脂多糖诱导大鼠子宫内膜损伤模型的建立与评价

目的:用不同浓度的脂多糖(LPS)对大鼠进行宫腔灌注,尝试构建更符合子宫内膜损伤条件的大鼠子内膜损伤动物模型,并对该模型进行评价。方法:选取SD大鼠24只,将其分为LPS 10 mg/mL组、LPS 20 mg/mL组(此二组合称为LPS处理组大鼠)和对照组。分别向LPS 10 mg/mL组、LPS 20 mg/mL组和对照组大鼠的宫腔内注射10 mg/mL的LPS、20 mg/mL的LPS、同等体积的生理盐水。干预48 h后处死三组大鼠,切除其子宫,并对子宫进行苏木精-伊红(HE)染色及免疫组化染色,观察其子宫内膜的形态学改变。结果:造模后,与对照组大鼠相比,LPS处理组大鼠的子宫内膜层明显变薄,宫腔腔隙增大,子宫内膜上皮细胞排列紊乱,间质充血水肿,腺体数量明显减少,且LPS 20 mg/mL组大鼠的子宫内膜层变薄尤为明显。造模后,LPS处理组大鼠子宫内膜和肌层中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达水平显著高于对照组大鼠,且随着LPS诱导剂量的加大,大鼠子宫内膜和肌层中TNF-α的表达水平逐渐升高。结论:LPS可有效地诱导大鼠子宫内膜损伤,LPS的最佳诱导剂量为20 mg/mL。LPS可作为一种损伤诱导剂成功构建大鼠子宫内膜损伤模型。

改良机械损伤法建立大鼠子宫内膜损伤模型

目的通过改良机械损伤法建立大鼠内膜损伤模型,模拟并分析内膜损伤-修复中的宫腔粘连形成过程,为临床防治宫腔粘连提供实验依据。方法27只雌性SD大鼠,按随机数字法随机分为空白组(n=9)、造模组(n=9)、对照组(n=9)。空白组不进行任何干预操作;造模组利用改良机械损伤法损伤子宫内膜;对照组行假手术。分别检测术后第1、4、7天各组子宫内膜腺体数量、纤维化程度、微血管密度、宫腔粘连因子(TGF-β1、VEGF)的时空表达来进行评估模型。结果造模组较对照组及空白组内膜腺体数目减少(P<0.05),子宫内膜变薄,子宫内膜纤维化面积增加,子宫内膜微血管密度略增多,增加了TGF-β1、VEGF的表达。结论改良机械损伤法建立大鼠内膜损伤模型成立。

温经汤对大鼠子宫内膜异位症SPARC介导的上皮-间质转化的影响

目的探讨温经汤对子宫内膜异位症(EMT)大鼠模型富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(SPARC)介导的上皮-间质转化的影响。方法采用手术自体移植子宫内膜块法建立EMT大鼠模型,将建模成功的40只大鼠随机分为模型组(给予质量分数为0.9%的氯化钠溶液10 mL/kg)、孕三烯酮组(给予孕三烯酮溶液0.5 mg/kg)以及温经汤低、中、高剂量组(分别给予温经汤免煎颗粒剂8.19 g/kg、16.38 g/kg、32.76 g/kg),每组各8只,另取7只未手术大鼠作为正常对照组(给予质量分数为0.9%的氯化钠溶液10 mL/kg)。所有大鼠均连续灌胃给药3周后进行取材。腹主动脉取血,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清中SPARC水平。电子游标卡尺测量异位病灶体积,计算生长抑制率。取下异位病灶组织(正常对照组取下双侧子宫组织)采用免疫组织化学法检测内膜组织中SPARC、锌指转录因子(Snail)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的表达,采用Western blot法和RT-qPCR法测定内膜组织中上述因子的蛋白和mRNA相对表达量。结果各治疗组异位病灶的生长抑制率与模型组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。与正常对照组比较,模型组血清中SPARC水平显著升高(P<0.05),各治疗组血清中SPARC水平均明显低于模型组(P<0.05)。模型组异位内膜中SPARC、Snail、Vimentin呈高表达,E-cadherin呈低表达,经温经汤治疗后,异位内膜中SPARC、Snail、Vimentin的阳性表达减少,E-cadherin的阳性表达增加。温经汤中、高剂量组和孕三烯酮组异位内膜中SPARC、Snail、Vimentin的蛋白相对表达量均明显低于模型组(P<0.05),E-cadherin的蛋白相对表达量显著高于模型组(P<0.05)。温经汤高剂量组和孕三烯酮组异位内膜中Snail、Vimentin mRNA相对表达量均较模型组显著降低(P<0.05),E-cadherin mRNA相对表达量明显高于模型组(P<0.05)。结论温经汤可以降低EMT大鼠模型血清中SPARC水平,下调异位内膜中SPARC、Snail、Vimentin蛋白和mRNA表达,升高异位内膜中E-cadherin蛋白和mRNA表达,通过调控SPARC介导的上皮-间质转化,从而抑制异位内膜病灶的生长。

