使用大鼠因子部分取代IL-2培养CTLL-2细胞

使用大鼠因子部分取代ＩＬ┐２培养ＣＴＬＬ┐２细胞王彦宏王树宽朱平（第四军医大学西京医院临床免疫科西安７１００３３）关键词大鼠因子白细胞介素┐２ＣＴＬＬ－２细胞中图号Ｒ４４６．６ＣＴＬＬ－２细胞是白细胞介素－２（ＩＬ－２）依赖性细胞株，它来自用白血病细...

神经生长因子联合BMSCs-源外泌体通过Keap1/NQO1/Nrf2信号通路缓解脑出血大鼠神经损伤

目的探讨大鼠神经生长因子(rat nerve growth factor,RtNGF)联合骨髓间充质干细胞-源外泌体(BMSCs exosomes)缓解脑出血(intracerebral haemorrhage,ICH)大鼠神经损伤的疗效及其作用机制。方法制备BMSCs exosomes。60只大鼠随机分为假手术(Sham)组,ICH组,ICH+RtNGF组,ICH+BMSCs exosomes组,ICH+RtNGF+BMSCs exosomes组,每组12只。建立ICH大鼠模型,并给予RtNGF或BMSCs exosomes单独治疗或联合治疗。制备各分组大鼠脑组织石蜡组织切片,并对其进行HE染色。qPCR法测定各分组大鼠脑组织中Keap1/NQO1/Nrf2信号通路蛋白质因子mRNA的相对表达水平。免疫组化(IHC)法测定各分组大鼠脑组织中Keap1/NQO1/Nrf2信号通路蛋白质因子的表达水平。结果与Sham组相比,ICH组大鼠脑组织中存在多处明显的组织腔隙和血凝块。ICH+RtNGF组、ICH+BMSCs exosomes组和ICH+RtNGF+BMSCs exosomes组均有所改善,且ICH+RtNGF+BMSCs exosomes组缓解神经损伤效果最好。与Sham组相比,ICH组大鼠脑组织中Keap1,NQO1和Nrf2 mRNA表达水平升高(P<0.05);上述3种蛋白质IHC相对染色评分升高(P<0.05)。与ICH组相比,ICH+RtNGF组、ICH+BMSCs exosomes组和ICH+RtNGF+BMSCs exosomes组上述检测指标水平降低(P<0.05),且与ICH+RtNGF组或ICH+BMSCs exosomes组相比,ICH+RtNGF+BMSCs exosomes组上述检测指标水平更低(P<0.05)。结论RtNGF联合BMSCs exosomes治疗ICH大鼠,可通过Keap1/NQO1/Nrf2信号通路降低氧化应激缓解神经损伤。

肿瘤坏死因子-α在大鼠急性脊髓损伤中的表达

目的探讨肿瘤坏死因子(TNF)-α与大鼠急性脊髓损伤的关系。方法按改良Allen′s撞击法制作脊髓损伤模型,用ELISA方法检测大鼠脊髓损伤0、24、48、72、96hTNF-α的表达,并用RT-PCR法测定上述大鼠损伤组织中TNF-αmRNA表达量。结果ELISA法检测结果显示,在脊髓损伤24h后,TNF-α表达明显增加,与0h组比较有显著性差异(P<0.05)。与24h组比较,48、72h及96hTNF-α表达进一步明显增加(P<0.05)。RT-PCR结果显示,在脊髓损伤24h后,TNF-αmRNA表达明显增加,与0h组比较有显著性差异(P<0.05);随着损伤时间的延长,TNF-αmRNA在损伤后24、48、72h及96h表达并无明显差异。结论TNF-α可能是加重脊髓损伤的一个重要因素,抑制TNF-α的表达可能会成为治疗脊髓损伤的一个有用手段。

