siRNA干扰ADAR1表达对小鼠混合淋巴细胞培养的影响

目的:研究靶向ADAR1基因的siRNA在小鼠双向混合淋巴细胞培养中所扮演的角色.方法:将化学合成的靶向ADAR1基因的siRNA在Lipofectamine 2000介导下转染处于双向混合淋巴细胞培养试验中的小鼠淋巴细胞,观察转染组与未转染组细胞表型的变化;通过RT-PCR检测两组细胞中ADAR1 mRNA的变化;细胞计数和台盼蓝拒染法检测靶向ADAR1基因的siRNA对小鼠淋巴细胞增殖的抑制作用;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法评价转染化学合成的靶向ADAR1基因的siRNA后对小鼠淋巴细胞增殖的抑制作用.结果:在经典淋巴细胞混合培养试验中,转染靶向ADAR1基因的siRNA可以明显降低小鼠淋巴细胞内ADAR1的表达,同时ADAR1-siRNA对小鼠淋巴细胞的增殖有抑制作用.结论:在经典淋巴细胞混合培养试验中,化学合成的靶向ADAR1基因的siRNA能有效抑制ADAR1基因在小鼠淋巴细胞中的表达,并对小鼠淋巴细胞增殖有抑制作用.

siRNA干扰技术对沉默CKIP-1基因大鼠进展性牙周炎影响的研究

目的:通过siRNA干扰技术沉默络蛋白激酶2-作用蛋白1(CKIP-1)基因,以观察其对大鼠牙周炎发生发展的影响。方法:取SPF级SD大鼠9只,并将其随机分为空白对照组(BC组)、阴性对照组(NC组)、阳性对照组(PC组)(n=3)。其中NC、PC两组均采用双侧上颌第二磨牙细线结扎和注射LPS-PG的方法建立牙周炎模型,并在造模期间对PC组注射CKIP-1 siRNA干扰;NC组注射生理盐水作为对照。造模加干预4周后,分别对所有大鼠的双侧上颌骨进行Micro-CT扫描,分析其骨缺损高度和根分叉处牙槽骨体积的变化;然后再取其双侧上颌骨标本并制作近远中向牙周牙体组织联合切片,常规HE染色观察其牙槽骨破坏及牙周组织炎症反应情况。结果:Micro-CT扫描显示:NC组的骨缺损程度大于PC组,其牙槽骨吸收高度(mm)分别为0.9606±0.1112、0.6759±0.0514,根分叉处牙槽骨体积(%)分别为0.5958±0.014、0.7509±0.0355(P<0.05)。组织学观察显示:相比于PC组,NC组大鼠的牙槽骨吸收更明显,且牙周膜纤维排序紊乱。结论:通过siRNA干扰技术沉默CKIP-1基因后,可减少大鼠牙周炎模型的骨缺损破坏程度及炎症反应。

猪杀菌/通透性增加蛋白基因siRNA载体构建及干扰效果评价

本研究旨在构建并筛选猪(Sus scrofa)BPI基因的高效siRNA干扰载体,为在细胞水平上研究猪BPI基因的功能和作用机制提供基础。参照猪BPI基因(GenBank登录号:EF436278)全长编码区序列,设计其特异性发夹siRNA干扰片段,并将其克隆插入pcDNA 6.2-GW/EmGFPmiR干扰载体中,构建猪BPI基因4个干扰siRNA表达载体RB1、RB2、RB3和RB4,1个阴性对照NC,并通过PCR和测序进行验证,构建成功后转染猪小肠上皮细胞IPEC-J2并检测其干扰效率。结果发现,所构建的4个特异性siRNA载体均可显著降低猪BPI基因mRNA表达(P<0.05),其中RB4载体干扰效果最好,其干扰效率达到69%。本研究成功筛选可靶向干扰猪BPI基因的高效siRNA,为今后在细胞水平进一步研究BPI基因对猪肠道革兰阴性菌感染抗性的作用及其机制奠定了试验基础。

干扰RNA的非靶免疫副作用及其siRNA序列设计与化学修饰

siRNA介导的RNA干扰技术已经成为基因功能研究和开展疾病治疗的有用工具.近年发现,siRNA在哺乳动物体内可激活天然免疫系统,诱导干扰素等炎症因子的分泌,并且可非特异性抑制某些非靶基因的表达,有可能极大限制RNA干扰技术的应用.进行高效特异性siRNA的设计和修饰,以保持或者增强siRNA的特异性靶基因沉默作用,又消除siRNA对机体的非靶免疫副作用,成为使siRNA安全有效应用于临床治疗的关键.

