表皮-钙黏蛋白、增殖细胞核抗原在来曲唑诱导大鼠多囊卵巢综合征模型卵巢中的表达

目的:探讨大鼠多囊卵巢综合征(PCOS)模型表皮-钙黏蛋白(E-cadherin)、增殖细胞核抗原(PCNA)表达情况及意义。方法:6周龄SD清洁级雌性大鼠12只,随机分为来曲唑处理组((印)n(正)=6)和正常对照组((印)n(正)=6),来曲唑处理组用来曲唑1 mg/kg灌胃造模,正常对照组给予同等剂量溶剂灌胃,连续处理21天后,麻醉剂量处死,HE染色观察卵巢形态,免疫组织化学染色方法检测E-cadherin、PCNA蛋白定位,蛋白印迹检测E-cadherin、PCNA蛋白表达。结果:正常对照组卵巢视野中可见各阶段发育卵泡,来曲唑处理组卵巢仅有多个大小不等的空卵泡生长,内颗粒细胞层数较对照组明显减少;E-cadherin、PCNA蛋白均定位在细胞质和细胞核;蛋白印迹检测发现,PCNA蛋白来曲唑处理组表达明显低于正常对照组,E-cadherin蛋白来曲唑处理组表达高于正常对照组,且差异均有统计学意义((印)P(正)<0.05)。结论:来曲唑诱导大鼠PCOS模型卵巢中,PCNA蛋白表达降低,E-cadherin蛋白表达增加,可能使卵巢颗粒细胞增殖能力下降。

脱氢表雄酮联合高脂饮食诱导大鼠多囊卵巢综合征模型的研究

目的通过比较脱氢表雄酮(DHEA)联合高脂饮食及单纯DHEA构建多囊卵巢综合征(PCOS)的大鼠模型,探究更理想的多囊卵巢大鼠的建模方法。方法选取80只21日龄SD雌性大鼠,随机分为对照组、实验组和高脂饮食组3组,其中对照组及实验组大鼠各30只,高脂饮食组大鼠20只。从建模前后大鼠体质量增长、卵巢变化和血清性激素水平等指标进行模型评价。结果实验组及高脂饮食组血清雄激素水平较对照组均有显著增高,符合多囊卵巢的临床表现。2种造模方法的实验组大鼠均表现出多囊样改变,囊性扩张的卵泡增多,其卵泡内卵母细胞消失,卵巢颗粒细胞层数减少至2～3层,囊状扩张卵泡数量比例明显增多。高脂饮食组大鼠卵巢多囊样改变及卵巢病理学变化较实验组更加显著。结论 DHEA联合高脂饮食构建大鼠模型是更加理想的PCOS动物造模方法。

脱氢表雄酮诱导SD大鼠多囊卵巢综合征模型胰岛素抵抗的研究

目的:研究脱氢表雄酮(DHEA)诱导SD幼年雌性大鼠多囊卵巢综合征动物模型的卵巢形态学、性激素及空腹血糖和胰岛素的变化。方法:选取23日龄SD雌性大鼠,建模组每日皮下注射DHEA6mg/100g体重,对照组每日皮下注射等体积油剂。注射20天后观察两组大鼠卵巢形态学(HE染色)、性激素(E2、T、P)及空腹血糖和胰岛素的变化。结果:建模组大鼠的体重显著低于对照组(P<0.05);去除体重的影响后,建模组大鼠卵巢的重量略大于对照组,但无显著性差异(P>0.05)。建模组卵巢各级发育期卵泡及黄体少见,卵泡多呈囊性扩张,颗粒细胞层数减少,卵泡膜细胞、间质细胞增生。建模组大鼠血清E2、T、FINS、FBG均显著高于对照组(P<0.05);HOMA指数显著高于对照组(P<0.05)。结论:DHEA可诱导SD幼年雌性大鼠出现与PCOS患者相似的卵巢病理改变及雄激素升高和胰岛素抵抗等典型内分泌变化,是研究PCOS胰岛素抵抗的理想模型。