姜黄素对佐剂型关节炎大鼠滑膜细胞核转录因子-κB表达的影响

目的观察姜黄素对佐剂型关节炎模型大鼠膝关节腔液肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)含量及对滑膜组织核转录因子-κB(NF-κB)表达的影响,探讨姜黄素治疗类风湿关节炎(RA)的可能作用机制。方法SD大鼠左侧足趾皮内注射弗氏完全佐剂,制作成RA动物模型,经过姜黄素治疗后,通过酶联免疫吸附(ELISA)法检测大鼠膝关节腔液TNF-α和IL-1β含量,免疫组织化学染色(SP)检测NF-κB的表达。结果与正常对照组大鼠相比,RA模型组大鼠关节腔液TNF-α和IL-1β含量升高,膝关节滑膜组织NF-κB的表达增加;经过姜黄素治疗后以上指标恢复至正常水平。结论姜黄素能下调滑膜细胞NF-κB的表达与活性,降低炎性细胞因子的表达,从而治疗RA。

吡格列酮对大鼠痛风性关节炎滑膜细胞因子表达的作用

目的:研究过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisomeproliferator-activatedreceptorgamma,PPARγ)激动剂吡格列酮,对大鼠急性痛风性关节炎滑膜表达细胞因子的调控作用,探讨其作用机制。方法:大鼠单侧踝关节注射人工尿酸钠晶体制作急性痛风性关节炎模型,于注射48h后取关节滑膜,以RT-PCR法检测吡格列酮(20mg·kg-1·d-1)口服给药对滑膜表达肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)、白介素1受体拮抗剂(IL-1Ra)、细胞因子诱导中性粒细胞化学趋化因子(CINC,相当于人的白介素8)、干扰素γ(IFN-γ)和白介素4(IL-4)的作用。结果:吡格列酮用药组滑膜表达TNF-α、CINC和IFN-γ显著低于对照组,抑制率分别为81.7%、90.9%、65.3%;IL-4表达高于对照组,增加率为340.0%;IFN-γ/IL-4比值显著低于对照组,抑制率为92.6%。2组IL-1β和IL-1Ra的表达差别无统计学意义。结论:吡格列酮对急性痛风性关节炎的抗炎作用与抑制TNF-α和CINC的表达,并促使Th1/Th2平衡向Th2为优势转化有关。

脑心通对局灶性脑缺血大鼠行为学和脑组织肿瘤坏死因子α的影响

目的:探讨脑心通对大鼠局灶性脑缺血损伤后行为学及脑组织肿瘤坏死因子α表达的影响。方法:实验于2004-03/11在河北医科大学第二医院神经内科实验室进行。取成年健康雄性SD大鼠150只,制造大鼠局灶性大脑中动脉阻断造模手术后,将大鼠随机分为5组,即脑心通4g/kg组、2g/kg组、1g/kg组、生理盐水和假手术组,各组又分为6,24,48,72h,7d5个亚组,每亚组均为6只大鼠。脑心通各剂量组均为灌胃给药,生理盐水组给同体积的生理盐水,于相应时间点进行行为学评分后处死动物快速取脑,观察脑含水量的变化,病理切片苏木精-伊红染色观察组织病理学改变,免疫组织化学的方法测定肿瘤坏死因子α的动态变化。结果:实验中有8只大鼠死亡,后随机补充,进入结果分析仍为150只大鼠。①行为学评分:大鼠在大脑中动脉阻断后手术对侧肢体存在不同程度瘫痪,在术后48和72h时神经功能缺损最为明显,7d时神经功能基本恢复正常。②病理观察:除假手术组外,其余各组在脑梗死后6h局部可见少量散在炎性细胞浸润;梗死后48h,炎性细胞浸润明显增多;并持续到7d。③脑组织含水量:与假手术组相比,其他各组在各时间段均增加。术后24,48h脑心通4g/kg组为(78.95±1.36)%,(79.44±1.01)%,脑心通2g/kg组为(79.03±0.87)%,(80.46±1.54)%,低于同期的脑心通1g/kg组和生理盐水组[(79.21±0.68)%,(82.02±1.76)%,(79.30±1.11)%,(82.68±0.91)%,P<0.05]。④肿瘤坏死因子α阳性细胞表达:与假手术组相比,其他各组在各时间段均增加,梗死后6h开始增多,48h达高峰。术后24,48h脑心通4g/kg组为(27.6±2.1),(18.4±1.5)个,脑心通2g/kg组为(38.4±2.1),(23.2±3.3)个,低于同期的脑心通1g/kg组和生理盐水组[(50.4±5.6),(30.8±5.3),(52.8±3.7),(33.0±4.7)个,P<0.05]。结论:脑心通可能通过减轻脑水肿,降低脑内肿瘤坏死因子α的表达减少炎性细胞的浸润,从而对大鼠缺血脑组织损伤产生保护作用。

