川芎多糖调节p38 MAPK/NF-κB信号通路对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响

目的:探讨川芎多糖(LCPS)调节p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)/核因子-κB(NF-κB)信号通路对大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的影响。方法:将144只大鼠数字编码后按照随机数字表法分为假手术组、模型组、盐酸维拉帕米(VH)组(20 mg/kg)和LCPS低剂量组(50 mg/kg)、LCPS中剂量组(100 mg/kg)、LCPS高剂量组(200 mg/kg),每组24只大鼠。给药预处理14 d后,采用阻断冠状动脉左前降支30 min制备MIRI大鼠模型。再灌注2 h后,通过2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色法、心脏超声法、苏木精-伊红(HE)染色法检测大鼠心肌梗死面积、心功能指标[左室舒张末期压力(LVEDP)、左室收缩末期压力(LVESP)、左室内压最大上升速率(+dp/dt_(max))、左室内压最大下降速率(-dp/dt_(max))]和心肌组织病理变化;酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清心肌酶和心肌组织炎性因子水平;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测心肌组织p38 MAPK/NF-κB信号通路相关蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠心肌梗死面积、LVEDP、病理评分、心肌酶[乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)]水平、炎性因子[白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α]水平、p-p38 MAPK、p-NF-κB p65蛋白相对表达量及p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-NF-κB p65/NF-κB p65比值升高,LVESP、+dp/dt_(max)、-dp/dt_(max)降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,VH组、LCPS中剂量组和LCPS高剂量组心肌梗死面积、LVEDP、病理评分、心肌酶水平、炎性因子水平、p-p38 MAPK、p-NF-κB p65蛋白相对表达量及p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-NF-κB p65/NF-κB p65比值降低,LVESP、+dp/dt_(max)、-dp/dt_(max)升高,差异均有统计学意义(P<0.05),且LCPS上述效应呈一定的剂量依赖性。除+dp/dt_(max)、-dp/dt_(max)、IL-1β外,LCPS高剂量组对其他指标的影响优于VH组(P<0.05)。结论:LCPS对大鼠MIRI和心功能有保护作用,其机制可能与抑制p38 MAPK/NF-κB信号通路及其介导的炎症反应有关。

基于NF-κB/MAPK通路探讨五味子甲素对心肌缺血再灌注损伤大鼠的保护作用

目的:探讨五味子甲素(DSD)对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠的保护作用及其对核因子κB(NF-κB)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路的作用机制。方法:将无特定病原体(SPF)组雄性SD大鼠分为假手术组(仅穿线不结扎,生理盐水灌胃)和造模大鼠(MIRI模型)。将造模成功大鼠随机分为模型组(生理盐水灌胃)、阳性药物组(复方丹参滴丸8.5 mg/kg灌胃)、DSD低剂量组(DSD 20 mg/kg灌胃)、DSD中剂量组(DSD 40 mg/kg灌胃)、DSD高剂量组(DSD 80 mg/kg灌胃),每组20只。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌红蛋白(Mb)和心肌肌钙蛋白I(cTnI);氯化三苯基四氮唑(TTC)测量心肌梗死面积;苏木精-伊红(HE)染色观察心肌组织病理变化;检测心肌组织丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平;酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6);蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测大鼠心肌组织NF-κB/MAPK通路相关蛋白的表达。结果:与假手术组比较,模型组MIRI大鼠心肌组织肌纤维弯曲,肌细胞减少,肿胀明显,细胞核严重固缩,血清CK-MB、Mb、cTnI水平、心肌梗死面积、心肌细胞凋亡率、MDA、TNF-α、IL-6含量及p-NF-κB p65、磷酸化NF-κB抑制蛋白(p-IκBα)、磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2(p-ERK1/2)、p-p38蛋白水平均升高,SOD活性降低(P<0.05)。与模型组比较,阳性药物组和DSD各剂量组大鼠心肌组织损伤减轻,肌纤维形态完整,肌细胞增加,无明显肿胀,细胞核固缩减轻,血清CK-MB、Mb、cTnI水平、心肌梗死面积、心肌细胞凋亡率、MDA、TNF-α、IL-6含量及p-NF-κB p65、p-IκBα、p-ERK1/2、p-p38蛋白水平均降低,SOD活性升高(P<0.05)。结论:DSD通过抑制NF-κB/MAPK通路,对MIRI大鼠发挥保护作用。

上调缺氧诱导因子对老龄小鼠心肌缺血再灌注损伤保护作用的实验研究

目的:分析上调缺氧诱导因子(HIF)对老龄大鼠心肌缺血再灌注(I/R)损伤的保护机制。方法:选择40只SPF级健康老年雄性C57小鼠为研究对象,适应性饲养1周后将其随机分为A、B、C、D四组,每组各10只。A组不做任何处理,B、C、D组均构建小鼠心肌I/R损伤模型,C组于缺血前2 h腹腔注射100 mg/kg HIF-1α激活剂[二甲基乙二酰基甘氨酸(DMOG)],D组于缺血前2 h腹腔注射15 mg/kg HIF-1α抑制剂[2-甲氧基雌二醇(2-ME2)]。比较四组小鼠给药前、给药1、2 h的心率、心肌收缩张力、左室内压最大上升/下降速率、心肌梗死面积情况,以免疫荧光技术、Western blot检测心肌细胞HIF-1α及α-微管蛋白表达。结果:给药后1、2 h,B组、C组和D组小鼠的心率、心肌收缩张力、左室内压最大上升/下降速率较给药前均降低,且D组低于B组、C组,B组低于C组,差异有统计学意义(均P<0.05)。给药后2 h,B组、D组小鼠心肌梗死面积的危险区/左心室、梗死区/左心室、梗死区/危险区水平均低于C组,且D组低于B组(均P<0.05);B组、C组、D组小鼠的HIF-1α蛋白表达水平均高于A组,且D组低于B组、C组,B组低于C组;C组小鼠的α-微管蛋白表达水平高于A组、B组、D组(均P<0.05),但A组、B组、D组小鼠的α-微管蛋白表达水平比较差异无统计学意义(均P>0.05)。结论:上调HIF可改善心肌I/R损伤小鼠的心脏功能,减少心肌梗死面积,改善HIF-1α及α-微管蛋白表达。