避孕硅胶棒联合hCG诱导SD大鼠多囊卵巢综合征模型的建立

目的:研究皮下埋植左旋18-甲基炔诺酮硅胶棒联合人绒毛膜促性腺激素(hCG)诱导SD幼年雌性大鼠多囊卵巢综合征(PCOS)动物模型的卵巢形态学、性激素及空腹血糖和胰岛素的变化.方法:选取24日龄SD雌性大鼠,模型组皮下埋植左旋18-甲基炔诺酮硅胶棒,3mm/只,3d后(27日龄)开始皮下注射hCG1.5×103U/L,2次/d.对照组27日龄始每日皮下注射等体积生理盐水.注射9d后观察两组大鼠卵巢形态学(HE染色)、性激素血清雌二醇(E2)、睾酮(T)、孕激素(P)、促卵泡生长激素(FSH)、促黄体生成激素(LH)及空腹血糖(FBG)和空腹胰岛素(FINS)的变化.结果:模型组大鼠卵巢质量(59.3vs44.45mg)和体积(0.045vs0.033mL)均显著高于对照组(P<0.05).模型组大鼠卵巢出现类多囊卵巢的改变.模型组大鼠血清P,T,FINS,FBG水平均显著高于对照组(P<0.05);FSH水平(1.12vs2.20×103U/L)显著低于对照组(P<0.05);LH/FSH比值(2.78vs0.95)和胰岛素抵抗(HOMA)指数(3.35vs2.26)均显著高于对照组(P<0.05).结论:避孕硅胶棒联合hCG可诱导SD幼年雌性大鼠出现与PCOS患者相似的卵巢病理改变及LH/FSH比值升高、雄激素升高、胰岛素抵抗等典型内分泌变化,是较为理想的PCOS动物模型.

来曲唑诱导大鼠多囊卵巢综合征模型卵巢组织中CYP19基因的表达

目的：研究来曲唑诱导的多囊卵巢综合征（PCOS）模型大鼠卵巢组织中CYP19基因的表达，为该模型的应用提供一定的理论依据。方法：SD大鼠随机分为模型组和对照组，模型组应用来曲唑诱导大鼠PCOS模型。放射免疫法测定大鼠血清性激素水平；H～E染色观察卵巢组织学变化，免疫组织化学、Realtime-PCR和免疫印迹法检测CYP19基因在卵巢组织中的表达。结果：模型组血清性激素水平睾酮、黄体生成素、卵泡刺激素浓度显著增高，雌二醇、孕酮浓度降低。模型组CYP19mRNA及蛋白表达均显著高于对照组。结论：来曲唑诱导的PCOS大鼠卵巢组织中CYP19基因表达水平增高。

睾酮联合hCG诱导大鼠多囊卵巢综合征模型的实验研究

目的:研究皮下注射睾酮及人绒毛膜促性腺激素(hCG)是否可制造出理想的多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)大鼠模型。方法:对青春期前大鼠持续皮下注射睾酮及hCG,观察发情周期、体重、睾酮及卵巢组织病理学变化。结果:5周、11周后PCOSI组、II组大鼠血清睾酮升高(P<0.01);卵巢呈典型多囊样改变;阴道开口日龄提前(P<0.01);发情周期紊乱;体重增加(P<0.01)。13周后PCOSI组血清睾酮回落至正常水平(P>0.05),同时伴有囊性卵泡数量的减少,并出现黄体。结论:对青春期前大鼠持续皮下注射睾酮及hCG可成功诱导出PCOS动物模型,其具有血清性激素改变及卵巢多囊样变等特点,适用于观察具有短期疗效的药物。

多囊卵巢综合征大鼠和小鼠模型的生殖与代谢特点及选择应用

多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)是育龄期妇女常见的生殖内分泌疾病,临床表现主要包括生殖和代谢方面的异常,如月经稀发或闭经、高雄激素血症、卵巢多囊样改变、多毛、肥胖、胰岛素抵抗等。动物模型的选择与研究结果密切相关。本文通过对已有的PCOS大鼠和小鼠模型的文献进行分类及梳理,比较常见的PCOS大鼠和小鼠模型生殖和代谢两方面的异常表征,阐述PCOS模型建立的机制,探讨各模型在PCOS研究中的应用和价值,以期帮助研究者根据研究目的准确地选择PCOS动物模型。