CTGF siRNA联合电针治疗对大鼠损伤脊髓星形胶质细胞GFAP表达的影响

目的:探讨抗CTGF小干扰RNA(small interferon RNA,siRNA)局部注射联合电针治疗对脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响。方法:将SD大鼠随机分为SCI组、CTGF siR-NA干扰(CTGF)组、CTGF siRNA干扰联合电针(EA+CTGF)组。制作大鼠SCI模型,将含有CTGF siRNA/Invivo-fectamine复合物溶液的明胶海绵移植入CTGF组和EA+CTGF组大鼠的脊髓(T10)损伤断端,SCI组用Invivo-fectamine转染试剂代替。EA+CTGF组在模型制备后每天的固定时间给予电针治疗。各组在3 d、7 d、14 d后分别取材,应用免疫荧光组织化学、Western Blot和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)观察星形胶质细胞的形态、数量和GFAP、GFAP mRNA表达变化。结果:SCI组星形胶质细胞反应性增生、胞体肥大,损伤边缘区形成GFAP强表达的胶质界膜;CTGF siRNA干预后,GFAP表达减弱,胞体减小,GFAP阳性细胞数减少;EA+CTGF组GFAP免疫反应表达明显降低,损伤边缘区GFAP荧光强度与脊髓其它区域基本相同。Western Blot结果显示:与SCI组相比,CTGF组与EA+CTGF组的GFAP均减少,有统计学意义(P<0.05),与CTGF组相比,EA+CTGF组的GFAP减少,有统计学意义(P<0.05);RT-PCR电泳结果表明损伤早期EA+CTGF组GFAP mRNA表达明显低于损伤组并有显著性差异(P<0.01),变化与Western Blot结果是一致的。结论:SCI后,CTGF siRNA联合电针治疗能有效阻止GFAP表达,使胶质反应减轻,有助于神经功能恢复。

鞘内注射针对Toll样受体4基因的siRNA缓解坐骨神经结扎大鼠的神经病理性疼痛

目的观察坐骨神经结扎(CCI)大鼠鞘内注射针对Toll样受体4基因(TLR4)的siRNA(TLR4-siRNA)的镇痛作用及对脊髓TLR4、IL-1β、TNF-α表达的影响。方法大鼠随机分为4组(每组10只):假手术组、CCI组(鞘内注射生理盐水)、错配siRNA组(鞘内注射错配siRNA)及siRNA-TLR4组(鞘内注射TLR4-siRNA)。后3组大鼠均行右侧坐骨神经结扎术,并行L5～L6鞘内置管;假手术组仅暴露坐骨神经而不结扎。TLR4-siRNA组大鼠从CCI术前1 d开始鞘内注射脂质体包裹的有效TLR4-siRNA(10μg/30μl),连续7 d;CCI组、错配siRNA组分别注射等量生理盐水和错配siRNA。采用热辐射及von Frey测痛丝分别测定各组大鼠的热痛阈及机械性痛阈;采用实时定量RT-PCR法观察各组大鼠脊髓组织TLR4 mRNA的表达;采用ELISA法测各组大鼠脊髓组织炎症因子IL-1β、TNF-α的含量。结果与假手术组相比,坐骨神经结扎后,大鼠热痛阈及机械性痛阈降低,脊髓TLR4 mRNA表达量增加,脊髓组织IL-1β、TNF-α的含量也增加(P<0.05)。与生理盐水组及错配siRNA组相比,鞘内注射TLR4-siRNA可抑制坐骨神经结扎引起的热痛觉过敏及机械性异常性疼痛(结扎后1、3、7 d,P<0.05),降低脊髓TLR4 mRNA表达(P<0.05),降低脊髓IL-1β、TNF-α含量(P<0.05)。结论鞘内注射TLR4-siRNA可通过干扰大鼠脊髓TLR4基因表达抑制其信号通路下游炎症因子的水平,进而缓解坐骨神经结扎引起的神经病理性疼痛。