脑源性神经营养因子(rBDNF)转基因小鼠载体的构建和体外表达

目的构建大鼠脑源性神经营养因子(rBDNF)的条件性转基因小鼠载体,鉴定其在体外细胞系中的表达。方法用PCR方法扩增rBDNF片断,插入pNAO载体(lox-Stop-lox-IRES-EGFP),构建成rBDNF条件性基因载体(lox-Stop-lox-rBDNF-IRES-EGFP),使用Fugene 6转染试剂,将其同Cre重组酶表达质粒pGK-Cre共同导入HEK-293细胞系中,通过荧光显微镜观察、PCR及ELISA方法确定Cre-lox同源重组。结果经酶切和测序鉴定,rBDNF条件性基因载体构建成功。共转染后的HEK-293细胞中,观察到绿色荧光蛋白(EGFP)的强荧光表达;细胞基因组DNA中检测到Cre-lox基因重组;对rBDNF定量检测的ELISA结果显示,细胞内有大量的rBDNF释放到细胞外。结论rBDNF条件性基因载体构建成功,在体外细胞系中,检测到rBDNF及EGFP强表达,为转基因显微注射打下基础。

慢性阻塞性肺疾病大鼠模型转化生长因子表达及粉防己碱干预的研究

目的:研究慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠模型转化生长因子表达及粉防己碱的干预作用。方法:气管内注入少量内毒素与熏香烟复合法建立COPD大鼠模型,并分成正常对照组(Ⅰ组)、COPD疾病模型对照组(Ⅱ组)、COPD疾病模型(气虚型)+粉防己碱治疗组(Ⅲ组)、COPD疾病模型(阴虚型)+粉防己碱治疗组(Ⅳ)、COPD疾病模型(血瘀型)+粉防己碱治疗组(Ⅴ组),测定大鼠肺组织支气管黏膜转化生长因子-β1(TGF-β1)表达。结果:Ⅰ组TGF-β1在支气管黏膜上皮呈弱阳性表达(+);Ⅱ组上述部位呈强阳性表达(+++);Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组TGF-β1在上述部位表达强度介于Ⅰ组和Ⅱ组之间。Ⅱ组TGF-β1相对含量为0.457±0.047,高于Ⅰ组的0.213±0.034,有显著差异(P<0.05)。Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组TGF-β1相对含量为0.250±0.019、0.270±0.028、0.242±0.034,低于Ⅱ组(P<0.01),Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组之间差异无显著性。结论:粉防己碱能减缓支气管平滑肌厚度,减少支气管肺组织中TGF-β1的表达,能抑制COPD的气道重塑形成。

辛伐他汀对慢性阻塞性肺疾病大鼠肿瘤坏死因子-α表达的影响及机制

本实验采用宋一平等的熏香烟加气管内注入内毒素的方法制作COPD大鼠模划，通过观察辛伐他汀对慢性阻塞性怖疾病（CDPD）大鼠血清肿瘤坏死因子（TNF）-α和肺组织核转录因子（NF）-kB表达的影响，探讨其对COPD炎症反应的影响及机制。