基于PT和APTT相关凝血指标分析多囊卵巢综合征危险因素并建立列线图预测模型

目的:基于凝血酶原时间(PT)和活化部分凝血酶原时间(APTT)相关凝血指标分析多囊卵巢综合征(PCOS)危险因素并建立列线图预测模型。方法:选择2021年9月—2022年10月江西中医药大学附属医院中医妇科门诊就诊的PCOS患者199例作为PCOS组,同期在该院进行孕前检查的248例正常女性作为对照组。比较两组各项指标,行单因素和多因素Logistics回归分析,筛选PCOS独立危险因素,并建立列线图预测模型,受试者工作持证曲线(ROC)评估该模型的区分度与准确度,P<0.05为差异有统计学意义。结果:单因素结果分析显示,年龄、抗缪勒氏管激素(AMH)、PT、APTT、凝血酶时间(TT)、纤维蛋白原(Fib)是PCOS危险因素,也是PCOS独立危险因素;构建的Nomogram模型预测PCOS的发生风险阈值为0.07~0.86时,适用性最佳。结论:年龄和AMH,PT,APTT,TT,Fib是PCOS危险因素,同时也提示抗凝治疗可能会改善生殖结局。PCOS的早期筛查和干预对患者长期健康和生命质量具有重要意义,对临床治疗方案的实施具有一定指导意义。

lncRNA TMPO-AS1通过PI3K/Akt信号通路对多囊卵巢综合征大鼠性激素和卵巢功能的影响

目的:分析长链非编码RNA(lncRNA)TMPO-AS1通过磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠性激素和卵巢功能的影响。方法:随机将30只SD雌性大鼠分为模型组、si-NC组、TMPO-AS1-shRNA组,另选取健康大鼠设空白对照组,每组10只,模型组、si-NC组、TMPO-AS1-shRNA组给予60%高脂饲料,皮下注射DHEA(60 mg/kg溶于0.2 ml芝麻油中),空白对照组给予普通饲料,皮下注射等量芝麻油,于10 d开始对大鼠进行为期10 d的阴道涂片,持续注射21 d后测量大鼠体重、卵巢重量,计算卵巢指数;并采用Western blot检测PI3K、P-PI3K、Akt、P-Akt蛋白水平;采用荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测TMPO-AS1、PI3K、Akt mRNA表达水平;采用酶联免疫吸附法检测血清性激素水平;于光学显微镜下观察卵巢形态学。结果:MPO-AS1、PI3K、Akt mRNA水平比较,模型组、si-NC组比空白对照组低(均P<0.05)。TMPO-AS1-shRNA组体重、卵巢重量、卵巢指数比空白对照组高,比模型组、si-NC组低(均P<0.05)。TMPO-AS1-shRNA组PI3K、Akt蛋白表达水平比空白对照组低,比模型组、si-NC组高(均P<0.05)。TMPO-AS1-shRNA组睾酮激素(T)、促黄体生成素(LH)水平比空白对照组高,比模型组、si-NC组低;雌二醇(E2)、促卵泡生成激素(FSH)水平比空白对照组低,比模型组、si-NC组高(均P<0.05)。TMPO-AS1-shRNA组黄体数、成熟卵泡数、颗粒细胞厚层比空白对照组低,比模型组、si-NC组高(均P<0.05)。结论:lncRNA TMPO-AS1通过PI3K/Akt信号通路可有效降低PCOS大鼠性激素水平,并改善其卵巢功能。