慢病毒载体介导IκB激酶-α(IKKα)基因RNA干扰转基因小鼠的制备

IκB激酶-α(IKKα)的功能与淋巴形成和乳腺发育相关,在乳腺肿瘤中观察到IKKα蛋白的过量表达.应用小鼠受精卵卵周隙注射慢病毒载体的方式,建立IKKα基因RNAi转基因小鼠模型,为在体内研究IKKα基因的生物学功能及其与肿瘤发生的关系创造条件.实验构建了针对IKKα基因RNAi(剔降)的慢病毒载体,并将载体导入小鼠受精卵卵周隙,获得携带该载体的转基因小鼠模型,经PCR鉴定首建鼠阳性率为15%.转基因小鼠外周血细胞IKKαmRNA表达量明显降低.初步表型观察分析,IKKα基因RNAi小鼠发育正常,进一步的分析工作正在进行中.

S100A4 siRNA对佐剂性关节炎大鼠炎症及细胞因子的影响

目的研究S100A4siRNA对关节炎大鼠炎症及细胞因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-1β和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法建立大鼠佐剂性关节炎模型,造模后第11天给模型干扰组大鼠关节腔内注射S100A4siRNA片段。观察各组大鼠关节炎指数(AI)的变化及踝关节的病理变化;ELISA检测血清TNF-α、IL-1β和VEGF的表达变化。结果模型干扰组大鼠TNF-α、IL-1β和VEGF表达水平均比模型组降低(P<0.05);AI值及踝关节病理积分与模型组比较显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论抑制S100A4基因表达,能显著降低致炎细胞因子TNF-α、IL-1β及促血管生成因子VEGF的表达,减轻关节滑膜的病理损伤。

小分子干扰RNA抑制大鼠肾细胞Ppif基因的表达

目的研究siRNA对大鼠肾细胞(NRK)Ppif基因的抑制作用。方法根据大鼠Ppif基因序列设计并化学合成3对siRNA及1对阴性对照siRNA,并在5′端标记FAM羧基荧光素,以LipofectamineTM2000转染入大鼠肾细胞,用RT-PCR和Western blot分别检测Ppif基因和蛋白表达量的改变,验证所设计的siRNA的抑制效应。结果以Li-pofectamineTM2000转染所设计的siRNA进入NRK细胞,转染效率>90%。起始于405、556位点的siRNA在基因水平对Ppif无明显抑制效应(P>0.05),起始于198位点的siRNA在基因和蛋白水平均有明显的抑制效应,基因水平下降75.25%(P<0.05);蛋白水平下降72.13%(P<0.05)。结论起始于198位点的siRNA对大鼠肾细胞的Ppif基因有明显的抑制效应。

RNA干扰用siRNA的体外转录合成

RNA干扰(RNAinterference,RNAi)作为一种特异性沉默基因表达的方法,正在成为研究基因功能、胚胎发育及病毒性疾病治疗的重要工具,而获得符合干扰要求的短双链干扰RNA(smallinterferenceRNA,siRNA)是进行RNA;研究的首要步骤。本研究建立了体外转录合成siRNA方法,并用其生成的siRNA干扰鸡成纤维细胞外源绿荧光蛋白(GFP)基因和内源3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因的表达。结果显示,siRNA能特异性降低鸡成纤维细胞中内外源基因的表达。本实验认为这种以DNA为模板体外转录合成siRNA方法操作简单、成本低、产物得率高,值得从事RNA研究者参考借鉴。