川芎多糖通过AMPK/Nrf2信号通路减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤

目的探讨川芎多糖(LCPS)对大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)及腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/核因子红系2相关因子2(Nrf2)信号通路的影响。方法将120只SD大鼠随机均分为假手术组、模型组、LCPS组、AMPK激动剂AICAR组和LCPS+AICAR组。除假手术组外,其他各组构建MIRI大鼠模型。超声影像系统检测各组心功能指标,ELISA法检测血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、心肌肌钙蛋白(cTnI)含量,计算心脏指数,TTC染色法检测心肌梗死面积,HE染色法观察心肌组织病理学改变,分光光度法检测丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,Western blotting法检测心肌组织AMPK、磷酸化(p)-AMPK、Nrf2、血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白表达。结果LCPS能够明显改善MIRI大鼠心功能及心肌组织病变,减少心肌梗死面积,降低MDA、心脏指数以及血清LDH、CK-MB、cTnI水平,升高SOD、GSH-Px活性、p-AMPK/AMPK比值以及Nrf2、HO-1表达水平。LCPS联合AICAR对各指标的影响优于LCPS组和AICAR组(P<0.05)。结论LCPS具有减轻大鼠MIRI的作用,其机制可能与激活AMPK/Nrf2信号通路、抑制氧化应激有关。

基于转录组测序探讨加味桃红四物汤缓解大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用机制

目的 基于转录组测序研究加味桃红四物汤对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响及作用机制。方法 将15只SPF级大鼠随机分为假手术组、模型组和加味桃红四物汤组,每组5只,加味桃红四物汤组予加味桃红四物汤预灌胃5 d,假手术组和模型组灌胃等体积蒸馏水,建立心肌缺血再灌注损伤大鼠模型。心脏超声检测大鼠心功能,试剂盒检测血清氧化应激和炎症因子含量,TUNEL染色检测心肌细胞凋亡,取心肌组织进行转录组测序,对差异基因进行韦恩图及热图分析,对共同差异基因进行GO功能分析和KEGG通路富集分析。RT-qPCR验证差异基因PTX3和EGR2表达。结果 与假手术组比较,模型组大鼠射血分数(EF)和短轴缩短率(FS)明显降低(P<0.01),心肌组织细胞凋亡率及血清乳酸脱氢酶(LDH)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、IL-6含量明显升高(P<0.01),SOD活性和IL-10含量明显降低(P<0.01);与模型组比较,加味桃红四物汤组大鼠EF和FS明显升高(P<0.05),心肌组织细胞凋亡率及血清肌酸激酶同工酶、LDH、TNF-α、IL-1β、IL-6含量明显降低(P<0.01),SOD活性和IL-10含量明显升高(P<0.01)。转录组测序得到假手术组与模型组差异基因4 227个(2 259个上调、1 968个下调),假手术组与加味桃红四物汤组差异基因1 933个(1301个上调、632个下调),模型组与加味桃红四物汤组差异基因94个(46个上调、48个下调),3组共同差异基因35个,差异基因主要富集到流体剪切力和动脉粥样硬化、泛素介导的蛋白质降解、C型凝集素受体信号通路、鞘脂类信号通路、细胞周期、趋化因子信号通路、脂质和动脉粥样硬化等信号通路。RT-qPCR验证结果显示,模型组心肌组织PTX3和EGR2基因表达较假手术组明显升高(P<0.01),加味桃红四物汤组PTX3和EGR2基因表达较模型组明显降低(P<0.01)。结论 加味桃红四物汤对心肌缺血再灌注损伤具有缓解作用,表现为改善模型大鼠心功能、减少细胞凋亡和炎症因子释放及减轻氧化应激水平,其机制可能与调控PTX3和EGR2基因表达有关。

“柴胡三参胶囊”预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其与MLK3-p38 MAPK-NLRP3信号通路的关系