基于MAPK/ERK通路探讨益肾调经丸对大鼠多囊卵巢综合征的作用和机制研究

目的:探讨益肾调经丸对大鼠多囊卵巢综合征模型的作用及其机制。方法:70只雌性SD大鼠随机分为正常组、模型组、空白对照组、达英35组和益肾调经丸低、中、高剂量组,每组10只。采用来曲唑+高脂饲料造模,造模成功后,各治疗组和空白对照组使用相应剂量的药物灌胃28 d。ELISA法检测血清睾酮(T)、促卵泡素(FSH)、促黄体生成素(LH)水平,计算LH/FSH;观察卵巢形态改变;HE染色法观察卵巢镜下观;Real-time PCR法检测卵巢组织中CYP17A1、CYP19A1 mRNA表达;Western blot检测p-ERK1/2的蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠卵巢可见多囊样改变,血清T、LH水平升高,FSH降低,LH/FSH升高,卵巢呈多囊样改变,卵巢组织中CYP17A1 mRNA表达升高,CYP19A1 mRNA表达降低,p-ERK1/2蛋白表达升高(P<0.05);与模型组对比,空白对照组各检测指标无明显变化,各给药组大鼠卵巢多囊样改变缓解,血清T、LH水平降低,FSH升高(P<0.05),卵巢多囊样改变减轻,卵巢组织中CYP17A1 mRNA表达降低,CYP19A1 mRNA表达升高(P<0.05),治疗组p-ERK1/2蛋白表达水平有不同程度改善,其中益肾调经丸各治疗组的改善比较差异有统计学意义(P<0.05),达英35组的变化比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:益肾调经丸能够改善PCOS大鼠性激素水平,减轻卵巢多囊样改变。益肾调经丸可能是通过MAPK/ERK信号通路降低CYP17A1、上调CYP19A1表达,降低雄激素水平,从而改善PCOS大鼠卵巢多囊样改变及高雄激素状态。

PGC⁃1α、FNDC5蛋白在来曲唑诱导多囊卵巢综合征大鼠卵巢组织中的表达

目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC-1α)、Ⅲ型纤连蛋白域蛋白5(FNDC5)在来曲唑诱导多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠卵巢组织中的表达。方法将6周龄雌性SD大鼠随机分为对照组、PCOS组,每组各10只。PCOS组给予来曲唑溶液灌胃建立PCOS模型,对照组给予等体积羧甲基纤维素溶液灌胃,均1天1次,连续28 d。用化学发光法测定血清雄激素(T)、黄体生成素(LH)、卵泡雌激素(FSH)、空腹葡萄糖(FPG),计算LH/FSH;用ELISA法测定空腹血胰岛素(INS),计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);HE染色后观察卵巢组织病理变化;免疫组化染色法检测卵巢组织PGC-1α、FNDC5蛋白表达。结果两组血清FPG比较差异无统计学意义(P>0.05),PCOS组血清T、LH、LH/FSH、INS、HOMA-IR较对照组高(P均<0.05),血清FSH水平较对照组低(P均<0.05)。对照组大鼠可见不同生长时期的卵泡及新鲜黄体,颗粒细胞整齐紧密排列、层数较多,可达6~8层;PCOS组可见多个未成熟的囊状卵泡及闭锁卵泡,颗粒细胞排列散乱不规则,层数较少。PGC-1α、FNDC5蛋白主要在卵巢组织颗粒细胞和卵丘细胞表达,呈现棕黄色,而卵泡膜细胞少量表达。与对照组比较,PCOS组卵巢组织PGC-1α蛋白表达低,FNDC5蛋白表达高,差异有统计学意义(P均<0.05)。结论PGC-1α在PCOS大鼠卵巢组织中低表达,FNDC5在PCOS大鼠卵巢组织中高表达。

基于加权基因共表达网络分析及机器学习构建铁死亡相关基因在多囊卵巢综合征的疾病模型及相关中药预测

目的:利用机器学习分析铁死亡基因与多囊卵巢综合征(PCOS)的相关性,构建诊断及预后风险模型,探讨PCOS的潜在铁死亡机制,并预测相关中药。方法:多芯片标准化合并GEO数据库的卵巢组织芯片,采用加权基因共表达网络分析(WGCNA)算法筛选与PCOS相关的铁死亡特征基因,对特征基因进行功能富集分析,利用多种机器学习进行构建并筛选疾病模型,提取最优的疾病特征基因,并构建风险模型,分析其与免疫浸润细胞及功能之间的相关性,对铁死亡基因进行中药及小分子化合物预测,并对小分子化合物与铁死亡靶点进行分子对接验证。结果:共提取26个铁死亡与PCOS的强相关交集靶基因,主要在铁死亡通路中的Xc-系统和铁代谢通路上发挥作用。通过WGCNA结合机器学习筛选以HMOX1、IFNA1、LPCAT3、FOXO4和PARP3为特征基因的RF模型有较优的模拟特性,并通过绘制列线图来预测各基因表达的患病风险性。上述模型基因与PCOS的发病呈正相关性。免疫浸润分析提示多种免疫细胞在两组之间存在显著浸润差异,预测的中药中丹参、三七可能是其潜在的分子药物来源,分子对接中丹酚酸B、葛根素与黄芪甲苷A的匹配程度最高。结论:以HMOX1、IFNA1、LPCAT3、FOXO4和PARP3为特征基因的铁死亡相关基因模型可为早期识别和治疗POCS提供新思路。铁死亡相关基因可通过干预多种途径在PCOS中发挥重要作用,中医药在干预PCOS中可能通过调节铁稳态代谢来介导铁死亡途径。