重组大鼠胰岛素样生长因子-1聚(乳酸-羟基乙酸)共聚物缓释微球对2型糖尿病GK大鼠种植体周围骨形成的影响

目的评估重组大鼠胰岛素样生长因子-1(rrIGF-1)聚(乳酸-羟基乙酸)共聚物(PLGA)缓释微球对2型糖尿病GK大鼠种植体周围骨形成的影响。方法将20只雄性GK大鼠进行糖尿病造模成功后随机分为2组,分别给予加载包裹rrIGF-1的PLGA缓释微球(治疗组,n=10)和加载包裹与rrIGF-1等量安慰剂的PLGA缓释微球(糖尿病组,n=10)处理,再以10只未做处理的SD大鼠作为对照组。在所有大鼠胫骨内植入种植体,治疗组和糖尿病组大鼠同时分别加载等量相应种类的PLGA缓释微球。术后4、5、8周在种植体周围局部采血,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清骨钙素(OCN)、骨特异性碱性磷酸酶(B-ALP)及I型前胶原羧基前肽(PICP)含量。结果种植体植入术后4周,糖尿病组和治疗组的血清OCN、B-ALP和PICP水平均明显低于对照组(P均<0.05);术后5周,糖尿病组的OCN和B-ALP水平明显低于对照组和治疗组(P均<0.05),糖尿病组和治疗组的PICP水平也均明显低于对照组(P<0.05),治疗组的OCN水平明显高于术后4周(P<0.05),对照组的PICP水平则明显低于术后4周(P<0.05);术后8周,糖尿病组大鼠的OCN和B-ALP水平明显低于对照组和治疗组(P均<0.05),糖尿病组和治疗组大鼠的血清PICP水平均明显低于对照组(P均<0.05)。结论 rrIGF-1 PLGA缓释微球局部加载可促进GK大鼠种植体周围骨形成。

大鼠神经生长因子穴位注射治疗周围神经损伤的疗效

目的探讨大鼠神经生长因子穴位注射治疗周围神经损伤的疗效及对血液流变学指标和同型半胱氨酸(Hcy)水平的影响。方法周围神经损伤患者68例,依据随机数字表法随机分为观察组34例与对照组34例。对照组采用单唾液酸神经节苷酶治疗,观察组在对照组基础上结合大鼠神经生长因子穴位注射治疗。两组疗程均为4 w。比较两组患者治疗疗效及治疗前后神经传导速度、血液流变学和Hcy水平变化。结果观察组总有效率(91.18%)高于对照组(67.65%)(P<0.05);两组神经传导速度(MCV和SCV)治疗后明显增加(P<0.05),观察组神经传导速度(MCV和SCV)治疗后高于对照组(P<0.05)。两组血浆黏度、血细胞比容、纤维蛋白原水平治疗后明显降低(P<0.05),观察组血浆黏度、血细胞比容、纤维蛋白原水平低于对照组(P<0.05)。两组血清Hcy水平治疗后明显降低(P<0.05),观察组血清Hcy水平低于对照组(P<0.05)。结论大鼠神经生长因子穴位注射治疗周围神经损伤疗效明显,可通过降低血液流变学改变和Hcy水平减轻患者症状。

大鼠脑源性神经营养因子的克隆及原核重组表达载体的构建

目的:构建重组表达载体pGEX-脑源性神经营养因子(BDNF),探讨其原核表达BDNF的可行性。方法:大鼠BDNF进行密码子优化,人工合成BDNF的全基因序列,经回收、纯化、酶切后连接到pGEX原核表达载体中,将重组质粒pGEX-BDNF转化大肠杆菌BL21细胞中,筛选阳性克隆,经IPTG诱导表达后,利用ELISA方法鉴定其表达的活性。结果:PCR鉴定及测序显示BDNF序列完全正确,BDNF基因的克隆和表达载体构建成功,IPTG诱导表达目的蛋白经ELISA检测,其表达的目的蛋白具有一定的活性。结论:经密码子优化后经人工合成得到BDNF基因片段并成功构建pGEX-BDNF重组表达载体,具有一定的生物活性。