薄型子宫内膜大鼠95%乙醇造模法的实验研究

目的:探讨薄型子宫内膜大鼠三种造模法的应用价值,探索模型稳定性。方法:采用95%乙醇、脂多糖(LPS)、机械搔刮三种方法建立薄型子宫内膜大鼠模型,术后1周收取子宫内膜组织,HE及Masson染色检测子宫内膜厚度及纤维化面积,免疫组化检测细胞角蛋白CK19及波形蛋白Vimentin的表达以评估子宫内膜细胞的再生情况;通过线粒体凋亡诱导因子2的表达了解子宫内膜细胞线粒体凋亡情况。结果:三种方法均可使大鼠子宫内膜变薄,但光镜下机械组和LPS组子宫内膜结构紊乱,厚薄不均,不能均一地比较子宫内膜厚度,不利于后续实验的开展。与对照组相比,95%乙醇组化学损伤恒定、程度适合,子宫内膜变薄,纤维化面积增大;免疫组化染色95%乙醇组子宫内膜CK19和Vimentin表达均明显较少,线粒体凋亡诱导因子2显著增多。结论:95%乙醇造模法模拟薄型子宫内膜大鼠模型稳定且高效,可用于后续的科学研究。

大鼠子宫内膜损伤模型的建立与评价

目的建立大鼠子宫内膜损伤模型,并对模型进行评价。方法选取SD大鼠26只,每只大鼠左侧子宫作为模型组,右侧子宫作为对照组,左侧子宫宫腔注入体积分数95%乙醇0.3~0.5 m L持续5 min建立模型,右侧子宫注入等量生理盐水,术后2个动情周期后切除子宫,观察子宫内膜形态学改变,子宫内膜厚度及内膜损伤程度评分,用免疫组织化学方法检测子宫内膜表面中角蛋白(cytokeratin,CK18)、波形蛋白(vimentin)、整合素β3(integrinβ3)的表达。结果与对照组相比,模型组子宫质硬、粗细不均,形态不规则,宫壁厚薄不均,HE染色子宫内膜上皮细胞排列紊乱,间质充血、水肿,腺体数量减少,测得子宫内膜厚度明显变薄,损伤程度明显升高,免疫组织化学测得模型组CK18、波形蛋白、整合素β3的表达明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论体积分数95%乙醇可成功、有效地建立大鼠子宫内膜损伤的动物模型。

昆布多糖通过ERK通路对子宫内膜异位症模型大鼠异位病灶及血管新生的抑制作用

目的:探究昆布多糖(laminarin,LA)通过细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)通路对子宫内膜异位症(endometriosis,EMS)模型大鼠异位病灶及血管新生的抑制作用。方法:取45只SD大鼠,随机选择10只设为假手术组,并将EM模型大鼠32只随机分为模型组11只、昆布多糖组11只、激动剂组10只。激动剂组灌胃500μg/g LA混悬液,2 h后尾静脉注射10 ng/g表皮细胞生长因子(epidermalgrowthfactor,EGF)溶液;昆布多糖组灌胃500μg/g LA混悬液,1次/d;假手术组、模型组灌胃生理盐水10μL/g体质量,1次/d。均连续7 d。计算子宫内膜生长抑制率;免疫组织化学染色法观察微血管密度;酶联免疫吸附法检测腹腔灌洗液血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)水平;蛋白印迹法检测异位子宫内膜组织p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)、磷酸化p38 MAPK(phospho-p38 MAPK,p-p38 MAPK)、ERK1/2、磷酸化ERK(phospho-ERK,p-ERK)1/2蛋白表达。结果:与模型组对比,昆布多糖组异位子宫内膜生长抑制率升高,阳性细胞占比、腹腔灌洗液VEGF、子宫内膜组织p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-ERK1/2/ERK1/2水平降低(P<0.05)。与昆布多糖组对比,激动剂组异位子宫内膜生长抑制率降低,阳性细胞占比、腹腔灌洗液VEGF、子宫内膜组织p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-ERK1/2/ERK1/2水平升高(P<0.05)。结论:LA可抑制异位子宫内膜生长及内膜组织血管新生,抑制MAPK/ERK通路可能是其机制之一。