RNA干扰下调血管紧张素转换酶和血管紧张素Ⅱ 1型受体对自发性高血压大鼠血压及肾脏损伤的影响

目的用RNA干扰下调血管紧张素转换酶(ACE)和血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R),观察其对自发性高血压大鼠(SHR)血压及肾脏的影响。方法 SHR随机分为5组:即空白对照组(注射0.9%氯化钠注射液);病毒对照组(注射对照腺病毒);Ad5-AT1R-shRNA治疗组;Ad5-ACE-shRNA治疗组;SHR Ad5-ACE-AT1RshRNA治疗组[分别注射表达ACE基因,AT1R基因,ACE和AT1R基因特异短发夹RNA(shRNA)的重组腺病毒载体];同时设WKY正常血压对照组(注射0.9%氯化钠注射液)。以上各组大鼠均于实验的第1,17天各注射1次,干预前后检测血压、心率的变化。于首次注射后第3天,用实时荧光定量PCR检测肾脏ACE和AT1R m RNA的表达;用蛋白质印迹法检测肾脏ACE和AT1R蛋白的表达。实验结束时做肾脏组织光镜病理检查。结果Ad5-AT1R-shRNA治疗组;Ad5-ACE-shRNA治疗组;SHR Ad5-ACE-AT1R-shRNA治疗组于每次注射后,尾动脉压分别下降达24 mmHg(1 mmHg=0.133 k Pa)、22 mmHg、26 mmHg左右,单次注射后降压作用至少可持续15 d左右,累计降压幅度分别达39 mmHg、37 mmHg、43 mmHg;SHR空白对照组和病毒对照组血压则持续升高约26 mmHg,且2组比较差异无统计学意义;WKY组尾动脉压无明显变化,治疗组(Ad5-ACE-AT1R-shRNA、Ad5-ACE-shRNA)肾脏组织中的ACEm RNA和治疗组(Ad5-AT1R-shRNA、Ad5-ACE-AT1R-shRNA)肾脏组织中的AT1R m RNA的表达明显低于空白对照组、病毒对照组(P<0.05),而与WKY组比较差异无统计学意义。SHR治疗组肾脏组织的AT1R蛋白表达均较SHR空白对照组、SHR病毒对照组显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);观察显示治疗组肾脏细胞结构明显改善。结论 RNA干扰下调ACE和AT1R表达,降低自发性高血压大鼠血压并改善肾脏损伤,尤以Ad5-ACE-AT1R-shRNA治疗组效果明显而且副作用少。RNA干扰对高血压的基因治疗具有良好应用前景。

采用GFP标记筛选抑制多血清型口蹄疫病毒3C基因表达的siRNA

为筛选出可抑制多种血清型口蹄疫病毒(FMDV)的小干扰RNA(siRNA),本试验通过多血清型口蹄疫病毒序列比对与siRNA设计分析,筛选出潜在抗多血清型siRNA位点;通过体外合成A型、O型和Asia I型病毒部分基因序列,制备绿色荧光蛋白(GPF)基因融合表达载体;将化学合成的siRNA与融合表达载体共转染,通过GFP观察、Western blot和实时荧光定量反转录PCR(qRT-PCR)方法检验目标siRNA对融合基因的抑制效率。生物信息分析发现,多血清型口蹄疫病毒3C基因高度保守并存在潜在siRNA作用靶位,GFP-3C融合表达载体成功构建,与化学合成的siRNA1-3C共转染293T细胞,GFP观察发现,siRNA1-3C可有效抑制来源于A型、O型和Asia I型3C基因的GFP-3C荧光信号且持续时间达72 h,Western blot检测证实此结果。qRT-PCR检测发现,siRNA1-3C对3个GFP-3C融合基因转录水平抑制效率超85%,且作用可维持72 h。本试验利用GFP作为筛选标记成功筛选出1个作用于FMDV 3C基因的siRNA,为开发多血清型口蹄疫抑制剂提供参考依据。

YKL-40 RNA干扰对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化的影响

目的研究YKL-40 RNA干扰(RNAi)对载脂蛋白E基因敲除小鼠(apoE^-/-小鼠)动脉粥样硬化(AS)的影响。方法72只apoE^-/-小鼠高脂饮食并采用左颈总动脉缩窄性套管法诱导AS形成。8周后apoE^-/-小鼠随机分为对照组,病毒阴性对照(NC)组和观察组,并分别转染生理盐水、阴性对照病毒、YKL-40 RNA干扰慢病毒。转染6周后颈动脉斑块制作切片并进行HE和油红O染色,然后对斑块组分进行分析;采用ELISA法检测血浆单核细胞趋化因子-1(MCP-1)及脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)水平。结果慢病毒转染6周后,与对照组及NC组相比,观察组血浆YKL-40浓度明显降低(P<0.05);且观察组小鼠血浆炎症因子表达水平明显降低(P<0.05)。YKL-40 RNAi可增加颈动脉斑块纤维帽厚度,降低斑块脂质含量并减少斑块面积,进而增加斑块稳定性。本研究中RNAi的有益作用独立于降脂作用之外。结论YKL-40 RNAi可降低炎症基因表达并增加斑块的稳定性,且这种作用独立于降脂作用之外。