大鼠神经生长因子治疗周围神经损伤的效果

目的分析对周围神经损伤患者给予大鼠神经生长因子治疗的临床效果。方法对我院神经外科在2017年2月-2019年2月接收的68例周围神经损伤患者进行观察,将采用维生素B12治疗的34例患者作为参照组,将采用大鼠神经生长因子治疗的34例患者作为研究组,记录并对比两组患者治疗效果差异。结果研究组治疗总有效率(94.12%)高于参照组(P<0.05);研究组患者损伤神经感觉、运动传导速度较治疗前均明显改善,提高幅度优于参照组(P<0.05)。结论对周围神经损伤患者采用大鼠神经生长因子治疗效果明显,对改善患者症状、促进受损神经修复及再生、促进患者神经功能恢复具有重要意义。

卡托普利对肾性高血压大鼠左室肥厚及心脏核因子-kB表达的影响

研究表明．促炎性细胞因子与高血压的发生、发展存在密切的联系，而促炎性细胞因子不仅可引发高血压而且其水平升高与高血压的并发症如动脉硬化、心室肥厚、等的发生、发展密切相关。因此．降低高血压病人的炎性细胞因子水平可能会减缓甚至防止高血压并发症的发生。核因子－kappaB可高效诱导多种细胞因子，黏附分子，趋化因子的编码基因的表达，故对其有效的控制是降低炎性细胞因子不利影响的主要步骤之一。本研究采用肾性高血压大鼠模型，观察了卡托普利对炎性细胞因子合成的关键转录因子一核因子－kabppaB（NP－kB）在心肌组织内表达的影响，探讨了AcEI在高血压中的抗炎作用机制，为更好地防治高血压提供理论依据，现报告如下。

TGF-β和Smad6在哮喘大鼠气道重塑中的表达及福莫特罗的影响

目的研究转化生长因子-β1（TGF-β，）和Smad6在支气管哮喘（简称哮喘）大鼠肺组织中表达变化及福莫特罗对其表达的影响。方法无特定病原体级（SPF）健康雄性SD大鼠60只，根据干预方法和时间分为对照组（A2和A4），哮喘组（B2和B4），福莫特罗组（C2和C4），每组10只。用卵白蛋白（ovalbumin，OVA）致敏与激发，建立哮喘大鼠气道重塑模型，福莫特罗组模型制作同哮喘组，在激发阶段，激发前30min给予福莫特罗灌胃处理．各组均在末次激发后1～2h处死大鼠。采用图像分析技术测定肺内支气管壁厚度（Wat）及支气管平滑肌厚度（Wam）；免疫组化法测定肺组织中TGF-β1及Smad6蛋白表达。结果（1）Wat：02组和B2组比较差异无统计学意义（P〉0.05），两者均显著厚于A2组（均P〈0．01），C4组显著薄于B4组（P〈0．01），两者均显著厚于A4组（均P〈0．01）；（2）Wam：C2组显著薄于B2组（P〈0.01），两者均显著厚于A2组（均P〈0.01），C4组显著薄于B4组，两者均显著厚于A4组（均P〈0．01）；（3）肺组织TGF-β1蛋白平均吸光度值：C2组低于B2组（P〈0．05），两者均显著高于A2组（均P〈001），C4组低于B4组（均P〈0．05）。两者均显著高于A4组（均P〈0．01）；（4）肺组织Smad6蛋白平均吸光度值：C2组与B2组比较差异无统计学意义（P〉0．05），两者均显著低于A2组（均P〈0．01），C4组显著低于B4组（P〈0．01），两者均显著高于A4组（均P〈0．01）。结论TGF-β1在哮喘气道重塑大鼠肺组织中表达增高，Smad。表达减低；TGF一13，和Smad。表达失衡可能促进了哮喘气道重塑的发生和发展；福莫特罗可抑制哮喘大鼠TGF-β1，表达，促进Smad。表达，作用随激发时间延长而增强。