目的:探讨柴胡三参胶囊通过MLK3-p38 MAPK-NLRP3信号通路减轻炎症反应对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠心脏的保护作用。方法:将72只SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、地尔硫卓组(每日给药量:51 mg/kg)及柴胡三参胶囊低、中、高剂量组(每日给药量:216、432、864 mg/kg),每组12只。各给药组灌胃给予相应药液,假手术组、模型组灌胃等体积生理盐水,均每日1次,连续7 d。预处理结束后,除假手术组外,其余各组大鼠采用结扎冠状动脉左前降支并再灌注的方法建立MIRI模型,再灌注结束后立即取血、取全心,假手术组只穿线,不结扎。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测每组6只大鼠血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)含量,苏木素-伊红(HE)染色法观察每组3只大鼠心肌组织病理变化,2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法观察每组5只大鼠心肌梗死范围,蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测每组3只大鼠心肌组织中混合谱系酶3(MLK3)、p38丝裂原激活蛋白激酶(p38 MAPK)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、白细胞介素-1β(IL-1β)蛋白表达水平。结果:模型组大鼠血清CK-MB、cTnI含量显著高于假手术组(P<0.01),心肌细胞排列紊乱、肥大水肿,心肌梗死面积占比明显大于假手术组(P<0.01),缺血区心肌组织炎症相关蛋白MLK3、p38 MAPK、NLRP3、IL-1β的表达均显著高于假手术组(P<0.01,P<0.05)。各给药组大鼠血清CK-MB、cTnI水平均显著低于模型组(P<0.01);柴胡三参胶囊中、高剂量组与地尔硫卓组大鼠血清CK-MB、cTnI水平显著低于柴胡三参胶囊低剂量组(P<0.01),而此3组大鼠上述指标组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。柴胡三参胶囊中、高剂量组及地尔硫卓组大鼠心肌细胞排列较整齐,心肌细胞水肿范围少于模型组,其中以柴胡三参胶囊高剂量组及地尔硫卓组改善最明显。柴胡三参胶囊中、高剂量组与地尔硫卓组大鼠心肌梗死面积占比明显低于模型组(P<0.01),3组大鼠心肌梗死面积占比组间比较差异无统计学意义(P>0.05),柴胡三参胶囊中剂量组、地尔硫卓组大鼠心肌梗死面积占比明显低于低剂量组(P<0.01)。柴胡三参胶囊中、高剂量组及地尔硫卓组大鼠心肌组织MLK3、p38 MAPK、NLRP3、IL-1β蛋白表达水平明显低于模型组和柴胡三参胶囊低剂量组(P<0.01),其中地尔硫卓组MLK3蛋白表达明显低于柴胡三参胶囊高剂量组(P<0.05),NLRP3蛋白表达明显低于柴胡三参胶囊中、高剂量组(P<0.01)。结论:柴胡三参胶囊中、高剂量预处理可减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤,其可能通过MLK3-p38 MAPK-NLRP3信号通路减轻炎症反应实现对MIRI模型大鼠的心肌保护作用。

温阳振衰颗粒调控miR-155/p38MAPK途径减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤机制研究

目的:研究温阳振衰颗粒调控miR-155/p38MAPK途径减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的作用机制。方法:成年雄性SD大鼠随机分为阴性对照组、阴性对照+MIRI组、miR-155抑制剂+MIRI组、miR-155模拟物+MIRI组、对照组、MIRI组、中药组、中药+miR-155抑制剂组,建立MIRI模型,给予温阳振衰颗粒灌胃干预,miR-155抑制剂或模拟物局部注射。比较各组磷酸肌酸激酶同工酶(CK-MB)及乳酸脱氢酶(LDH)含量、miR-155及p-p38MAPK表达、炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白介素-6(IL-6)含量。结果:与对照组比较,MIRI组血清CK-MB、LDH含量及心肌p-p38MAPK表达、TNF-α、IL-6含量明显增加,心肌miR-155表达明显减少(均P<0.05);与MIRI组比较,中药组血清CK-MB、LDH含量及心肌p-p38MAPK表达、TNF-α、IL-6含量明显减少,心肌miR-155表达明显增加(均P<0.05);与中药组比较,中药+miR-155抑制剂组血清CK-MB、LDH含量及心肌p-p38MAPK表达、TNF-α、IL-6含量明显增加,心肌miR-155表达明显减少(均P<0.05);与阴性对照+MIRI组比较,miR-155抑制剂+MIRI组心肌损伤加重,miR-155模拟物+MIRI组心肌损伤减轻(均P<0.05)。结论:温阳振衰颗粒通过调控miR-155/p38MAPK途径减轻大鼠MIRI,miR-155能够在心肌MIRI过程中靶向p38MAPK,抑制炎症并减轻心肌损伤。

半夏有效成分环阿屯醇对小鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究

目的探究半夏有效成分环阿屯醇对小鼠心肌缺血再灌注损伤(Myocardial ischemia reperfusion injury,MIRI)的影响及作用机制。方法在体外实验中,从1~3日龄的SD雄性大鼠乳鼠上提取原代心肌细胞,分为对照(Control)组、缺氧/复氧(Hypoxia/Reoxygenation,H/R)组、环阿屯醇低剂量组(3μmol·L^(-1))、环阿屯醇高剂量组(10μmol·L^(-1))和SB203580组。各组预给药干预后,在缺氧培养箱中缺氧培养3 h,正常培养箱中复氧培养3 h复制缺氧/复氧模型。利用CCK-8检测各组心肌细胞活力,流式法检测细胞凋亡率,Western blot检测p38 MAPK、p-p38 MAPK的表达水平。在体内实验中,将7周龄的雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照(Control)组,缺血/再灌注损伤(Ischemia/Reperfusion,I/R)组,环阿屯醇低、中、高(0.2、0.5、1.0 mg·kg^(-1))剂量组。手术前7 d连续给药,通过小鼠心脏冠状动脉左前降支(Left anterior descending artery,LAD)结扎30 min,再灌注24 h的方式制备MIRI模型。小动物超声心动图检测左心室射血分数(Left ventricular ejection fraction,LVEF)、小鼠心输出量(Cardiac output,CO)、左室缩短分数(Left ventricular fractional shortening,LVFS);TTC染色法检测各组小鼠心脏的缺血梗死面积的变化;HE染色法观察各组小鼠心肌组织的变化;Western blot检测小鼠心肌组织中p38 MAPK、p-p38 MAPK、IL-6及TNF-α的表达水平;ELISA法检测小鼠血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌钙蛋白I(cTnI)、细胞白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。结果体外实验中,与H/R组相比,环阿屯醇预处理组和SB203580组的心肌细胞活力有明显提高(P<0.05),细胞凋亡率有所下降(P<0.05),可以下调IL-6表达水平(P<0.01),降低p-p38 MAPK/p38 MAPK的比值(P<0.05,P<0.01)。体内实验证明,与I/R组相比,中、高剂量环阿屯醇预处理可以显著提高LVEF、LVFS及CO值(P<0.05,P<0.01),减少心肌缺血梗死面积(P<0.05),提高心肌功能,有效保护心肌组织纤维,下调小鼠血清中CK-MB、LDH、cTnI、IL-6和TNF-α水平(P<0.05);环阿屯醇高剂量组降低p-p38 MAPK/p38 MAPK的比值(P<0.05),减少IL-6和TNF-α的表达水平(P<0.05)。结论环阿屯醇预处理可以保护小鼠心功能,减轻MIRI,其作用机制可能与抑制p38 MAPK磷酸化,减轻炎性反应有关。