建立大鼠实验性子宫内膜炎模型的探讨

通过5%的氨水或3%的冰乙酸刺激大鼠子宫,然后子宫内接种能引起家畜子宫内膜炎的大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和溶血性链球菌的混和病原菌,建立了大鼠实验性子宫内膜炎模型。该模型可用于子宫内膜炎病因学和治疗学的研究。

大鼠子宫内膜异位模型的建立与组织学观察

目的为开发诊治子宫内膜异位症(endometriosis,EMT)的新药研究提供理想的动物模型。方法取雌性未交配性成熟大鼠,术前雌激素诱导,麻醉开腹取部份右侧子宫,将内膜种植于左腹壁内,术后16周取出包块,进行组织形态学、组织化学观察。结果异位内膜在腹壁内生长,呈隆起囊状小包块,内有黏液,具有正常子宫内膜基本组织结构,囊腔较大。异位内膜中有糖原、RNA的存在。结论该手术方法建立的子宫异位内膜生长良好,术后一周就可摸及包块大小,为开发研究子宫内膜异位症的新药提供了方便。

大鼠子宫内膜异位症模型的建立及其组织学观察

【目的】研究大鼠子宫内膜异位症模型的建立及异位病灶的组织学形态。【方法】采用外科诱导法对 80只大鼠行建模手术 ,在术后的第 3周、第 5周、第 7周和第 12周动态观察病灶的生长情况和大鼠的动情周期变化 ,取健侧子宫角中段的在位内膜、异位内膜行组织学研究。【结果】建模成功率为 6 5 % ;生长良好的囊肿囊内壁有内膜上皮细胞生长 ,有与正位子宫内膜接近同步的发情周期改变 ;病灶随移植时间的推延先逐渐增大之后又有缩小趋势 (P <0 0 5 ) ,同一时间内子宫旁韧带处病灶明显大于肠系膜处病灶 (P <0 0 5 )。【结论】将实验动物自体子宫内膜移植到子宫旁韧带或肠系膜上形成子宫内膜异位病理模型 ,是子宫内膜异位病实验研究的简便方法 ,此种异位内膜随动情周期有周期性改变 ,生理特性与正位子宫内膜基本相同。

大鼠子宫内膜炎模型复制及其中西药复方乳剂治疗

目的人工复制大鼠子宫内膜炎模型;应用自制中西药复方乳剂对子宫内膜炎模型大鼠进行治疗。方法对实验大鼠子宫眼观病变、子宫内容物及单侧子宫指数进行检查,对实验大鼠子宫进行病理组织学检查。结果应用3%冰乙酸对大鼠子宫进行刺激,第4天对大鼠子宫接种混合病原菌,能够稳定复制大鼠子宫内膜炎模型;中西药复方乳剂能明显降低大鼠子宫内细菌浓度、种类及单侧子宫系数,能明显减轻子宫的病理变化。结论中西药复方乳剂对子宫内膜炎模型大鼠有良好的治疗作用。

大鼠实验性子宫内膜异位症模型复制

大鼠实验性子宫内膜异位症模型复制江西中医学院病理教研室（南昌３３０００６）肖纯，黄桂林，彭泽华，匡冰近年来，子宫内膜异位症在我国的发病率明显增高￣（１），已成为一种常见的妇科疾病。激素类药物治疗本病虽然取得一定的疗效￣（２），但治疗期长，停药后复发及...

正交试验优化大鼠子宫内膜异位症模型

目的通过正交试验优化子宫内膜异位症大鼠模型的制备方法。方法采用自体移植法复制大鼠子宫内膜异位症模型和四因素二水平的正交设计,以移植物体积大小为评价指标,观察不同影响因素对大鼠子宫内膜异位症模型形成的影响及病理形态学变化。结果子宫内膜最佳种植部位在子宫旁韧带。发情情况及子宫内膜种植方向对实验结果的影响不明显。内膜不与肌肉层分离和外加雌激素对大鼠异位内膜生长起着关键性的作用。4个影响因素重要性依次为注射雌激素>不分离肌肉层>种植方向、发情情况。结论通过优化试验方法,可有效提高子宫内膜异位症大鼠模型的造膜效果,为科学评价子宫内膜异位症的药物研究提供技术平台。