基于PI3K/Akt信号通路探讨苍附导痰汤对肥胖型多囊卵巢综合征模型大鼠卵巢增殖和凋亡的影响

目的研究苍附导痰汤对多囊卵巢综合征(PCOS)模型大鼠的改善作用及机制。方法40只雌性SD大鼠按随机数字表法分为正常组、模型组、苍附导痰汤组及二甲双胍组,每组10只。正常组给予普通饲料喂养和0.5%羧甲基纤维素钠灌胃,其余各组给予高脂饲料喂养联合来曲唑1.0 mg/(kg·d)(溶于0.5%羧甲基纤维素钠)灌胃,连续21 d。模型建立成功后,苍附导痰汤组给予苍附导痰汤1.625 g/(kg·d),二甲双胍组给予二甲双胍200 mg/(kg·d),正常组和模型组给予等体积生理盐水,分别灌胃4周。测量各组大鼠体质量和空腹血糖;苏木精-伊红(HE)染色法检测卵巢组织病理学变化;酶联免疫吸附剂测定法(ELISA)检测血清激素的表达;蛋白质印迹法(Western blot)检测卵巢中磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、Bcl2关联X蛋白(Bax)、增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达。结果与正常组比较,模型组大鼠体质量增加[(392.52±7.67)g比(322.17±8.76)g,P<0.05],血糖升高[(11.42±1.82)mmol/L比(4.90±0.41)mmol/L,P<0.05],卵泡刺激素(FSH)降低[(7.40±0.33)mIU/mL比(10.43±0.26)mIU/mL,P<0.05],黄体生成素(LH)升高[(36.50±0.67)mIU/mL比(21.00±0.65)mIU/mL,P<0.05],睾酮(T)升高[(61.70±1.06)nmol/L比(46.27±0.76)nmol/L,P<0.05];卵巢呈现多囊样改变;PI3K、Akt、PCNA蛋白表达降低[PI3K:(0.23±0.02)比(1.04±0.01);Akt:(0.73±0.01)比(1.03±0.02);PCNA:(0.47±0.01)比(1.16±0.01),P均<0.05],Bax蛋白表达升高[(0.89±0.02)比(0.57±0.02),P<0.05]。与模型组比较,苍附导痰汤组和二甲双胍组体质量减轻[(362.42±8.05)g、(375.41±4.60)g比(392.52±7.67)g,P均<0.05],血糖降低[(6.70±0.42)mmol/L、(8.54±0.56)mmol/L比(11.42±1.82)mmol/L,P均<0.05],FSH升高[(9.57±0.41)mIU/mL、(8.24±0.09)mIU/mL比(7.40±0.33)mIU/mL,P均<0.05],LH降低[(26.23±0.66)mIU/mL、(31.53±0.40)mIU/mL比(36.50±0.67)mIU/mL,P均<0.05],T降低[(47.73±0.37)nmol/L、(54.10±0.80)nmol/L比(61.70±1.06)nmol/L,P均<0.05];卵巢形态改变部分恢复。与模型组比较,苍附导痰汤组PI3K、Akt、PCNA升高[PI3K:(1.03±0.01)比(0.23±0.02);Akt:(0.86±0.01)比(0.73±0.01);PCNA:(0.59±0.01)比(0.47±0.01),P均<0.05],Bax降低[(0.42±0.01)比(0.89±0.02),P<0.05];与模型组比较,二甲双胍组PI3K升高[(0.72±0.01)比(0.23±0.02),P<0.05],Bax降低[(0.53±0.01)比(0.89±0.02),P<0.05]。与二甲双胍组比较,苍附导痰汤组体质量、血糖降低,FSH升高,LH、T降低,PI3K、PCNA升高,Bax降低(P<0.05)。结论苍附导痰汤可能通过激活PI3K/Akt通路,抑制卵巢细胞凋亡,促进细胞增殖而对PCOS有治疗效果。