miR-330-5p通过抑制MAPK通路发挥对心肌缺血再灌注的保护作用

目的:探究miR-330-5p保护心肌缺再灌注的分子机制及其对丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的影响。方法:体外培养人心肌细胞AC16,转染miR-330-5p模拟剂(mimic),在1%O_(2)+5%CO_(2)+94%N_(2)条件下构建心肌细胞氧糖剥夺/复氧(OGD/R)模型,以模拟心肌缺血再灌注。采用流式细胞技术检测细胞凋亡;采用ELISA法检测心肌细胞中4-羟基壬烯醛(4-HNE)、丙二醛(MDA)的含量;采用WesternBlot法检测凋亡相关因子Bcl-2相关的X蛋白(Bax)和B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)的蛋白表达、乙醛脱氢酶2(ALDH2)和MAPK信号通路相关因子脯氨酸导向的细胞外调节激酶(ERK1/2)、c-Jun氨基末端激酶1(JNK1)和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)的蛋白表达。结果:在OGD/R模型中,心肌细胞凋亡率增加,4-HNE、MDA含量均显著升高,而ALDH2则显著降低;凋亡标志Bax显著升高,而Bcl-2显著降低。转染miR-330-5p mimic后,心肌细胞中4-HNE、MDA显著降低,ALDH2可见显著升高,且细胞凋亡显著抑制。对于MAPK信号通路,在转染miR-330-5pmimic后,ERK1/2、JNK1、p38MAPK蛋白表达均显著降低。结论:miR-330-5p通过抑制MAPK信号通路,调控ALDH2表达,抑制心肌缺血再灌注过程中心肌细胞的氧化应激和细胞凋亡,从而保护心肌细胞。

小檗碱调控TLR4/p38MAPK通路促进脑缺血再灌注大鼠神经功能恢复

目的 观察小檗碱对脑缺血再灌注损伤大鼠的神经保护作用并探索其作用机制。方法 SD大鼠45只,随机分为假手术组(sham)、模型组(MCAO/R)、小檗碱治疗组(Ber)。通过线栓法建立脑缺血再灌注模型。Ber组给药剂量为140 mg/kg。给药28 d后应用Zea-longa评分和旋转棒实验评估大鼠神经功能。给药24 h后通过TTC染色观察并统计梗死面积。给药24 h后取材大鼠脑组织,应用免疫荧光染色观察白介素1β(interleukin 1β,IL-1β)的表达,应用免疫酶联吸附实验(enzyme linked immunosorbent assa, ELISA)检测IL-1β、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、和白细胞介素-6(interleukin 6,IL-6)、白细胞介素-10(interleukin 10,IL-10)的含量,通过Western Blot方法检测各组脑组织中TLR4、P-p38MAPK、p38MAPK蛋白含量。结果 Zea-longa评分和旋转棒实验结果证明小檗碱显著改善脑缺血再灌注损伤大鼠的运动能力。TTC染色结果表明小檗碱减少梗死面积。免疫荧光染色和ELISA实验结果证实小檗碱能够减少缺血损伤脑组织中促炎因子IL-1β、TNF-α、IL-6的含量,增加抗炎因子IL-10的含量。Western Blot结果提示小檗碱影响TLR4/p38MAPK通路蛋白的表达。结论 小檗碱通过TLR4/p38MAPK信号通路抑制MCAO/R大鼠脑组织中炎症因子的分泌,促进缺血再灌注大鼠神经功能恢复。