大鼠子宫内膜异位症模型建立方法的探索

目的:探索一种简便有效的子宫内膜异位症大鼠动物模型建立方法以代替动情期造模。方法:成熟雌性SD大鼠60只,随机分为三组,分别于动情期造模(动情周期组)和非动情期造模(术后给雌激素组、术前+术后给雌激素组),观察三组大鼠的成模情况、异位囊肿生长情况、组织学形态的差异。结果:三组大鼠子宫内膜异位症模型成模率和异位囊肿体积的差异无显著性。结论:非动情期造模(术前或术前术后加用雌激素的方法)可代替动情期造模,方法简便、实用。

大鼠子宫内膜炎模型的建立及其动态病理学观察

【目的】建立大鼠子宫内膜炎模型，为子宫内膜炎的发病机理及其预防治疗研究提供合适的动物病理模型。【方法】将30只清洁级雌性大鼠随机分为感染组（22只）和对照组（8只），采用手术法给大鼠子宫腔内感染致病性大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、无乳链球菌（菌液体积比为2：1：1）的混合菌液，对照组大鼠未感染致病菌的混合菌液。分别于感染后第3，6，9，12天剖杀大鼠，检测其大体剖检病变和组织病理学变化，计算子宫指数，并对子宫内容物病原菌进行分离鉴定。【结果】感染后3～12d，感染组大鼠子宫指数均较对照组大鼠极显著增加（P〈O．01），感染大鼠子宫出现急性卡他性炎症（感染后第3天和第6天）、化脓性炎症（感染后第9天）和慢性增生性炎症（感染后第12天）；感染前期可见子宫内膜上皮细胞脱落，黏膜层水肿、充血、出血，炎症细胞浸润；感染后期可见肌层增厚等病变。【结论】采用手术法成功建立了大鼠子宫内膜炎模型，且感染后第3天为造模成功的最佳时间。

温经止痛方对子宫内膜异位症模型大鼠自嗜基因Beclin-1、LC3表达的影响

【目的】探讨温经止痛方对子宫内膜异位症(EMS)模型大鼠子宫在位/异位内膜自噬基因Beclin-1、LC3表达的影响。【方法】将90只大鼠随机分为假手术组,模型组,中药高、中、低剂量组,西药组等6组,每组15只。中药高、中、低剂量组大鼠给予温经止痛方(剂量分别为74、37、18.5 g·kg^(-1)·d^(-1))灌胃;西药组大鼠给予孕三烯酮胶囊(剂量为0.5 mg·kg^(-1)·d^(-1))灌胃,每周2次;模型组及假手术组大鼠给予等量生理盐水灌胃。均给药8周。采用苏木素—伊红(HE)染色观察子宫内膜病理学变化,分别采用实时定量PCR(qPCR)法、免疫组化法检测在位、异位内膜中Beclin-1、LC3 m RNA及蛋白的表达。【结果】给药后中药高剂量组及西药组异位病灶较给药前缩小(P<0.05)。模型组在位、异位内膜上Beclin-1、LC3 mRNA及蛋白表达水平低于假手术组(P<0.01)。中药高剂量组及西药组的在位、异位内膜上的LC3及Beclin-1 m RNA及蛋白表达水平高于模型组(P<0.01)。【结论】EMS的发生可能与Beclin-1、LC3表达失调有关。温经止痛方可有效缩小异位灶,调整Beclin-1、LC3的表达,抑制异位内膜生长。

子宫内膜异位症气滞血瘀证大鼠模型的建立及评价

目的:采用多因素整合方法建立子宫内膜异位症气滞血瘀证大鼠模型,为深入研究子宫内膜异位症气滞血瘀证的病理机制和治疗药物提供合适的动物模型。方法:在自体内膜移植法建立子宫内膜异位症疾病模型的基础上,采用药物加情志刺激等多因素干预方法造成气滞血瘀证候模型,观察模型大鼠的外部体征和行为学表现、在位和异位内膜的组织形态学表现、血管内皮因子、单胺类神经递质等的变化,对子宫内膜异位症气滞血瘀证大鼠模型进行评价。结果:大鼠建模成功率为78%;病证结合组NO含量较疾病模型组、伪手术组均增高,差异有显著性(P<0.05);病证结合组ET含量较疾病模型组增高,差异有显著性(P<0.05);与疾病模型组相比,病证结合组血清DA、NE含量均明显增高,差异有显著性(P<0.05)。结论:多因素整合方法建立的子宫内膜异位症气滞血瘀证大鼠模型基本符合子宫内膜异位症的病理特征和中医证候特点。