补肾化瘀方对脱氢表雄酮诱导的多囊卵巢综合征大鼠模型的影响

目的观察补肾化瘀方对脱氢表雄酮诱导的多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)大鼠模型的影响,探讨其作用机制。方法通过颈背部皮下注射脱氢表雄酮(dehydroepiandrosterone,DEHA)溶液构建PCOS大鼠模型,将成模大鼠随机分为中药组、阳性对照组、模型对照组,每组10只,另取10只正常大鼠作为空白对照组。造模成功后分别予以药物干预60天。采用苏木精—伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色法观察卵巢形态学变化;用酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测卵泡刺激素(follicle stimulating hormone,FSH)、促黄体生成素(luteinizing hormone,LH)、孕酮(progesterone,P)、雌激素(estradiol,E2)总睾酮(testosterone,T)等;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time,PCR)和蛋白免疫印迹法(Western Blot)分别检测卵巢组织抗缪勒管激素(anti-Müllerian hormone,AMH)、AMH受体2(AMH receptor,AMHR2)mRNA和蛋白表达。结果与空白对照组比较,模型对照组大鼠卵巢组织中可见囊状扩张卵泡增多,极少成熟卵泡,血清LH、T明显升高(P<0.05),AMH及其mRNA水平显著升高(P<0.05),卵巢组织中AMH、AMHR2蛋白表达水平均升高(P<0.05);与模型对照组比较,中药组大鼠卵巢组织中可见成熟卵泡,囊状扩张卵泡及闭锁卵泡减少,血清FSH、P、E2水平显著升高(P<0.05),血清LH、T水平显著降低(P<0.05),AMH及其mRNA的表达水平显著降低(P<0.05),大鼠卵巢组织中AMH、AMHR2的蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论补肾化瘀方能有效降低T水平,改善PCOS内分泌水平,对AMH及其表达有调节性作用,恢复卵巢功能和形态、促进卵泡发育和成熟。

多囊卵巢综合征模型大鼠卵巢中结缔组织生长因子及基质金属蛋白酶-9的表达

目的探讨卵巢中结缔组织生长因子(CTGF)及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达与多囊卵巢综合征的关系。方法52只SPF级SD雌性大鼠(6周龄,具备规律动情周期)依照不同造模方式分为对照组和模型组,每组26只。对照组行羧甲基纤维素灌胃建模,模型组行等量来曲唑建模。分析研究对象动情周期不在出现固定规律,且具有连续性特征时,两组均采集其血清以及卵巢组织,采用放射免疫法(RIA)测定促黄体生成激素(LH)、促卵泡激素(FSH)、雌二醇(E_(2))、垂体泌乳素(PRL)、睾丸素等指标对大鼠内分泌改变情况进行评定分析;并应用免疫组织化学的方法使用CTGF一抗、二抗、三抗和MMP-9一抗、二抗、三抗来测定和分析两种因子在该疾病组织中的表达情况。结果模型组PRL、LH、睾丸素、窦前卵泡卵泡膜胞浆中CTGF、黄体中MMP-9等表达高于对照组(P<0.05),FSH、E_(2)、卵泡基底膜内MMP-9表达水平均发生显著下降趋势(P<0.05)。结论卵巢中结缔组织生长因子水平变化与该疾病中小卵泡过多表达或者排卵障碍之间存在一定关联性,MMP-9则与多囊卵巢综合征的排卵障碍之间存在关联性。

