占2％。在背中缝核(DR)内,亦可见到一些双标细胞。PAG内的双标细胞占其HRP标记细胞总数的37％,但仅占5-HT样阳性细胞总数的4.5％。标记细胞主要为中型(20—30μm)梭形及三角形,小型(<20μm)梭形和大型(>30μm)多角形细胞较少见。

5-羟色胺和一氧化氮合酶在大鼠中脑导水管周围灰质和中缝核簇神经元内的共存

实验采用 NADPH组织化学和 5 - HT免疫组织化学双重显色方法研究了 5 - HT和一氧化氮合酶在大鼠中脑导水管周围灰质 (PAG)和中缝核簇神经元的分布特征及共存情况。结果表明 ;(1 )在 PAG腹外侧区中观察到大量的 NOS阳性神经元和 5 - HT样免疫阳性神经元 ,但是 NOS/ 5 - HT双标神经元较少 ,仅占该区 5 - HT样免疫阳性神经元 2 0 .1 % ,并且主要分布在该区的内侧部 ;在 PAG的背外侧区中观察到密集的 NOS阳性神经元 ,但是几乎未见 5 - HT免疫阳性神经元分布。(2 )在中缝核簇的大多数亚核内均可观察到大量的 NOS神经元和 5 - HT免疫阳性神经元。在中缝背核的内侧部、中缝背核的尾侧部、中缝正中核、尾侧线形核、中缝大核和中缝隐核内双标神经元分别占所在部位中 5 - HT免疫阳性神经元的 44 .6 %、5 3.4%、 44 .4%、 2 6 .2 %、 2 6 .7%和 2 1 .8%。然而在中缝苍白核内仅偶见少数双标神经元。研究结果表明 ,在 PAG和中缝核簇的一些神经元内 5 - HT可以与 NOS共存 ,提示这两种神经活性物质在功能上可能存在着某种相关性 ,有关这些双标神经元的功能意义尚需进一步研究。

大鼠中脑导水管周围灰质向下丘脑orexin神经元的纤维投射

目的:明确中脑导水管周围灰质(PAG)神经元调节下丘脑orexin神经元的解剖学基础。方法:首先采用逆行示踪技术,将霍乱毒素B亚单位(CTb)作为逆行示踪剂注射到下丘脑orexin神经元胞体分布的区域,免疫组织化学方法染色观察PAG内CTb逆行标记细胞的分布特点;接着采用顺行示踪技术和免疫组化相结合的方法,将生物素化葡聚糖胺(BDA)作为顺行示踪剂注射到PAG,观察下丘脑内BDA标记的神经纤维与orexin神经元的重叠分布特点;最后运用免疫电镜技术观察BDA标记轴突终末与orexin神经元之间的突触联系。结果:CTb注射到单侧下丘脑orexin神经元区域后,在PAG观察到大量CTb标记神经元,注射点同侧标记细胞数明显占优,其中PAG外侧区(lPAG)和腹外侧区(vlPAG)可见大量CTb逆标神经元,背外侧区(dlPAG)和背内侧区(dm PAG)可见少量标记神经元;注射点对侧lPAG及vlPAG区域也观察到少量CTb标记神经元。BDA注射到单侧lPAG后,下丘脑内双侧均可观察到BDA标记的神经纤维,但注射点同侧标记神经纤维数量明显占优。BDA标记纤维与orexin神经元胞体在穹窿背侧接近不定带(ZI)的区域(本文中将此区域称作"穹窿上区")形成显著的重叠分布。透射电镜下观察到BDA标记的轴突终末与orexin神经元之间形成突触联系,且多为非对称性类型。结论:lPAG投射到下丘脑的神经纤维在穹窿上区与orexin神经元形成优势重叠分布、并与orexin神经元的胞体或树突形成以非对称性为主的突触联系,提示orexin神经元可能在lPAG的直接支配下发挥其调节觉醒状态、摄食行为等功能。

神经病理性疼痛大鼠中脑导水管周围灰质腹外侧区GABAAα_1受体的表达变化

目的探讨γ-氨基丁酸A受体α_1(γ-aminobutyric acid type A receptor subunitα_1,GABAAα_1)在神经病理性疼痛(neuropathic pain,NP)大鼠中脑导水管周围灰质腹外侧区(ventrolateral periaqueductal gray,v LPAG)表达变化及其是否参与神经病理性疼痛表达过程。方法成年雄性清洁级SD大鼠15只,随机分为空白对照组(C组)、假手术组(S组)、神经病理性疼痛模型组(NP组)。建立坐骨神经分支选择性损伤(spared nerve injury,SNI)大鼠神经病理性疼痛模型,分别于术前1 d、术后1 d、3 d、5 d、7 d、14 d测定大鼠机械缩足反射阈值(paw withdrawal mechanical threshold,PWMT),采用蛋白免疫印迹法检测中脑导水管周围灰质腹外侧区处γ-氨基丁酸A受体α_1蛋白相对表达变化。结果与C组大鼠各时相机械缩足反射阈值比较,S组大鼠无明显改变。S组大鼠中脑导水管周围灰质腹外侧区处γ-氨基丁酸A受体α_1受体蛋白表达水平为0.699±0.027,较C组(0.636±0.023)无明显差异。NP组大鼠术后1 d机械缩足反射阈值为0.907±0.251 g,明显低于S组(8.216±1.428 g),并在后期呈持续性降低(P<0.05)。NP组大鼠中脑导水管周围灰质腹外侧区处γ-氨基丁酸A受体α_1受体蛋白相对表达量为1.442±0.015,明显高于S组(0.699±0.027)(P<0.05)。结论γ-氨基丁酸A受体α_1在神经病理性疼痛大鼠中脑导水管周围灰质腹外侧区表达明显上调,与机械缩足反射阈值呈负相关,可能与神经病理性疼痛相关。

甲醛后肢致炎大鼠中脑导水管周围灰质内勿动蛋白-A和降钙素基因相关肽mRNA表达的变化(英文)

目的观察甲醛后肢致炎大鼠中脑导水管周围灰质(PAG)内勿动蛋白-A(Nogo-A)和降钙素基因相关肽(CGRP)及其受体mRNA表达的变化。方法大鼠单侧后肢sc给予2%甲醛0.1 ml引起炎症反应,第3天用热和压力刺激方法,检测大鼠后爪缩爪潜伏期变化,确定甲醛致炎痛敏模型成功。分别在致炎后第3天和第7天取出大鼠PAG,采用实时定量PCR检测PAG内Nogo-A、CGRP、降钙素受体样受体(CLR)和受体调节蛋白1(RAMP1)mRNA的表达。结果正常大鼠PAG内Nogo-A,CGRP,CLR和RAMP1 mRNA均有不同程度的表达。甲醛致炎第3天,与正常大鼠比较,压力和热刺激方法测定大鼠缩爪潜伏期均显著缩短(P<0.01),并且致炎痛敏大鼠PAG内Nogo-A mRNA表达显著降低(P<0.01),CGRP,CLR和RAMP1 mRNA表达显著增加(P<0.01)。甲醛致炎第7天,CGRP mRNA表达恢复到正常水平,但Nogo-A mRNA表达仍低于正常水平(P<0.01),CLR和RAMP1 mRNA表达仍高于正常水平(P<0.01)。结论甲醛致后肢炎性痛敏大鼠PAG内Nogo-A表达显著下降,CGRP,CLR和RAMP1mRNA表达升高;并且随炎症的减轻,CGRP mRNA表达逐渐恢复正常。这些变化可能与大鼠PAG涉及炎症反应或痛觉调制过程有关。