大鼠薄型子宫内膜模型的建立和鉴定

为探索宫腔注入无水乙醇建立薄型子宫内膜模型的可行性,将25只大鼠分3组:对照组(宫腔注入生理盐水),5分钟组(宫腔注入无水乙醇并贮留5 min),10分钟组(宫腔注入无水乙醇并贮留10 min),经测量子宫内膜变薄者为造模组,5分钟组有14个子宫内膜变薄,10分钟组无一例纳入造模组.免疫组织化学检测角蛋白、波形蛋白、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、雌激素受体α(estrogen related recep-tor alpha,ERα)的表达.结果发现5分钟组造模组与对照组单位内膜面积中角蛋白面积、单位间质面积中波形蛋白面积和子宫内膜中VEGF平均光密度差异有统计学意义(P<0.05),造模组与对照组子宫内膜ERα组织学积分无差异(P>0.05).表明宫腔注入无水乙醇并贮留5 min可以成功建立薄型子宫内膜模型,成功率为70%.

子宫内膜异位症大鼠模型自体移植部位的比较

目的采用自体移植方法建立子宫内膜异位症大鼠模型,比较不同移植部位的建模效果。方法取40只雌性、成熟未交配SD大鼠,将自体子宫内膜组织分别移植于卵巢、宫骶韧带及腹壁上,术后28d手术取出移植物,测量移植物的体积和质量,对移植物进行组织形态学观察并比较不同部位的成模率。结果卵巢部位移植物体积和质量大于其他两个部位(P<0.05),而宫骶韧带及腹壁部位的移植物体积及质量差异无统计学意义。3个不同部位的成模率差异无统计学意义,且移植物组织病理学相似。结论卵巢、宫骶韧带及腹壁3个部位的自体子宫移植均可建立子宫内膜异位症模型,病理改变与子宫内膜异位症患者相似,但卵巢部位建模效果最佳,更有利于子宫内膜异位症新的治疗方法的开发及研究。

子宫内膜异位症大鼠内膜窗口期模型的建立

目的研究子宫内膜异位症(EMs)患者窗口期的子宫内膜容受性,构建EMs大鼠内膜窗口期动物模型。方法取性成熟SD大鼠22只,通过手术将SD大鼠自体子宫内膜组织移植至同侧腹壁及对侧子宫系膜上,建立诱发型EMs大鼠动物模型。术后4周随机选取2只大鼠解剖观察异位内膜的生长情况,确定造模成功后,将EMs模型大鼠与雄鼠同笼交配,次日观察阴栓,妊娠第5天剖腹观察20只模型大鼠异位内膜的存活情况,并对在位子宫内膜及异位内膜进行组织形态学观察。结果 20只妊娠第5天大鼠均有明显的异位病灶,在腹壁及系膜上均呈小包块样生长,且与周围组织有不同程度的粘连,光镜下见异位子宫内膜形态具有正常子宫内膜基本组织结构,EMs大鼠造模成功;所有EMs模型大鼠与雄鼠同笼交配次日均见阴栓,妊娠第5天大鼠非手术侧子宫腔内不同程度积液,在位及异位内膜均处于分泌期。结论通过自体子宫内膜移植法成功建立了EMs大鼠模型;EMs模型大鼠子宫内膜处于胚胎着床窗口期,为研究EMs子宫内膜容受性提供了动物模型。

子宫内膜异位症模型大鼠异位组织中巨噬细胞和凋亡细胞数的变化及活血化瘀中药的影响

目的 :探讨巨噬细胞与子宫内膜异位症 (EMT)的关系及活血化瘀中药对其的影响。方法 :制作大鼠EMT动物模型 ,模型鼠连续用药 3w后观察在位、异位组织中巨噬细胞和凋亡细胞数的变化以及异位子宫内膜上皮及腺上皮细胞的凋亡指数。结果 :模型对照组内膜巨噬细胞数比正常大鼠增多 ,异位比在位组织中增多非常显著。中药治疗前后巨噬细胞数无显著变化。模型对照组细胞凋亡指数 ,基质细胞凋亡数非常显著小于用药组。结论 :活血化瘀中药能促进异位组织消退 ,促进异位内膜细胞凋亡。