基于p38MAPK/SERCA2α通路观察羟基红花黄色素A对大鼠心肌缺血/再灌注损伤的保护作用

目的:基于p38丝裂原活化蛋白激酶/肌质网Ca^(2+)-ATP酶2α(p38MAPK/SERCA2α)通路观察羟基红花黄色素A(HSYA)对大鼠心肌缺血/再灌注损伤(MIRI)的保护作用。方法:120只SD雄性大鼠随机分为假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)、HSYA 5 mg/kg组、HSYA 10 mg/kg组、HSYA 20 mg/kg组及p38MAPK信号通路抑制剂组(SB203580组)。5、10、20 mg/kg HSYA组大鼠分别灌胃给予对应剂量HSYA,SB203580组给予100µg/kg SB203580,末次灌胃结束后制作MIRI模型,Sham组仅切开左胸暴露心脏不结扎。缺氧4 h、复氧12 h建立H9C2心肌细胞OGD/R损伤模型并分为6组:对照组(Control组)、缺氧复氧模型组(OGD/R组)、5、10、20µmol/L HSYA组及SB203580组,Control组、OGD/R组不进行药物干预。TTC染色测定大鼠心肌梗死面积;超声心动图检测大鼠心脏功能;HE染色观察大鼠心肌组织病理学改变;Annexin V-FITC/PI双染法检测大鼠心肌组织和H9C2细胞凋亡;检测大鼠血清氧化应激及心肌酶指标;ELISA检测大鼠心肌组织和H9C2细胞炎症因子含量;CCK8及EdU染色检测H9C2细胞增殖能力;qRT-PCR检测心肌组织和H9C2细胞p38MAPK、SERCA2αmRNA表达;Western blot检测大鼠心肌组织和H9C2细胞p38MAPK、p-p38MAPK、SERCA2α、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的蛋白表达。结果:10µmol/L或10 mg/kg HSYA能够提高左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS)、Bcl-2、SERCA2α水平,降低肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、天冬氨酸转氨酶(AST)、超氧化物歧化酶(SOD)活力,降低Bax、肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)、丙二醛(MDA)、TNF-α、IL-1β、IL-6、p-p38MAPK/p38MAPK水平,促进心肌细胞增殖,抑制细胞凋亡,减少心肌梗死面积,改善心肌损伤。结论:HSYA能够抑制心肌细胞凋亡、氧化应激及炎症,从而减轻MIRI,其机制可能与p38MAPK/SERCA2α信号通路有关。

黄葵素通过核因子κB信号改善老年糖尿病大鼠心肌缺血再灌注的研究

目的:探讨黄葵素对糖尿病心肌缺血再灌注老年大鼠的影响及其作用机制。方法:将老年大鼠按照简单随机法分为假手术组(只穿线不结扎)、模型组(构建糖尿病心肌缺血再灌注模型)、黄葵素低剂量组(75 mg/kg的黄葵素)、黄葵素高剂量组(150 mg/kg的黄葵素)、抑制剂组(10 mg/kg的核因子κB抑制剂BAY11-7082),高剂量+抑制剂组(150 mg/kg的黄葵素+10 mg/kg BAY11-7082)。观察比较大鼠心功能指标、心肌梗死面积、血清指标含量、心肌细胞凋亡率、心肌组织相关蛋白表达。结果:与模型组比较,黄葵素低剂量、黄葵素高剂量组、抑制剂组、高剂量+抑制剂组大鼠心肌梗死面积、心肌肌钙蛋白T(cTnT)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、原位末端转移酶标记法(Tunel)阳性细胞率、磷酸化核因子κB(p-NF-κB p65)、裂解胱天蛋白酶-3(Cl-caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)水平均显著降低(均P<0.05),左室射血分数(LVEF)、核因子κB抑制蛋白(IκBα)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)水平均显著升高(均P<0.05);与高剂量组比较,高剂量+抑制剂组大鼠心肌梗死面积、cTnT、CK-MB、LDH、MDA、Tunel阳性细胞率、p-NF-κB p65、Cl-caspase-3、Bax水平均显著降低(均P<0.05),LVEF、IκBα、Bcl-2水平均显著升高(均P<0.05)。结论:黄葵素可能通过调节核因子κB信号抑制心肌细胞凋亡、氧化应激改善糖尿病心肌缺血再灌注老年大鼠心功能。

吗啡后处理经miR-9-5p/HSP90调控线粒体自噬减轻心肌缺血再灌注损伤的机制研究

目的深入挖掘吗啡后处理(M postC)保护心肌缺血再灌注损伤(MI/RI)心肌的分子作用机制。方法选取42只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、假手术组、MI/RI组、MI/RI+M postC组。建立MI/RI小鼠模型并给予M postC。2,3,5-三苯基四唑氯化物(TTC)染色检测小鼠心肌梗死体积。Ca^(2+)Green-5N荧光探针法检测小鼠左心室心肌组织来源线粒体通透性转换孔(mPTP)的开放。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测左心室心肌组织中miR-9-5p和热休克蛋白90(HSP90)AA mRNA水平。Western blot试验检测左心室心肌组织中HSP90AA蛋白质及线粒体自噬相关蛋白因子PINK1和E 3泛素连接酶的蛋白质水平。生物信息学分析、双荧光素酶报告基因分析验证miR-9-5p和HSP90AA的序列互作。结果与假手术组比较,MI/RI组心肌梗死体积百分比增大,差异有统计学意义(P<0.05);与MI/RI组比较,MI/RI+M postC组心肌梗死体积百分比降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与假手术组比较,MI/RI组的T组Ca^(2+)水平信号升高(P<0.05);与MI/RI组比较,MI/RI+M postC组的T组Ca^(2+)水平信号降低至基线水平(P<0.05)。与假手术组比较,MI/RI组左心室心肌组织miR-9-5p RNA相对表达水平升高(P<0.05),HSP90AA mRNA和蛋白质相对表达水平均降低(P<0.05),PINK1和E 3泛素连接酶蛋白质相对表达水平均升高(P<0.05)。与MI/RI组比较,MI/RI+M postC组左心室心肌组织miR-9-5p RNA相对表达水平降低(P<0.05),HSP90AA mRNA和蛋白质相对表达水平均升高(P<0.05),PINK1和E 3泛素连接酶蛋白质相对表达水平均升高(P<0.05)。与共转染miR-9-5p mimic和HSP90AA-MUT的细胞比较,共转染miR-9-5p mimic和HSP90AA-WT的细胞内荧光素酶活性降低,差异无统计学意义(P>0.05)。结论M postC经miR-9-5p/HSP90轴可促进线粒体自噬,减轻心肌缺血再灌注损伤。