四物汤通过激活LKB1/AMPK通路对多囊卵巢综合征大鼠的改善作用

目的基于肝激酶B1(LKB1)/腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)通路探讨四物汤对多囊卵巢综合征(Polycystic ovary syndrome,PCOS)大鼠的改善作用及相关机制。方法将60只雌性SD大鼠随机分为正常组、模型组、达英-35+二甲双胍组(0.2+230 mg·kg^(-1))和四物汤低、中、高剂量组(1.62、3.24、6.48 g·kg^(-1)),每组10只;采用灌胃1 mg·kg^(-1)来曲唑混悬液,每日1次,连续21 d,制备PCOS大鼠模型;各组均灌胃给药(10 mL·kg^(-1)),正常组和模型组大鼠灌胃等体积蒸馏水,每日1次,连续30 d。采用ELISA法检测大鼠血清中血糖、胰岛素、雌二醇(E_(2))、睾酮(T)、促性腺激素释放激素(GnRH)、促卵泡素(FSH)和促黄体生成素(LH)水平,计算胰岛素抵抗(IR)指数;测定并计算大鼠卵巢系数;HE染色法观察大鼠卵巢组织病理变化;免疫组织化学法检测大鼠卵巢组织中LKB1、AMPK蛋白表达水平;实时荧光定量PCR法检测大鼠卵巢组织中LKB1、AMPK mRNA表达水平。结果与正常组比较,模型组大鼠的血糖、胰岛素水平及IR指数明显升高(P<0.05),血清中T、GnRH、LH水平明显升高(P<0.05),E_(2)、FSH水平明显降低(P<0.05);大鼠的卵巢系数明显升高(P<0.05),卵巢组织中闭锁卵泡增多,囊性病变增加;卵巢组织中LKB1、AMPK蛋白及mRNA表达水平明显降低(P<0.05)。与模型组比较,达英-35+二甲双胍组和四物汤低、中、高剂量组大鼠的血糖、胰岛素水平及IR指数明显降低(P<0.05),血清中GnRH、LH水平明显降低(P<0.05),FSH水平明显升高(P<0.05);达英-35+二甲双胍组和四物汤中剂量组大鼠血清中E_(2)水平明显升高(P<0.05),T水平明显降低(P<0.05);达英-35+二甲双胍组和四物汤低、中、高剂量组的大鼠卵巢系数明显降低(P<0.05),卵巢组织囊性病变明显减轻;卵巢组织中LKB1、AMPK蛋白及mRNA表达水平明显升高(P<0.05)。结论四物汤对PCOS大鼠性激素水平、IR及卵巢囊性改变具有明显改善作用,其机制可能与激活LKB1/AMPK通路有关。

基于多囊卵巢综合征大鼠模型分析补肾促排卵汤对下丘脑-垂体-卵巢轴的调控机制

目的:通过多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠模型,探究补肾促排卵汤对下丘脑-垂体-卵巢轴的调控机制。方法:将150只6周龄的SD大鼠,随机分为空白对照组(鼠数=30)及PCOS观察组(鼠数=120),再将观察组随机分为模型组、阳性对照组、中药低剂量组及中药高剂量组4组,每组30只;空白对照组正常环境下饲养,观察组均给予脂多糖(LPS)腹腔注射,阳性对照组给予达英35溶液,中药低剂量组给予低剂量补肾促排卵汤,中药高剂量组给予高剂量补肾促排卵汤。分析各组大鼠卵巢系数、子宫系数及动情周期变化,分析其血清性激素水平;观察各组大鼠下丘脑Kisspeptin、GnRH蛋白表达及mRNA水平。结果:中药高剂量组各观察指标水平与空白对照组对比差异无统法学意义(P>0.05);中药高剂量组卵巢系数及动情周期均低于模型组、阳性对照组及中药低剂量组(P<0.05);空白对照组卵巢系数及动情周期均低于模型组、阳性对照组及中药低剂量组(P<0.05);垂体促黄体生成素(LH)、睾酮(T)水平中药高剂量组及空白对照组均低于其他各组,而雌二醇(E2)及孕酮(P)均高于其他组(P<0.05);中药高剂量组E2显著高于阳性对照组(P<0.05);中药高剂量组及空白对照组下丘脑Kisspeptin蛋白表达及mRNA水平均高于其他各组,GnRH蛋白表达及mRNA水平均低于其他各组(P<0.05)。结论:补肾促排卵汤可以调节卵巢功能,规律性激素水平,且可以调节垂体Kisspeptin及GnRH表达,降低垂体对两者的敏感度,促进排卵。