siRNA-pool抑制大鼠脊髓背角神经细胞TDAG8的表达

目的观察siRNA-pool对大鼠脊髓背角神经细胞(rat neurons-dorsal spinal cord cells,RNdsc)上T细胞死亡偶联基因8(T-cell death-associated gene 8,TDAG8)表达的影响。方法设计并合成针对TDAG8的siRNA 3对(siRNA63、siRNA341、siRNA897)及一条带绿色荧光标记的阴性对照siRNA。在阳离子聚合物纳米粒jetPEITM介导下转染RNdsc。RNdsc细胞随机分为正常(normal)组,载体(vehicle)组,阴性对照(mismatch)组,siRNA 50、100、200 pmol组。转染24 h后,荧光显微镜下计算转染复合物的转染效率,用MTT法检测转染复合物的细胞毒性,采用real-time PCR及Western blot测定siRNA-pool的干扰效率。结果采用jetPEITM作为转染介质转染效率高达98.9%。转染复合物的细胞毒性低,各组细胞成活率差异无统计学意义。siRNA 50、100、200 pmol可剂量依赖性地抑制TDAG8的表达,siRNA200 pmol组对TDAG8 mRNA表达的抑制率达88%,对TDAG8蛋白的表达抑制率达73%。结论 siRNA-pool能高效地抑制RNdsc上TDAG8的表达。

RNA干扰GPR14对自发性高血压大鼠血压和心血管重构的影响

目的观察RNA干扰技术下调尾加压素Ⅱ(UⅡ)特异性受体G蛋白偶联受体14(GPR14)对自发性高血压大鼠(SHR)血压和心血管重构的影响。方法 SHR或Wistar-Kyoto(WKY)大鼠均随机分为两组:裸病毒(Ad)对照组和Ad-GPR14-shRNA治疗组,分别尾静脉注射对照Ad和表达GPR14基因特异短发夹RNA(shRNA)的重组腺病毒载体Ad-GPR14-shRNA。注射前1周和注射后0、1、2、3、4周检测心脏、胸主动脉GPR14表达情况和尾动脉压变化情况。检测注射后2周心脏、胸主动脉和肠系膜上动脉组织病理学。结果 Ad-GPR14-shRNA注射后1周即显著降低WKY大鼠和SHR心脏、胸主动脉GPR14表达和尾动脉压,该效果可持续至第4周,2周时最明显,并且SHR大鼠降低更显著;Ad-GPR14-shRNA治疗2周时SHR组左心重/体质量显著下降、心肌细胞横断面积显著减少、心肌纤维化显著减弱、主动脉和肠系膜上动脉中膜厚度/官腔内径比值显著下降。结论 RNA干扰能有效降低心肌和血管GPR14表达,降低SHR血压并改善心血管重构,靶向GPR14的RNA干扰有望成为高血压病基因治疗的有效方法。

用聚乙烯亚胺反向转染siRNA表达盒进行RNA干扰的研究

目的:建立适用于大规模RNA干扰(RNAi)筛选的siRNA生成与导入技术。方法:以绿色荧光蛋白(GFP)为模型,用PCR方法生成了包含U6启动子、互补的反义链和正义链以及终止序列的特异性siRNA表达盒(SEC),对聚乙烯亚胺(PEI)介导的转染SEC的方法及其效率进行研究。结果:PEI对细胞的毒性呈剂量依赖关系,当PEI与DNA的N/P=7.53,即PEI与DNA等量时,转染效率达到最高。PEI与脂质体LipofectAMINETM2000的转染效率无显著差异(P>0.05),对SEC的转染效率显著高于质粒载体(P<0.01)。反向转染的转染效率显著高于常规转染(P<0.01)。利用PEI将表达GFP特异性siRNA的SEC反向转染可稳定表达GFP的HeLa细胞株(HeLa-EGFP),荧光染色和Western印迹检测均表明可显著抑制GFP的表达。结论:PEI介导的SEC反向转染具有简便、快捷、经济的优点,可满足大规模RNAi筛选的需要。