右美托咪定减轻糖尿病心肌缺血/再灌注大鼠心肌损伤及炎性反应

目的探究右美托咪定(DEX)对糖尿病心肌缺血/再灌注(MI/R)大鼠心肌损伤及炎性反应的影响和机制。方法将大鼠分为假手术(sham)组、模型(model)组[高脂高糖喂养联合注射链脲佐菌素复制2型糖尿病(T2DM)模型,再结扎冠状动脉复制MI/R损伤模型]、DEX组(T2DM模型大鼠尾静脉注射10μg/kg DEX)、antagomir NC组(T2DM模型大鼠尾静脉注射10μg/kg DEX和antagomir NC)和miR-490-3p antagomir组(T2DM模型大鼠尾静脉注射10μg/kg DEX和miR-490-3p antagomir)。RT-qPCR检测miR-490-3p和叉头框蛋白O1(FOXO1)mRNA的表达;血糖仪测量大鼠空腹血糖(FBG);ELISA测定空腹胰岛素(FINS)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平;HE染色观察心肌组织病理损伤;TTC染色测定心肌梗死面积;双荧光素酶报告基因实验验证miR-490-3p与FOXO1关系;Western blot检测心肌组织中FOXO1蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组FBG、FINS、CK-MB、LDH、IL-1β、TNF-α、心肌梗死面积、FOXO1 mRNA及蛋白表达升高,miR-490-3p表达降低(P<0.05);与模型组比较,DEX组大鼠FBG、FINS、CK-MB、LDH、IL-1β、TNF-α、心肌梗死面积、FOXO1 mRNA及蛋白表达降低,miR-490-3p表达升高(P<0.05);下调miR-490-3p可明显减弱DEX对模型组大鼠心肌损伤及炎性反应的改善作用(P<0.05);FOXO1与miR-490-3p存在靶向调控关系。结论DEX可能通过调节miR-490-3p/FOXO1轴,抑制炎性反应,减轻糖尿病模型大鼠MI/R引起的心肌损伤。

黄杞总黄酮对心力衰竭大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用研究

目的:探讨黄杞总黄酮对心力衰竭(HF)大鼠心肌缺血再灌注损伤(IRI)的保护作用。方法:60只雄性SD大鼠建模成功后按随机数表法分为5组:假手术组、IRI模型组、低剂量黄杞总黄酮(TFER)组、中剂量TFER组、高剂量TFER组,每组12只,连续灌胃7d。使用心电图和超声心动图检测大鼠S-T段波幅、左室短轴缩短率(LVFS)、左室射血分数(LVEF)、左室内压最大上升速率(+dp/dt_(max))、左室内压最大下降速率(-dp/dt_(max)),使用苏木精-伊红(HE)染色法检测大鼠心肌梗死面积百分比,使用Masson染色法检测大鼠心肌胶原附着面积百分比,使用比色法检测超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA),使用蛋白免疫印迹(Western blot)法检测核因子E2相关因子2(Nrf2)、Kelch样ECH关联蛋白1(Keap1)表达水平。结果:与IRI模型组相比,使用TFER灌胃的IRI大鼠心电图S-T段得到显著修复,心肌梗死面积百分比、胶原附着面积百分比、MDA、Keap1表达显著降低,LVFS、LVEF、+dp/dt_(max)比值、-dp/dt_(max)比值、SOD、GSH-Px、Nrf2表达显著提高,差异均有统计学意义(P<0.05),其中高剂量TFER组上述指标差异最显著(P<0.05)。结论:黄杞总黄酮对HF大鼠IRI有保护作用,其机制可能与减少心肌梗死面积、改善心功能、缓解氧化应激反应有关。

加味瓜蒌薤白汤对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的:观察加味瓜蒌薤白汤对心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemia reperfusion injury,MIRI)大鼠心功能指标和心肌组织病理形态的影响。方法:将64只Wistar大鼠随机分为对照组11只、模型组11只、加味瓜蒌薤白汤低剂量组(1.134 g·kg^(-1))11只、中剂量组(2.268 g·kg^(-1))11只、高剂量组(4.536 g·kg^(-1))10只及复方丹参滴丸组(86 mg·kg^(-1))10只。除对照组外,其余大鼠采用结扎冠状动脉的方式建立MIRI模型。造模成功后,各药物组以相应药物灌胃,对照组和模型组给予生理盐水灌胃,每日1次,共7 d。采用ELISA法检测大鼠血清肌钙蛋白T(cardiac troponin T,CTNT)、内皮素-1(endothelin-1,ET-1)、血栓素B2(thromboxane B2,TXB2)含量;采用超声心动图检测大鼠左室舒张末期内径(left ventricular internal dimension diameter,LVIDd)、左室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)、左室收缩末期内径(left ventricular internal systolic diameter,LVIDs)、心输出量(cardiac output,CO)、左室舒张末期容积(left ventricular internal diastolic volume,LVEDV)、每搏输出量(stroke volume,SV)、左室收缩末期容积(left ventricular internal systolic volume,LVESV);采用HE染色观察大鼠心肌组织病理形态。结果:与对照组比较,模型组大鼠血清CTNT、ET-1和TXB2含量升高(P<0.05);与模型组比较,加味瓜蒌薤白汤中剂量组和复方丹参滴丸组大鼠血清CTNT、ET-1和TXB2含量降低(P<0.05)。与对照组比较,模型组大鼠LVIDd、LVEDV增加(P<0.01),且LVIDs、LVESV、SV、CO、LVEF减少(P<0.05);与模型组比较,加味瓜蒌薤白汤中剂量组和复方丹参滴丸组大鼠LVIDd、LVEDV减少(P<0.05),且LVIDs、LVESV、SV、CO、LVEF增加(P<0.05)。HE染色结果显示,对照组大鼠心肌细胞排列整齐,无炎症细胞浸润;模型组大鼠大量心肌纤维呈不规则排列,心肌间质水肿和坏死;加味瓜蒌薤白汤高剂量组大鼠心肌细胞轻度肿胀,肌原纤维排列较规则;复方丹参滴丸组大鼠心包膜下心肌细胞坏死,中性粒细胞浸润,间质充血水肿。结论:加味瓜蒌薤白汤对大鼠MIRI具有显著的保护作用。