抗缪勒管激素诊断多囊卵巢综合征的年龄特异性阈值探讨及应用

目的 探讨抗缪勒管激素(AMH)诊断多囊卵巢综合征(PCOS)的年龄特异性阈值及其诊断效能。方法 收集该院2 187例14~40岁的月经紊乱的患者样本,并采用免疫荧光方法测定血清AMH水平,符合鹿特丹标准患者为PCOS组,反之为对照组。利用广义加性模型(GAMs)和受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC)确立AMH的年龄区间和对应的阈值。评估各年龄区间AMH诊断PCOS的效能,并与试剂厂商提供的阈值进行比较。结果 基于GAMs模型,AMH预测PCOS的最佳年龄截断值分别为21、28和35岁。在14~<21岁、21~<28岁、28~<35岁和35~40岁年龄组中,AMH诊断阈值分别为8.28、8.02、6.70、3.96 ng/mL;AUC分别为0.97(95%CI:0.93~0.99)、0.97(95%CI:0.95~0.98)、0.98(95%CI:0.95~0.98)、0.99(95%CI:0.98~0.99);灵敏度分别为0.87、0.87、0.91、1.00;特异度分别为0.94、0.93、0.90、0.93。在各年龄组中,PCOS组的AMH水平均高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.001)。结论 应用AMH的年龄特异性阈值,可以更好地评估AMH在区分所有年龄段PCOS患者中的价值。

CaMKⅡ对多囊卵巢综合征模型小鼠颗粒细胞中Caspase-3表达的影响

目的:探讨钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)在正常小鼠卵巢和多囊卵巢综合征(PCOS)小鼠卵巢组织中的差异表达,阐明CaMKⅡ对PCOS小鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响。方法:用蓖麻油溶解脱氢表雄酮(DHEA)皮下注射诱导PCOS小鼠模型(PCOS组),对照组小鼠注射等体积蓖麻油,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测2组小鼠血清中睾酮水平,阴道涂片监测2组小鼠发情周期变化,HE染色观察2组小鼠卵巢组织病理形态表现,免疫荧光染色法检测2组小鼠卵巢组织中CaMKⅡ蛋白定位和荧光强度,Western blotting法检测2组小鼠卵巢组织中CaMKⅡ和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3 (Caspase-3)蛋白表达水平。采用短发夹RNA (sh-RNA)-CaMKⅡ慢病毒转染人卵巢颗粒细胞(KGN细胞)建立稳转体系,分为空白对照组、 sh-CaMKⅡ-1组和sh-CaMKⅡ-2组,Western blotting法检测各组KGN细胞中CaMKⅡ和Caspase-3蛋白表达水平。结果:与对照组比较,PCOS组小鼠血清中总睾酮和游离睾酮水平明显升高(P<0.01),发情周期紊乱,停滞于发情中期,卵巢组织中出现颗粒细胞层数较少的空泡状卵泡,表明PCOS小鼠模型建立成功。CaMKⅡ蛋白在小鼠卵巢组织的卵母细胞、颗粒细胞和间质细胞中均有表达;与对照组比较,PCOS组小鼠卵巢组织中CaMKⅡ荧光强度和蛋白表达水平明显降低(P<0.01),Caspase-3蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。与空白对照组比较,sh-CaMKⅡ-1和sh-CaMKⅡ-2组KGN细胞中CaMKⅡ蛋白表达水平明显降低(P<0.01),Caspase-3蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。结论:PCOS小鼠卵巢组织中CaMKⅡ蛋白表达水平降低诱导Caspase-3蛋白表达水平升高,进而促进颗粒细胞凋亡。

国内多囊卵巢综合征动物模型构建的现状及评价

目的:为全面了解国内多囊卵巢综合征(PCOS)动物模型构建现状,以便今后动物造模更加严谨科学。方法:检索2017年1月1日至2021年3月10日国家知识基础设施数据库(CNKI)、中国学术期刊数据库(CSPD)和中文科技期刊数据库(CCD)等数据库相关文献,对文献中PCOS造模选用的动物种类、造模药物、造模时长,模型评价等方面进行分析。结果:PCOS模型构建最多选用的是大鼠,多选用21~24日龄,造模使用最多的药物是雄激素及来曲唑,造模时长最多的是20~30 d,模型评价指标可选用阴道脱落细胞涂片、生化指标及病理指标。结论:PCOS造模方法多种多样,在动物造模时尽量选用比较成熟的造模方法,同时亦需要不断探索新的造模方法,以求建立更符合临床特征的PCOS动物模型。