水飞蓟素对肾小管间质纤维化大鼠肾小管上皮-间质转分化的干预作用

目的:探讨水飞蓟素对肾小管间质纤维化大鼠小管上皮-间质转分化的干预作用。方法:利用单侧输尿管梗阻诱导建立肾小管间质纤维化大鼠模型,56只SD大鼠随机分为模型组24只、治疗组24只、假手术组8只。治疗组给予水飞蓟素30mg/(kg·d)灌胃,模型组和假手术组给予生理盐水灌胃。模型组和治疗组分别于实验第7d、14d、21d各收获大鼠8只,假手术组于第21d一次处死大鼠,进行肾组织病理学观察。用免疫组化方法检测肾组织转化生长因子-β1(TGF-β1)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。结果:实验第7d模型组大鼠出现小管损伤和炎症细胞浸润,随病程进展,上述病变呈进行性加重。水飞蓟素治疗组大鼠在各时间点组织学的改变与模型组相比有明显减轻。免疫组化显示水飞蓟素治疗组在各观察时间点能显著下调TGF-β1和α-SMA在肾小管间质中的表达。结论:水飞蓟素通过下调TGF-β1的表达,有效干预上皮-间质转分化达到改善肾脏纤维化的作用。

灯盏细辛抑制外源性VEGF诱导的大鼠视网膜血管病变TGFβ_1的表达

目的:探讨灯盏细辛(EBHM)对外源性VEGF诱导的大鼠视网膜血管病变眼玻璃体腔TGFβ1和视网膜TGFβ1mR-NA表达的影响。方法:大鼠48只随机分为rrVEGF164,rrVEGF164+EBHM,rrVEGF164+NS和正常对照4组。rrVEGF164+EBHM组每天60g/L的灯盏细辛浸膏ip。分别于不同时间收集玻璃体液后采用ELISA检测TGFβ1的浓度,并提取视网膜总的RNA后行RT-PCR检测TGFβ1mRNA的表达。结果:在2wk或6wk时VEGF、VEGF+NS和VEGF+EBHM组实验眼玻璃体内TGFβ1的浓度均高于正常对照组(P<0.05)。VEGF+EBHM组低于VEGF组和VEGF+NS组(P<0.05)。各组TGFβ1mRNA/GAPDHmRNA的差异与玻璃体内的TGFβ1浓度变化一致。结论:rrVEGF164作用大鼠玻璃体内TGFβ1浓度升高,视网膜TGFβ1mRNA表达增强。灯盏细辛能部分抑制rrVEGF164诱导的大鼠视网膜血管病变玻璃体内TGFβ1浓度的升高和视网膜TGFβ1mRNA表达的增强。

盆腔炎颗粒对慢性盆腔炎大鼠NF-κB及相关指标表达的影响

目的:研究盆腔炎颗粒对慢性盆腔炎大鼠核因子κB(NF-κB)及相关指标表达的影响。方法:以混合细菌加机械损伤法复制大鼠慢性盆腔炎模型,随机分为正常对照组、假手术组、模型组、盆炎净组及盆腔炎颗粒大、中、小剂量组,造模2周后,各治疗组灌胃给药2周,免疫组化法检测各组大鼠子宫组织中NF-κB、核因子κB结合蛋白(IκB)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达,逆转录-聚合酶链反应法检测各组大鼠子宫组织中ICAM-1mRNA、TNF-αmRNA表达。结果:盆腔炎颗粒可以显著降低模型大鼠NF-κB、IκB、TNF-α、ICAM-1、TNF-αmRNA及ICAM-1mRNA的表达,盆腔炎中剂量组子宫组织NF-κB与TNF-αmRNA及ICAM-1mRNA表达之间均呈显著正相关。结论:NF-κB活化的抑制在活血补肾法治疗慢性盆腔炎抗炎及抗粘连机制中起重要作用。