p38 MAPK抑制物对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及凋亡信号通路的影响

目的探讨p38MAPK抑制物SB20358（SB）对心肌缺血再灌注（I／R）损伤的保护作用及凋亡信号通路的影响。方法选择45只250～300g雄性SD大鼠，通过阻断其左冠状动脉前降支（LAD）30min再灌注180min制备L／R损伤模型。随机分3组（n=15）：溶剂对照组（Vehicle组）、低剂量SB预处理组（SB—L组）和高剂量SB预处理组（sB—H组）；同时选取15只同周龄SD大鼠仅穿线但不结扎（Sham组）。SB—L组和sB—H组分别于LAD结扎前30min注射50μg／kg、100μg／kgSB，其余两组注射等体积的生理盐水。分别在术前（T0）、缺血30min后（T2）、再灌注60min（T2）、120min（T3）及180rain后（T4）检测各组血浆肿瘤坏死因子（TNF-α）水平及I／R后的心功能情况[舒张末期压力（LVEDP）、左室收缩期平均压（LVSP）、短轴缩短率（Fs）和射血分数（EF）]，处死大鼠并通过1Trc染色分析缺血程度和梗死程度，将心脏组织包埋并采用HE染色观察各组的心肌形态学变化，同时采用Westernblot检测心肌梗死区p38及其磷酸化形式的P—p38的蛋白水平。结果与Sham组相比，Vehicle组除T0外的IZR其余时间点的TNF-α水平均升高，LVSP、FS和EF均降低，LVEDP、心肌P—p38／p38值及缺血和梗死程度均升高（P〈0．05），心肌肌纤维出现断裂溶解及坏死，心肌间质出现水肿且间隙增大，出现坏死灶；给予sB处理后可减轻以上异常指标及心肌病理改变，与Vehicle组的差异均有统计学意义，但仍与Sham组有差异（P〈0，05）。SB—H组的改善效果优于sB—L组（P〈0．05）。结论sB对大鼠心肌L／R损伤有改善作用，可降低心肌缺血及梗死程度，改善心功能和炎症反应并抑制p38MAPK信号通路活化。

电针内关预处理对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌PI3K/Akt通路的影响

目的:观察电针内关穴预处理对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)模型大鼠心肌组织自噬相关通路磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)的影响,探讨电针对MIRI的治疗作用机制。方法:48只SD大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组、针刺组,每组12只。采用冠状动脉左前降支结扎法建立MIRI模型。针刺组电针双侧“内关”穴,30 min/次,1次/d,连续干预7 d。记录不同组大鼠在造模前、结扎后40 min、松解后1 min、再灌注60 min的心电图并分析其ST段电位变化。HE染色观察心肌明显损伤部位病理变化;免疫组化法观察大鼠心肌组织PI3K、Akt表达。Western blotting法检测心肌组织PI3K、Akt、磷酸化Akt(p-Akt)表达水平,并计算各组p-Akt/Akt比值。结果:模型组和针刺组结扎后40 min与松解后1 min的ST段电位均较假手术组升高,差异有统计学意义(均P<0.05)。模型组和针刺组松解后1 min、再灌注60 min时心电图ST段电位均较结扎后40 min降低,差异有统计学意义(均P<0.05)。针刺组再灌注60 min的心电图ST段电位较模型组低,差异无统计学意义(P>0.05)。空白组心肌组织肌纤维呈红染,排列紧密,结构完整;假手术组心肌纤维呈规则排列,细胞核呈现蓝色,形态无异常,无明显病理变化。模型组心肌纤维断裂、紊乱,肌间隙明显增宽,间质可见出血,心肌纤维间散在炎性细胞浸润。针刺组无明显充血、水肿及炎性细胞浸润,可见少量心肌纤维断裂以及肌间隙增宽,但较模型组有较大程度减轻。从免疫组化结果来看,与空白组、假手术组相比较,模型组心肌组织中PI3K、Akt阳性表达较高,差异有统计学意义(均P<0.01)。针刺组心肌组织中PI3K、Akt阳性表达低于模型组,差异有统计学意义(均P<0.01)。从Western blotting检测结果来看,各组大鼠的Akt蛋白水平比较,差异无统计学意义(均P>0.05)。模型组PI3K、p-Akt表达水平和p-Akt/Akt比值均低于空白组和假手术组,差异有统计学意义(均P<0.05)。针刺组PI3K、p-Akt表达水平和p-Akt/Akt比值均高于模型组,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论:电针内关预处理可通过激活MIRI大鼠心肌细胞PI3K/Akt通路抑制过度自噬,从而发挥对MIRI的治疗作用。