siRNA干扰BMI-1基因对膀胱癌EJ细胞增殖的调控作用及其机制

目的:对比观察膀胱癌EJ细胞及人膀胱移行上皮细胞中BMI-1基因及下游p16INK4a、p14ARF基因的mRNA及蛋白表达水平,探讨siRNA干扰BMI-1基因后对EJ细胞增殖的影响及其调控机制。方法:细胞免疫荧光观察BMI-1、p16INK4a和p14ARF蛋白在EJ细胞中表达情况及定位。Real-time RT-PCR检测EJ细胞及膀胱正常移行上皮细胞中3种基因的表达水平,Western blotting检测蛋白水平。构建干扰BMI-1基因siRNA,通过脂质体转染导入EJ细胞中,设立空白对照和阴性干扰对照组,检测BMI-1及下游p16、p14基因表达水平及蛋白表达水平的变化;以CCK-8检测细胞生长观察siRNA干扰BMI-1表达对EJ细胞增殖的抑制作用;用流式细胞术分析细胞凋亡的改变。结果:BMI-1mRNA及蛋白水平在EJ细胞表达高于膀胱移行上皮细胞,而p16INK4a和p14ARFmRNA及蛋白在EJ细胞表达水平稍低于膀胱移行上皮细胞。siRNA干扰BMI-1后可以上调EJ细胞中其下游p16和p14 mRNA及蛋白水平,使EJ细胞增殖能力下降,细胞凋亡增多。结论:siRNA干扰BMI-1基因表达对EJ细胞的体外生长具有明显的抑制作用,其作用机制与上调其下游p16INK4a、p14ARF基因的表达有关。

RNA干扰治疗慢性心力衰竭大鼠的实验研究

目的利用RNA干扰(RNAi)技术抑制心力衰竭(心衰)大鼠受磷蛋白(PLN)mRNA的表达,改善心脏功能。方法选用SD大鼠40只,对照组7只;其余33只造心衰模型,存活21只,随机分为心衰组、rAAV2-phRi1组,rAAV2-phRi2组,每组7只;rAAV2-phRi导入后30天测定血流动力学,逆转录聚合酶链反应检测心肌PLN mRNA,定磷法测定肌浆网Ca2+-ATP酶(SERCA2a)活性。结果rAAV2-phRi导入30天时,与心衰组比较,rAAV2-phRi1及rAAV2-phRi2对PLN mRNA的抑制效率为85.32%和67.65%,SERCA2a活性增加了104%和74%,血流动力学显著改善(P<0.05),达到对照组水平(P>0.05);rAAV2-phRi1的抑制效率、对心功能的改善显著优于rAAV2-phRi2。结论体内水平上,RNAi能够抑制心衰大鼠PLN mRNA表达,改善心脏功能。

siRNA干扰嘌呤补救合成途径的关键酶对弓形虫增殖的抑制作用

目的探讨siRNA同时干扰嘌呤补救合成途径中两个关键酶对弓形虫增殖速率的影响。方法将针对腺苷激酶(AK)和次黄嘌呤-黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HXGPRT)的siRNA同时电转染弓形虫,然后将弓形虫接种人包皮成纤维细胞(HFF),24h和40h后Giemsa染色,光镜下计数假包囊内弓形虫速殖子数目,计算弓形虫平均倍增次数。同时将弓形虫进行模拟电转,接种HFF细胞后,不加磺胺嘧啶进行培养作为阴性对照,加入10μg/mL磺胺嘧啶培养作为阳性对照。结果在接种HFF细胞后24h,4μmol/L的AK siRNA786和HXGPRT siRNA415联合电转弓形虫、阳性对照组及阴性对照组弓形虫的平均倍增次数分别为:1.64±0.95、1.04±0.88及2.32±0.90,前两组与后者相比倍增次数明显减少(P<0.05)。在接种后40h,siRNA联合电转弓形虫与阳性对照组弓形虫的平均倍增次数分别为3.00±1.04,2.56±1.04,与阴性对照组相比(3.60±0.80)差异有显著性(P<0.05)。结论嘌呤补救合成途径中的两个关键酶-AK和HXGPRT被其siRNA同时抑制后,弓形虫在细胞内的增殖速率显著减缓。