从肝治心组方调控SLC7A11/GPX4介导的铁死亡对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响

目的基于SLC7A11/GPX4介导的铁死亡途径探讨从肝治心组方对心肌缺血再灌注损伤的保护作用及机制。方法45只SD大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组、从肝治心组方组和地尔硫?组,制备心肌缺血再灌注大鼠模型,并予相应药物灌胃14 d。ELISA检测血清丙二醛(MDA)、肌钙蛋白T(c TnT)、超氧化物歧化酶(SOD)含量和肌酸激酶同工酶(CK-MB)活性,生化法检测血清谷胱甘肽(GSH)含量,HE染色观察心肌组织病理形态,透射电镜观察心肌细胞超微结构,普鲁士蓝染色观察心肌细胞铁沉积水平,免疫组化检测谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)阳性表达,Western blot和RT-PCR检测心肌组织溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、谷胱甘肽合成酶(GSS)、GPX4蛋白及m RNA表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠血清MDA、cTnT含量和CK-MB活性显著升高,SOD、GSH含量显著降低(P<0.01),心肌纤维断裂、排列紊乱,细胞肿胀伴炎性细胞浸润,胞质空泡样变性,胞膜破裂,线粒体嵴断裂、排列不规则,铁沉积显著增加(P<0.01),心肌组织SLC7A11、GSS、GPX4蛋白和mRNA表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,从肝治心组方组和地尔硫?组大鼠血清MDA、cTnT含量和CK-MB活性显著降低,SOD、GSH含量显著升高(P<0.05,P<0.01),心肌纤维排列较规则,细胞肿胀减轻,胞膜相对完整,线粒体结构改善,铁沉积显著减少(P<0.01),心肌组织SLC7A11、GPX4蛋白和mRNA表达显著升高(P<0.01)。结论从肝治心组方可改善心肌缺血再灌注大鼠心肌损伤,减少心肌组织铁沉积,其机制可能与调控SLC7A11/GPX4信号通路从而抑制铁死亡有关。

益心方调控SIRT1/PGC⁃1α信号通路改善大鼠心肌缺血再灌注损伤

目的探讨中药复方益心方改善心肌缺血再灌注损伤大鼠的作用及其机制。方法将60只清洁级Wistar大鼠随机分为4组,即假手术组、心肌缺血再灌注组(模型组)、益心方预处理+心肌缺血再灌注组(益心方组)、益心方预处理+心肌缺血再灌注+沉默信息调节因子1(SIRT1)抑制剂组(益心方+抑制剂组),每组15只。各组大鼠适应性喂养7 d后,益心方组和益心方+抑制剂组给予益心方(10 mL/kg)灌胃7 d,其余各组灌胃等体积的质量分数为0.9%的氯化钠溶液。术前3 d及术前20 min,益心方+抑制剂组尾静脉注射SIRT1抑制剂sirtinol(2 mg/kg),其余各组尾静脉注射等体积的质量分数为0.9%的氯化钠溶液。假手术组只穿线不结扎;其余各组结扎冠状动脉左前降支30 min,建立心肌缺血损伤模型,术中观察心电图变化情况。再灌注后检测心电图,观察再灌注模型是否建立成功;采用超声心动图和血流动力学检测评价各组大鼠的心功能;苏木精-伊红(HE)染色法观察心肌组织病理形态学的变化;2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法测定心肌梗死面积;原位末端转移酶标记技术(TUNEL)法检测心肌细胞凋亡指数;生化法检测各组大鼠血清中的肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组大鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、过氧化氢(H_(2)O_(2))活性;免疫组织化学法和Western blot法检测SIRT1、过氧化物酶体增殖活化受体γ辅助活化因子-1α(PGC-lα)、B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)表达情况。结果①与假手术组比较,模型组大鼠心电图ST段明显抬高,表明大鼠心肌缺血模型建立成功;超声心动图和血流动力学检测显示,模型组大鼠左心室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短率(LVFS)、左心室收缩压(LVSP)、左心室内压最大上升速率(+dp/dtmax)降低,左心室舒张末压(LVDP)、左心室内压最大下降速率(-dp/dtmax)升高(P<0.05);TTC染色结果显示,模型组大鼠心肌梗死面积增加(P<0.05);生化检测结果显示,模型组大鼠血清中CK、LDH、MDA、H_(2)O_(2)水平升高,SOD水平降低(P<0.05);免疫组织化学法和Western blot检测结果显示,模型组大鼠心肌组织中Bcl-2、SIRT1、PGC-1α表达下降,Bax表达升高(P<0.05)。②与模型组比较,益心方组心肌梗死的面积减少,LVEF、LVFS、LVSP、+dp/dtmax升高,LVDP、-dp/dtmax降低,左心室射血量增加,心功能改善(P<0.05);血清CK、LDH、MDA、H_(2)O_(2)水平降低,SOD水平升高(P<0.05);心肌组织中Bcl-2、SIRT1、PGC-1α表达升高,Bax表达降低(P<0.05)。③与益心方组比较,益心方+抑制剂组大鼠血清CK、LDH、MDA、H_(2)O_(2)水平升高,SOD水平降低(P<0.05);心肌组织中Bcl-2、SIRT1、PGC-1α表达降低、Bax表达升高(P<0.05)。结论益心方预处理能够减轻氧化应激损伤和细胞凋亡,改善心肌缺血再灌注损伤,其作用机制可能与调控SIRT1/PGC-1α信号通路相关。